張 航，沙惠陽(yáng)，李華瑋，黃良宗，趙孟孟

(1.佛山科學(xué)技術(shù)學(xué)院生命科學(xué)與工程學(xué)院，佛山 528231；2.河南牧業(yè)經(jīng)濟(jì)學(xué)院食品與生物工程學(xué)院，鄭州 450046；3.佛山科學(xué)技術(shù)學(xué)院附屬教學(xué)動(dòng)物醫(yī)院，佛山 528231)

三基序結(jié)合蛋白(tripartite motif-containing，TRIM)家族在人上已發(fā)現(xiàn)有80多個(gè)成員，是一組高度保守的E3泛素連接酶蛋白，參與細(xì)胞生長(zhǎng)、分化、凋亡、細(xì)胞內(nèi)運(yùn)輸和轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)等多種生物進(jìn)程[1]。該家族成員都含有3個(gè)保守結(jié)構(gòu)域，分別為N-端的RING結(jié)構(gòu)域[2]、B-box鋅指結(jié)構(gòu)域[3]、卷曲核心結(jié)構(gòu)域(coiled-domain，CC)和1個(gè)額外的可變C-端結(jié)構(gòu)域[4]。已有研究表明，TRIM家族成員與許多臨床的生理和病理過(guò)程有關(guān)，如TRIM8已被證明在膠質(zhì)母細(xì)胞瘤和乳腺癌等多種癌癥中發(fā)揮腫瘤抑制作用[5]；TRIM21作為自身抗原在自身免疫疾病中被廣泛研究[6]；TRIM32的缺失突變引起神經(jīng)系統(tǒng)的罕見(jiàn)遺傳病[7]。因此，對(duì)TRIM蛋白功能及作用機(jī)制的研究對(duì)認(rèn)識(shí)疾病的發(fā)展具有重要意義。

病毒侵襲是困擾中國(guó)養(yǎng)豬業(yè)健康發(fā)展的關(guān)鍵問(wèn)題之一。開(kāi)發(fā)靶向治療藥物，提高豬體自身免疫成為解決這一關(guān)鍵問(wèn)題的方向之一。先天免疫是機(jī)體抵抗外來(lái)病原微生物感染的第一道防線。病原微生物作為病原相關(guān)分子模式被模式識(shí)別受體識(shí)別，產(chǎn)生一系列信號(hào)級(jí)聯(lián)反應(yīng)促進(jìn)細(xì)胞分泌干擾素(interferon，IFN)。產(chǎn)生的IFN與細(xì)胞表面受體結(jié)合，通過(guò)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)器和JAK-STAT途徑激活信號(hào)級(jí)聯(lián)反應(yīng)，導(dǎo)致大量干擾素刺激基因(interferon stimulates genes，ISGs)的表達(dá)。ISGs的大量表達(dá)使機(jī)體處于抗病毒狀態(tài)以保證宿主處于正常生理狀態(tài)。目前已經(jīng)篩選鑒定出多數(shù)TRIM家族成員作為ISGs參與病毒生命周期的各個(gè)環(huán)節(jié)，包括病毒侵入、基因組復(fù)制以及病毒裝配與釋放等過(guò)程，如TRIM41通過(guò)與核衣殼蛋白(NP)相互作用從而使NP泛素化和隨后的蛋白質(zhì)降解抑制A型流感病毒感染[8]；TRIM22也可以泛素化NP，并將其作為蛋白質(zhì)降解的靶點(diǎn)[9]；TRIM25的C-端SPRY結(jié)構(gòu)域與維甲酸誘導(dǎo)基因Ⅰ(retinoic acid-inducible gene Ⅰ，RIG-Ⅰ)的2CARD結(jié)構(gòu)域結(jié)合，激活RIG-Ⅰ使其發(fā)生泛素化，從而促進(jìn)β干擾素(interferon-β，IFN-β)的產(chǎn)生[10]。因此，深入研究ISGs的抗病毒機(jī)制對(duì)于開(kāi)發(fā)靶向治療藥物具有重要意義。

