聶雨杉 匡維米 黃 勇 李小雙 馬 雪 李勇軍 王永林*

1.貴州醫(yī)科大學民族藥與中藥開發(fā)應用教育部工程研究中心/省部共建藥用植物功效與利用國家重點實驗室，貴州 貴陽 550004；2.貴州醫(yī)科大學貴州省藥物制劑重點實驗室，貴州 貴陽 550004； 3. 貴州醫(yī)科大學藥學院，貴州 貴陽 550004

漢桃葉(ScheffleraleucanthaR.Viguier)為五加科植物鵝掌柴屬的帶葉莖枝或干燥莖枝，主要分布于我國廣西、貴州、云南、海南、廣東等地，多生于山谷或陰濕疏林中。性苦味甘，具有祛風止痛、舒經(jīng)活絡等功效，是貴州省少數(shù)民族常用藥材[1-3]。藥理研究[3-4]表明，漢桃葉具有抗癌、抗氧化、抗色素沉著、抗炎、抗菌、抗病毒等生物活性。該藥材的化學成分主要是齊墩果烷型的五環(huán)三萜及其苷類，另外還含有甾醇、長鏈烯烴、有機酸、揮發(fā)油、倍半萜等成分[5-9]。目前關(guān)于漢桃葉藥材的質(zhì)量控制尚不完善，在2003年版《貴州省中藥材、民族藥材質(zhì)量標準》中，漢桃葉質(zhì)量標準項下僅有性狀描述及莖橫切面顯微鑒別，其質(zhì)量標準相對簡單。為完善其質(zhì)量控制，本研究從漢桃葉藥材的顯微鑒別、薄層鑒別、水分、總灰分、醇溶性浸出物等方面進行研究，建立其質(zhì)量標準，以期為其質(zhì)量控制提供實驗依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 CX41光學生物顯微鏡(S60明美顯微成像系統(tǒng)，奧林巴斯公司)；REPROSTAR3薄層數(shù)碼成像系統(tǒng)(瑞士CAMAG)；KQ5200B超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)；EL240電子天平(梅特勒-托利多儀器上海有限公司)；KSW4馬弗爐(上海路達實驗儀器有限公司)；DK-98-Ⅱ恒溫水浴鍋(天津泰斯特有限公司)等。

1.2 藥材與試劑 漢桃葉樣品(見表1)均由貴州益佰制藥股份有限公司提供，經(jīng)貴州中醫(yī)藥大學魏升華教授鑒定為五加科鵝掌柴屬植物白花鵝掌柴ScheffleraleucanthaR. Viguier. 的帶葉莖枝或干燥莖枝，憑證標本保存于貴州醫(yī)科大學貴州省藥物制劑重點實驗室，其藥材圖如圖1所示。

圖1 漢桃葉藥材圖

漢桃葉對照藥材(批號：121575-201503，中國食品藥品鑒定研究院)；水合氯醛(批號：20161121，天津市大茂化學試劑廠)；丙三醇(批號：20190302，天津市北辰方正試劑廠)；薄層色譜硅膠板G(批號：20201107，青島海洋化工有限公司)；聚酰胺薄膜(批號：20201214，浙江省臺州市路橋四甲生化塑料廠)；丙酮、硫酸(批號分別為：20200421、20180524，國藥集團化學試劑有限公司)；甲醇、石油醚(批號分別為：P1595640、P1790623，上海泰坦科技有公司)；甲酸(批號：20151013，天津市科密歐化學試劑有限公司)；乙酸乙酯、冰醋酸(批號分別為：1812101、1703101，上海申博化工有限公司)。上述試劑均為分析純，實驗用水為超純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 顯微鑒別

2.1.1 漢桃葉橫切面特征 壁呈深棕色，木栓層為10余列細胞，皮層緊接木栓細胞，近木栓層處有1～3列石細胞，排列成環(huán)，內(nèi)側(cè)有散在樹脂道。中柱鞘纖維束呈類圓形或半圓形，韌皮部較窄，有分泌道及纖維束，木質(zhì)部導管直徑約為40～60 μm，呈多角形，射線寬1～4列細胞，髓部寬廣，外側(cè)少有分泌道，薄壁細胞含有草酸鈣簇晶及方晶。如圖2所示。

