何榕葵 潘少吟 黃燕娟

廣東省清遠(yuǎn)市清新區(qū)婦幼保健院檢驗科，廣東清遠(yuǎn) 511518

地中海貧血屬于常染色體隱性遺傳性疾病，它的 發(fā)生機制是由于缺乏珠蛋白基因，使得珠蛋白肽鏈合成受到影響，進(jìn)而改變血紅蛋白的正常構(gòu)成，終而出現(xiàn)進(jìn)行性溶血性貧血[1]。其中β-地中海貧血是常見的地貧類型之一。數(shù)據(jù)統(tǒng)計顯示，β-地中海貧血在全球范圍內(nèi)的流行率達(dá)4.9%[2]。而我國廣東省在內(nèi)的南方是β-地中海貧血的高發(fā)區(qū)域[3]。β-地中海貧血主要出現(xiàn)于新生兒，會對其正常的生長發(fā)育造成嚴(yán)重的不良影響，還可能并發(fā)黃疸、腹水等并發(fā)癥，嚴(yán)重的甚至造成溶血危象，威脅其生命健康[4]。因此對于育齡夫婦進(jìn)行有效的孕前篩查，能及時幫助β-地中海貧血攜帶者進(jìn)行確診，預(yù)防β-地貧新生兒的出生，從而降低β-地中海貧血的發(fā)病率?；驒z查是β-地中海貧血篩查的金標(biāo)準(zhǔn)，但是其檢測的耗時長，且檢測費用和成本較高，不適用于β-地中海貧血廣泛性的初篩[5]。平均紅細(xì)胞體積（mean corpuscular volume，MCV）是常用的血液相關(guān)疾病檢測方法，但對地中海貧血篩查的特異度不高。毛細(xì)管血紅蛋白電泳是一種專門針對血液病篩查的實驗室檢測方法，它能對血紅蛋白（hemoglobin，Hb）的成分和結(jié)構(gòu)進(jìn)行分析，從而發(fā)現(xiàn)相關(guān)的血紅蛋白病[6]。本研究將兩者聯(lián)合應(yīng)用于育齡夫婦的孕前β-地中海貧血篩查，并與基因檢測進(jìn)行對照分析，以探討毛細(xì)管血紅蛋白電泳聯(lián)合MCV 檢測在育齡夫婦的孕前β-地中海貧血篩查中的臨床效果。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2019年8月至2020年9月在清遠(yuǎn)市清新區(qū)婦幼保健院進(jìn)行孕前β-地中海貧血篩查的1508 對育齡夫婦（3016 人）作為研究對象，其中男性、女性各1508 人；年齡20～45 歲，平均（27.8±1.2）歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：①清遠(yuǎn)市本地戶籍；②年齡20～45歲；③有備孕意向；④知情同意，并自愿參與研究；⑤無生育史。排除標(biāo)準(zhǔn)：①隨訪資料不全；②凝血功能異常。本研究已經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會審核批準(zhǔn)。

1.2 方法

1.2.1 樣品采集 對所有受試者均采集其空腹靜脈血樣本2 ml，放置于抗凝管中。將抗凝管進(jìn)行震蕩，以充分混勻樣本與抗凝劑。做好抗凝管的標(biāo)識，并放置于2～8℃的環(huán)境下進(jìn)行保存待檢。

1.2.2 檢測方法 取其靜脈血樣本應(yīng)用全自動毛細(xì)管血紅蛋白電泳儀和血液分析儀檢測其Hb 含量分布情況和MCV，并應(yīng)用多聚酶鏈反應(yīng)/反向斑點雜交（polymerase chain reaction/reverse dot blot，PCR/RDB）技術(shù)進(jìn)行β-地中海貧血的基因診斷。