TRIM3是TRIM家族成員之一，該蛋白除TRIM家族共有結(jié)構(gòu)外，還含有1個(gè)Filamin結(jié)構(gòu)域和1個(gè)C-末端NHL結(jié)構(gòu)域[11]。目前對(duì)TRIM3的研究主要集中在腫瘤的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中。TRIM3是一種候選腫瘤抑制基因，通過(guò)核轉(zhuǎn)錄因子-κB(NF-κB)、Musashi-Notch、p38等多條信號(hào)通路抑制腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)、侵襲與轉(zhuǎn)移，參與腫瘤的臨床分期和預(yù)后[12-14]。在抑制病毒感染過(guò)程中，TRIM5、TRIM14、TRIM21、TRIM25、TRIM38發(fā)揮重要作用[15-19]，同為E3泛素連接酶的TRIM3是否在病毒感染中發(fā)揮作用鮮見(jiàn)報(bào)道。Li等[20]發(fā)現(xiàn)鼠源TRIM3基因介導(dǎo)Toll樣受體3(Toll-like receptor 3，TLR3)泛素化，從而正向調(diào)控TLR3介導(dǎo)的先天免疫和炎癥反應(yīng)。但豬源TRIM3基因是否參與先天免疫仍然未知。因此，研究豬源TRIM3基因?qū)ωi病的防治具有重要意義。本研究以大白豬肝臟組織為試驗(yàn)材料，克隆豬TRIM3基因并對(duì)其進(jìn)行生物信息學(xué)分析，預(yù)測(cè)其蛋白的結(jié)構(gòu)及可能的功能，同時(shí)分析TRIM3基因在各組織中的表達(dá)差異，旨在為進(jìn)一步研究豬TRIM3基因免疫學(xué)特點(diǎn)及其參與豬先天性免疫和抗病毒感染中的分子機(jī)制提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

分別采集健康30日齡大白豬公豬心臟、肝臟、脾臟、肺臟、腎臟、肌肉、氣管和結(jié)腸等組織，—80 ℃保存?zhèn)溆谩RIzol總RNA抽提試劑盒(R0016)和BeyoFastTMSYBR Green qPCR Mix(2×，Low ROX)均購(gòu)自上海碧云天生物科技有限公司；cDNA一鏈合成試劑盒(R111)、2×TaqMaster Mix、DL5000 DNA Marker、膠回收/DNA純化試劑盒(DC301)、大腸桿菌DH5α感受態(tài)細(xì)胞和質(zhì)粒DNA小提試劑盒(DC201)均購(gòu)自南京諾唯贊生物科技股份有限公司；pMD18-T購(gòu)自寶日醫(yī)生物技術(shù)(北京)有限公司；實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀(CFX ConnectTMOptics Module)購(gòu)自伯樂(lè)生命醫(yī)學(xué)產(chǎn)品(上海)有限公司。

1.2 引物設(shè)計(jì)與合成

參考野豬TRIM3基因(GenBank登錄號(hào)：XM_021062339.1)CDS序列，利用Primer Premier 5.0軟件設(shè)計(jì)克隆和實(shí)時(shí)熒光定量PCR引物，以GAPDH(GenBank登錄號(hào)：NM_001206359.1)為內(nèi)參基因，引物信息見(jiàn)表1。引物均由天一輝遠(yuǎn)基因科技有限公司合成。

表1 引物信息

1.3 總RNA提取及cDNA合成

采用TRIzol總RNA抽提試劑盒提取豬各組織總RNA，用超微量分光光度計(jì)測(cè)定RNA濃度，1.0%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)其質(zhì)量，確定總RNA完整度且純度符合試驗(yàn)要求。取0.5 μg總RNA，利用反轉(zhuǎn)錄試劑盒(HiScript 1st Strand cDNA Synthesis Kit)合成cDNA，-20 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.4 豬TRIM3基因CDS區(qū)克隆與測(cè)序