圖2 漢桃葉橫切圖

1.纖維；2. 草酸鈣方晶；3.草酸鈣簇晶；4.木栓細胞；5.淀粉粒；6.樹脂道；7.石細胞；8.導管圖3 漢桃葉粉末特征圖

2.1.2 漢桃葉粉末特征 本品粉末棕黃色。纖維斷寬梭形或長梭形，長200 μm以上，直徑20～70 μm；多見草酸鈣方晶，直徑10～60 μm，亦可見草酸鈣簇晶；木栓細胞呈類方形；淀粉粒為橢圓形或類圓形，多為單粒，直徑8～50 μm，也有較多復粒，多為2～5粒組成；樹脂道碎片較多，內(nèi)含黃色塊狀或滴狀分泌物；石細胞呈類圓形、長方形，孔溝明顯，直徑10～120 μm；導管易見，多為梯紋導管，亦可見螺紋導管。如圖3所示。

1～5.供試品溶液；6. 對照藥材溶液

2.2 薄層鑒別

2.2.1 薄層色譜方法的建立 取本品粉末約1 g，加入20 mL 70%乙醇水溶液，超聲處理30 min，過濾，將濾液蒸干，所得殘渣用1 mL甲醇溶解，即得供試品溶液。另取0.5 g漢桃葉對照藥材，按上述方法制備對照藥材溶液。參照《中國藥典》2020年版四部通則0502 薄層色譜法試驗，分別吸取5 μL上述2種溶液，點于同一聚酰胺板上，用甲醇-水-甲酸(3.5∶1.5∶0.05, V/V/V)展開，取出，晾干，置于紫外光燈 (365 nm)下檢視。供試品溶液色譜中，在與對照藥材溶液色譜相應位置上，顯相同顏色的斑點。如圖4所示。

2.3 檢查

2.3.1 水分測定 參照 《中國藥典》2020年版四部通則0832水分測定法(第二法 烘干法)測定。5批漢桃葉中含水量為4.90%～6.15%，平均值5.73%，故暫定本品水分不得過7.0%。見表1。

2.3.2 總灰分測定 參照《中國藥典》2020年版四部通則2302 灰分測定法測定。5批漢桃葉中總灰分為3.27%～4.95%，平均值4.24%，暫定本品總灰分不得過6.0%。見表1。

2.3.3 醇溶性浸出物測定 參考《中國藥典》2020年版四部通則2201浸出物測定法(熱浸法)，以70%乙醇為溶劑進行浸出物測定。5批漢桃葉70%醇溶性浸出物為7.28%～8.55%，平均值7.86%，暫定本品醇溶性浸出物不得少于6.0%。見表1。

表1 漢桃葉藥材的水分、總灰分和醇溶性浸出物的測定結(jié)果

3 討論

在探索薄層色譜條件時，分別以石油醚-乙酸乙酯-甲酸、石油醚-丙酮、氯仿-乙酸乙酯-甲酸乙酸、氯仿-甲醇-甲酸、乙酯-甲醇-甲酸等體系為展開劑，用青島海洋硅膠GF254、G板進行分離，但該方法分離效果差，斑點成形性不好，且色素干擾明顯，可能與漢桃葉的主要成分是五環(huán)三萜及其苷類，且極性相差較小有關(guān)?；谏鲜銮闆r，換用聚酰胺板進行考察，極性物質(zhì)通過與聚酰胺之間形成氫鍵吸附被分離物質(zhì)，層析時，展開劑與被分離物在聚酰胺膜表面競爭形成氫鍵，氫鍵強弱決定分離效果。分別以甲醇-水、乙腈-水、甲醇-磷酸水、甲醇-甲酸水等體系為展開劑，用聚酰胺板進行分離，發(fā)現(xiàn)均能觀察到較為清晰的斑點，其中以甲醇-水-甲酸體系展開效果為最佳，故對此展開體系比例進行優(yōu)化，最終確定展開劑條件為甲醇-水-甲酸(3.5∶1.5∶0.05, V/V/V)。在此展開條件下，聚酰胺板上呈現(xiàn)出兩個較為明顯的點。在確定薄層條件后，用樣品20200601對供試品溶液的穩(wěn)定性做了考察，發(fā)現(xiàn)穩(wěn)定性較好，方法穩(wěn)定可靠。根據(jù)該藥材化學成分的性質(zhì)選用70%乙醇作為浸出物提取溶劑，熱浸法提取率更高，故采用70%乙醇熱浸作為浸出物測定方法。

漢桃葉作為貴州省少數(shù)民族常用藥材，質(zhì)量標準內(nèi)容較為簡單。本課題在原有標準上完善了其項下“莖橫切面顯微鑒別”，另新增了漢桃葉藥材的粉末顯微鑒別、薄層鑒別、水分、總灰分、醇溶性浸出物等項，且方法操作簡便，結(jié)果穩(wěn)定可靠。在本研究中，該藥材顯微鑒別特征明顯，所建立的薄層鑒別方法分離效果好，色譜斑點清晰，可為漢桃葉藥材的質(zhì)量控制及進一步開發(fā)利用提供參考依據(jù)。