①毛細(xì)管血紅蛋白電泳儀檢測。采用Capillarys 2型全自動血紅蛋白毛細(xì)管電泳儀（Sebia 公司）及配套檢測試劑盒，嚴(yán)格按照相關(guān)操作標(biāo)準(zhǔn)對采集的靜脈血樣本進(jìn)行檢測，分析其Hb 的組分，并進(jìn)行進(jìn)一步的Hb-A、Hb-F 以及Hb-A2 含量的定量分析。陽性的標(biāo)準(zhǔn)參照《β-地中海貧血的臨床實踐指南》[7]為Hb-A＜96.5%。②MCV 檢測。采用BC-5500 的自動血液分析儀和配套的試劑進(jìn)行MCV 檢測。陽性的標(biāo)準(zhǔn)參照《地中海貧血妊娠期管理專家共識》[8]為MCV＜82 fl。③PCR/RDB 檢測。PCR/RDB 檢測上送深圳華大基因股份有限公司進(jìn)行操作，對樣本中基因組DNA 中的β-地中海貧血常見17 種點突變進(jìn)行基因測定。

以上檢測均由兩名專業(yè)的檢測人員按照盲法判讀法對檢測結(jié)果進(jìn)行判斷，存在異議的可交由上一級檢驗醫(yī)師進(jìn)行最終判斷。

1.3 觀察指標(biāo)及評價標(biāo)準(zhǔn)

分析育齡夫婦樣本中β-地中海貧血的基因檢測結(jié)果和基因分型情況。并以PCR/RDB 的基因診斷結(jié)果為金標(biāo)準(zhǔn)，分析β-地中海貧血不同臨床分型的Hb分布情況，計算毛細(xì)管血紅蛋白電泳、MCV 檢測單獨及聯(lián)合應(yīng)用篩查育齡夫婦β-地中海貧血的診斷效能。靈敏度=真陽性例數(shù)/（真陽性+假陰性）例數(shù)×100%；特異度=真陰性例數(shù)/（假陽性+真陰性）×100%；準(zhǔn)確度=（真陽性+真陰性）例數(shù)/總例數(shù)×100%。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 23.0 軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析；對于符合正態(tài)分布的計量資料，用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）的形式進(jìn)行描述，不符合正態(tài)分布的資料，用中位數(shù)（下四分位數(shù)，上四分位數(shù)）[M（P25，P75）]進(jìn)行描述，組間比較采用非參數(shù)檢驗；計數(shù)資料用率表示，組間比較采用χ2檢驗；一致性分析采用Kappa 檢驗，以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 β-地中海貧血基因的基因檢查結(jié)果

基因診斷結(jié)果顯示，3016 份靜脈血樣本中β-地中海貧血基因陽性樣本174 份，β-地中海貧血陽性率為5.77%，其中輕型β-地中海貧血168 例（96.55%），中間型β-地中海貧血6 例（3.45%）。共檢出中11 種不同的基因型，其中常見的包括βCD41-42/βN、βIVS-Ⅱ-654/βN、βCD17/βN、β-28/βN以及βCD71-72/βN?；蛐推渚唧w的基因型分布見表1。

表1 β-地中海貧血基因的基因型分布情況

2.2 β-地中海貧血血不同臨床分型的Hb 分布情況

中間型β-地中海貧血者的Hb-A 含量低于輕型β-地中海貧血者，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），但二者的Hb-F、Hb-A2比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）（表2）。

表2 β-地中海貧血者不同臨床分型的Hb 分布情況[M（P25，P75）]

2.3 毛細(xì)管血紅蛋白電泳、MCV 檢測診斷β-地中海貧血的效能分析

以基因診斷結(jié)果為金標(biāo)準(zhǔn)，毛細(xì)管血紅蛋白電泳篩查β-地中海貧血的靈敏度、特異度以及準(zhǔn)確度分別為84.48%、91.93%、91.50%，MCV 檢測篩查β-地中海貧血的靈敏度、特異度以及準(zhǔn)確度分別為91.95%、91.33%、91.37%，毛細(xì)管血紅蛋白電泳和MCV 檢測聯(lián)合篩查β-地中海貧血的靈敏度、特異度以及準(zhǔn)確度分別為95.98%、91.86%、92.09%。毛細(xì)管血紅蛋白電泳和MCV 檢測聯(lián)合篩查β-地中海貧血的靈敏度及總準(zhǔn)確性最高，但三種檢測方式的靈敏度、特異度、準(zhǔn)確度比較，差異并無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）（表3）。