以反轉(zhuǎn)錄合成的肝臟組織cDNA為模板進(jìn)行PCR反應(yīng)，PCR反應(yīng)體系25 μL：cDNA模板2 μL，10 μmol/L 上、下游引物各1 μL，2×TaqMasterMix 12.5 μL，ddH2O 8.5 μL。PCR反應(yīng)程序：95 ℃預(yù)變性5 min；95 ℃變性15 s，43 ℃退火15 s，72 ℃延伸2 min 30 s，共35個(gè)循環(huán)；72 ℃延伸5 min。PCR產(chǎn)物采用1.0%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)，將特異性條帶切膠回收后連接pMD18-T載體，轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5α感受態(tài)細(xì)胞，疑似菌落挑至400 μL含有氨芐抗生素的1.5 mL EP管，37 ℃、200 r/min搖至4 h后做菌液PCR鑒定。菌液PCR反應(yīng)體系10 μL：菌液2 μL，10 μmol/L上、下游引物各0.5 μL，2×TaqMasterMix 5 μL，ddH2O 2 μL。菌液PCR反應(yīng)程序同上。菌液PCR鑒定正確后送天一輝遠(yuǎn)基因科技有限公司進(jìn)行測(cè)序。

1.5 相似性比對(duì)及系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)構(gòu)建

從NCBI網(wǎng)站中搜索并下載相關(guān)物種的TRIM3基因序列，包括野豬(Susscrofa，GenBank登錄號(hào)：XM_021062339.1)、人(Homosapiens，GenBank登錄號(hào)：AF220021.1)、獼猴(Macacamulatta，GenBank登錄號(hào)：NM_001266201.1)、小鼠(Muspahari，GenBank登錄號(hào)：XM_029538710.1)、牛(Bosindicus，GenBank登錄號(hào)：XM_027563142.1)、山羊(Caprahircus，GenBank登錄號(hào)：XM_018059468.1)、馬(Equuscaballus，GenBank登錄號(hào)：XM_023645901.1)、雞(Gallusgallus，GenBank登錄號(hào)：XM_040657774.1)、鵝(Ansercygnoidesdomesticus，GenBank登錄號(hào)：XM_013170643.1)、鴨(Anasplatyrhynchos，GenBank登錄號(hào)：XM_038179015.1)、大鼠(Rattusnorvegicus，GenBank登錄號(hào)：NM_031786.2)、黑猩猩(Pantroglodytes，GenBank登錄號(hào)：XM_016920269.2)、響尾蛇(Crotalustigris，GenBank登錄號(hào)：XM_039348142.1)。使用DNAStar軟件進(jìn)行TRIM3基因序列相似性比對(duì)；利用Mega 7.0軟件中的鄰接法(Neighbor-Joining，NJ)構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)，自展分析Bootstrap 1 000次。

1.6 生物信息學(xué)分析

利用ExPASy在線軟件的ProtParam程序(https:∥web.expasy.org/protparam/)預(yù)測(cè)TRIM3蛋白的理化性質(zhì)；利用Net OGlyc 4.0在線程序(https:∥www.expasy.org/search/Net OGlyc)預(yù)測(cè)TRIM3蛋白糖基化位點(diǎn)；運(yùn)用Net Phos 3.1在線程序(https:∥www.expasy.org/search/Net Phos/)預(yù)測(cè)TRIM3蛋白磷酸化位點(diǎn)；利用WOLF PSORT在線軟件(https:∥www.genscript.com/wolf-psort.html)預(yù)測(cè)TRIM3蛋白亞細(xì)胞定位；利用SignalP-4.1 Server(http:∥www.cbs.dtu.dk/services/SignalP/)和TMHMM 2.0(http:∥www.cbs.dtu.dk/services/TMHMM/)在線程序預(yù)測(cè)蛋白信號(hào)肽及跨膜螺旋結(jié)構(gòu)；利用ProtScale在線程序(https:∥web.expasy.org/protscale/)預(yù)測(cè)TRIM3蛋白親/疏水性；利用SOPMA在線軟件(https:∥nspa-prabi.ibcp.fr/cgi-bin/npsa_automat.plpage=/NPSA/npsa_sopma.html)預(yù)測(cè)TRIM3蛋白二級(jí)結(jié)構(gòu)；利用SWISS-MODEL在線軟件(http:∥www.swissmodel.expasy.org)預(yù)測(cè)TRIM3蛋白三級(jí)結(jié)構(gòu)。

1.7 組織表達(dá)分析

分別對(duì)豬心臟、肝臟、脾臟、肺臟、腎臟、肌肉、氣管和結(jié)腸組織中TRIM3基因進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)。PCR反應(yīng)體系10 μL：SYBR Premix ExTaqTMⅡ(2×)5 μL，上、下游引物(10 μmol/L)混合0.5 μL，cDNA 4.5 μL。PCR反應(yīng)程序：95 ℃預(yù)變性2 min；95 ℃變性15 s，60 ℃退火延伸30 s，共40個(gè)循環(huán)。采用2-ΔΔCt法分析TRIM3基因在豬不同組織中的相對(duì)表達(dá)量，每個(gè)樣品重復(fù)3次。數(shù)據(jù)處理采用GraphPad Prism 5.0(GraphPad Software,San Diego，CA)軟件的多重比較方法，數(shù)據(jù)以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差來(lái)表示，P<0.05表示差異顯著。

2 結(jié) 果

2.1 豬TRIM3基因克隆

以大白豬肝臟組織cDNA為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增，得到約2 235 bp擴(kuò)增片段(圖1A)，條帶清晰明亮，與預(yù)期結(jié)果相符。經(jīng)連接、轉(zhuǎn)化、挑菌后進(jìn)行菌液PCR鑒定，結(jié)果獲得了約2 235 bp大小片段(圖1B)，表明成功克隆了豬TRIM3基因CDS區(qū)。

M，DL5000 DNA Marker；1、3，陰性對(duì)照；2，TRIM3基因PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；4，菌液PCR鑒定結(jié)果

2.2 相似性比對(duì)及系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)構(gòu)建

相似性比對(duì)結(jié)果顯示，大白豬TRIM3基因核苷酸序列與其他物種的相似性為75.1%～99.7%，其中與野豬的相似性最高，達(dá)99.7%；與鴨的相似性最低，為75.1%(圖2)。系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)構(gòu)建結(jié)果顯示，TRIM3基因在大白豬和野豬中先聚為一類，與野豬親緣關(guān)系最近，山羊和牛次之，與鵝的親緣關(guān)系最遠(yuǎn)(圖3)。

圖2 不同物種TRIM3基因核苷酸序列比對(duì)

圖3 TRIM3基因系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)

2.3 TRIM3蛋白生物信息學(xué)分析

2.3.1 理化性質(zhì)、糖基化和磷酸化位點(diǎn)預(yù)測(cè) 大白豬TRIM3蛋白由744個(gè)氨基酸組成，分子式為C3514H5614N1048O1071S28，分子質(zhì)量為80.58 ku，理論等電點(diǎn)(pI)為8.32，偏堿性。該蛋白含有20種必需氨基酸，其中含量最多的是甘氨酸(9.4%)，亮氨酸(9.0%)次之(表2)。預(yù)測(cè)不穩(wěn)定系數(shù)為40.85，證明TRIM3編碼蛋白不穩(wěn)定；理論半衰期在體外哺乳動(dòng)物網(wǎng)織紅細(xì)胞中為30 h，在酵母體內(nèi)>20 h且在大腸桿菌體內(nèi)>10 h。親水性平均值(GRAVY)為-0.312，因此TRIM3蛋白為親水性蛋白；不含N-糖基化位點(diǎn)和O-糖基化位點(diǎn)；可能存在60個(gè)磷酸化位點(diǎn)，其中絲氨酸(Ser)磷酸化位點(diǎn)40個(gè)、蘇氨酸(Thr)磷酸化位點(diǎn)14個(gè)、酪氨酸(Tyr)磷酸化位點(diǎn)6個(gè)(圖4)。

表2 豬TRIM3蛋白氨基酸組成

圖4 豬TRIM3蛋白磷酸化位點(diǎn)預(yù)測(cè)

2.3.2 親/疏水性預(yù)測(cè) 利用ExPASy中ProtScale程序?qū)Υ蟀棕iTRIM3蛋白進(jìn)行親/疏水性分析，結(jié)果顯示第182位氨基酸處有最大疏水值為2.400，第466位氨基酸處有最小親水值為-2.600(圖5)，即TRIM3為親水性蛋白。

圖5 豬TRIM3蛋白親/疏水性預(yù)測(cè)

2.3.3 亞細(xì)胞定位 大白豬TRIM3蛋白亞細(xì)胞定位預(yù)測(cè)結(jié)果顯示，TRIM3蛋白分布于細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞核、過(guò)氧化物酶體和線粒體中，占比分別為52.2%、30.4%、8.7%和8.7%。

2.3.4 信號(hào)肽和跨膜螺旋結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè) 蛋白潛在信號(hào)肽剪切位點(diǎn)預(yù)測(cè)結(jié)果顯示，大白豬TRIM3蛋白沒(méi)有信號(hào)肽裂解位點(diǎn)。剪切位點(diǎn)分值(C值)為0.088(<0.32)，無(wú)剪切位點(diǎn)；信號(hào)肽分值(S值)為0.176(<0.87)，無(wú)信號(hào)肽；綜合剪切點(diǎn)分值(Y值)為0.071(<0.33)；S平均值為0.059(<0.48)，不屬于分泌蛋白；大白豬TRIM3蛋白D值為0.065，推測(cè)TRIM3蛋白不含有信號(hào)肽且不屬于分泌蛋白(圖6)。對(duì)大白豬TRIM3蛋白跨膜結(jié)構(gòu)域預(yù)測(cè)顯示，TRIM3蛋白所有氨基酸均在細(xì)胞膜外；無(wú)跨膜螺旋結(jié)構(gòu)(圖7)，說(shuō)明大白豬TRIM3蛋白為膜外蛋白。

圖6 豬TRIM3蛋白信號(hào)肽預(yù)測(cè)

圖7 豬TRIM3蛋白跨膜結(jié)構(gòu)域預(yù)測(cè)

2.3.5 二級(jí)結(jié)構(gòu)和三級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè) 利用SOPMA在線程序?qū)Υ蟀棕iTRIM3蛋白二級(jí)結(jié)構(gòu)進(jìn)行預(yù)測(cè)，結(jié)果顯示α-螺旋、β-轉(zhuǎn)角、無(wú)規(guī)則卷曲和延伸鏈分別占26.08%、8.60%、41.67%和23.66%(圖8)。利用SWISS-MODEL在線程序構(gòu)建大白豬TRIM3蛋白可能的三級(jí)結(jié)構(gòu)模型，結(jié)果見(jiàn)圖9，全局模型質(zhì)量估計(jì)值為0.35，與模板的相似性為81.52%，說(shuō)明模型構(gòu)建合理。

c和最短線，無(wú)規(guī)則卷曲；h和最長(zhǎng)線，α-螺旋；e和中長(zhǎng)線，延伸鏈；t和中短線，β-轉(zhuǎn)角

圖9 豬TRIM3蛋白三級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)

2.4 豬TRIM3基因在不同組織中的相對(duì)表達(dá)量

由圖10可知，TRIM3基因在豬心臟、肝臟、脾臟、肺臟、腎臟、肌肉、氣管和結(jié)腸組織中均有表達(dá)，其中，在肺臟中的相對(duì)表達(dá)量最高，且顯著高于其他組織(P<0.05)；在腎臟中的表達(dá)量次之；在心臟、肌肉和結(jié)腸中的相對(duì)表達(dá)量最少，且顯著低于其他組織(P<0.05)。

肩標(biāo)不同字母表示差異顯著(P<0.05)；肩標(biāo)相同字母表示差異不顯著(P>0.05)

3 討 論

本試驗(yàn)成功克隆大白豬TRIM3基因，并對(duì)該基因核苷酸序列與其他幾個(gè)物種進(jìn)行相似性比對(duì)，比對(duì)結(jié)果與系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)結(jié)果保持一致，顯示大白豬與野豬親緣關(guān)系最近，與鴨親緣關(guān)系最遠(yuǎn)，證實(shí)TRIM3序列在各物種間具有高度保守性，符合生物進(jìn)化特征，且具有廣泛的同源性。TRIM3氨基酸序列不穩(wěn)定，說(shuō)明TRIM3蛋白容易失去活性；TRIM3蛋白沒(méi)有信號(hào)肽位點(diǎn)，說(shuō)明TRIM3蛋白不能轉(zhuǎn)運(yùn)，只會(huì)滯留到合成部位；TRIM3蛋白具有60個(gè)磷酸化位點(diǎn)，推測(cè)其可能參與某些細(xì)胞通路的調(diào)節(jié)，這與之前的報(bào)道一致[20]。TRIM3蛋白氨基酸序列親水性殘基多于疏水性殘基，表現(xiàn)為親水性，進(jìn)一步說(shuō)明TRIM3屬于不穩(wěn)定蛋白。亞細(xì)胞定位顯示TRIM3蛋白主要位于細(xì)胞質(zhì)，這在預(yù)測(cè)蛋白跨膜結(jié)構(gòu)域中進(jìn)一步得到證實(shí)，說(shuō)明TRIM3蛋白可能在細(xì)胞質(zhì)中合成。TRIM3蛋白二級(jí)結(jié)構(gòu)和三級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)結(jié)果一致，為進(jìn)一步了解TRIM3蛋白的功能奠定基礎(chǔ)。總之，對(duì)TRIM3蛋白生物學(xué)功能的預(yù)測(cè)有利于揭示其可能參與的生物進(jìn)程，為進(jìn)一步研究TRIM3參與抗病毒天然免疫提供理論基礎(chǔ)。

實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)結(jié)果表明，TRIM3基因在大白豬不同組織中均有表達(dá)，這可能與TRIM3可通過(guò)各種途徑介導(dǎo)腫瘤發(fā)生及轉(zhuǎn)移過(guò)程相關(guān)[21-25]；在肺臟中的相對(duì)表達(dá)量最高，在氣管中的表達(dá)量也較高，說(shuō)明該基因與呼吸系統(tǒng)的調(diào)節(jié)密切相關(guān)，為豬呼吸系統(tǒng)疾病的治療提供參考；在腎臟中表達(dá)量較高，可能與之前報(bào)道的TRIM3過(guò)表達(dá)通過(guò)抑制干擾素調(diào)節(jié)因子3途徑和NLRP3炎癥小體預(yù)防急性腎損傷[26]相關(guān)；在脾臟中表達(dá)量較高，推測(cè)其與豬的免疫功能有關(guān)。研究報(bào)道，鼠源TRIM3泛素連接酶影響海馬神經(jīng)元樹(shù)突狀脊柱形態(tài)[27]，斑馬魚的TRIM3a在神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)育及神經(jīng)信號(hào)的傳導(dǎo)中起重要作用[28]，人源TRIM3可通過(guò)激活PI3K/Akt信號(hào)通路減輕帕金森病的細(xì)胞凋亡，提示TRIM3在神經(jīng)系統(tǒng)調(diào)節(jié)中發(fā)揮作用，豬源TRIM3是否參與神經(jīng)系統(tǒng)的調(diào)節(jié)還有待進(jìn)一步探索。

激活先天免疫是宿主抵御病原體的必要條件。已報(bào)道豬源TRIM21依賴于RING結(jié)構(gòu)域和蛋白酶體抑制豬繁殖與呼吸障礙綜合征病毒的復(fù)制，但不影響病毒附著和內(nèi)吞[16]。在抑制豬流行性腹瀉病毒增殖中TRIM21通過(guò)蛋白酶體途徑靶向并降解核衣殼蛋白[29]。之前研究表明，TRIM3是一種高度保守的E3泛素連接酶，通過(guò)泛素化TLR3以引起先天抗病毒反應(yīng)，但具體的作用機(jī)制尚未解釋清楚，病毒蛋白與宿主蛋白的相互作用還需進(jìn)一步驗(yàn)證[20]。本研究成功克隆大白豬TRIM3基因，并對(duì)其理化性質(zhì)進(jìn)行預(yù)測(cè)，為揭示抗病毒天然免疫反應(yīng)，提高豬體免疫力抵抗病毒感染提供理論依據(jù)。

4 結(jié) 論

本研究成功克隆大白豬TRIM3基因CDS全長(zhǎng)序列，其片段長(zhǎng)度為2 235 bp，編碼744個(gè)氨基酸，屬于親水性蛋白，二級(jí)結(jié)構(gòu)中α-螺旋、β-轉(zhuǎn)角、無(wú)規(guī)則卷曲和延伸鏈分別占26.08%、8.60%、41.67%和23.66%，以無(wú)規(guī)則卷曲為主，屬于不穩(wěn)定蛋白。TRIM3基因在豬各組織中均有表達(dá)，在肺臟中表達(dá)量最多，且極顯著高于其他組織。本試驗(yàn)結(jié)果為進(jìn)一步研究TRIM3基因的免疫學(xué)特點(diǎn)及參與豬先天免疫和抗病毒感染中的分子機(jī)制提供理論依據(jù)。