表3 毛細(xì)管血紅蛋白電泳篩查結(jié)果分析（例）

表4 毛細(xì)管血紅蛋白電泳篩查的效能分析[%（n/N）]

3 討論

β-地中海貧血是常見的地中海貧血類型之一，由于其屬于遺傳性疾病，因此主要見于新生兒，多在其出生后3 個月內(nèi)出現(xiàn)相關(guān)癥狀。數(shù)據(jù)統(tǒng)計顯示每年全球約有100 萬的β-地中海貧血新生兒出生[9]。β-地中海貧血新生兒的預(yù)后不良，因此臨床需要積極預(yù)防β-地中海貧血新生兒的出生。β-地中海貧血為常染色體隱性遺傳，因此對于育齡夫妻進(jìn)行孕前篩查，找出β-地中海貧血攜帶者，有助于促進(jìn)人口的優(yōu)生優(yōu)育。我國的廣東區(qū)域是地貧的高發(fā)地區(qū)。本次研究中基因診斷結(jié)果顯示，3016 份育齡夫婦的靜脈血樣本中β-地中海貧血基因陽性樣本174 份，陽性率為5.77%，其中輕型β-地中海貧血168 例，中間型β-地中海貧血6 例，略高于鐘永紅等[10]研究中的β-地中海貧血攜帶率3.73%。而本研究的在174 份陽性樣本的β-地中海貧血基因分型中，占比較高的是βCD41-42/βN、βIVS-Ⅱ-654/βN、βCD17/βN、β-28/βN以及βCD71-72/βN，這與黃軍垣[11]研究結(jié)果基本相符?；驒z測的結(jié)果準(zhǔn)確性高，但是費用昂剛，且檢測技術(shù)要求高，用于地貧篩查的適用性不高。

毛細(xì)血紅蛋白電泳屬于實驗室檢測方法，能根據(jù)不同類型血紅蛋白的電荷和等電點不同，對血紅蛋白的類型和含量進(jìn)行定性和定量分析，區(qū)分正常的血紅蛋白和血紅蛋白變異體，從而篩查相應(yīng)的血紅蛋白病變[12]。在β-地中海貧血患者中，Hb-A 的含量降低是其主要的血液學(xué)特征[13]。本次研究中，中間型β-地中海貧血者的Hb-A 含量低于輕型β-地中海貧血 （P＜0.05），結(jié)果提示毛細(xì)管血紅蛋白電泳能有效檢測不同臨床分型的β-地中海貧血患兒之間Hb-A 含量的差異，提示其對于β-地中海貧血臨床分型能提供一定的參考[14]，一定程度上能減少中間型,重型地中海貧血患兒的出生，為β-地中海貧血防控提供一定的作用。不過毛細(xì)管血紅蛋白電泳單獨應(yīng)用篩查β-地中海貧血容易出現(xiàn)漏診。

β-地中海貧血患者的MCV 會出現(xiàn)下降，MCV 檢測也是地貧篩查的常用方法，對于地貧篩查的靈敏度較高。但是由于缺鐵性貧血人群的MCV 也會出現(xiàn)下降。因此MCV 檢測篩查地貧的特異度不是很理想。本次研究將毛細(xì)管血紅蛋白電泳和MCV 檢測聯(lián)合用于β-地中海貧血的篩查，并以基因診斷結(jié)果為金標(biāo)準(zhǔn)對其診斷效能進(jìn)行分析，結(jié)果顯示在三種檢測方式中，毛細(xì)管血紅蛋白電泳和MCV 檢測聯(lián)合篩查β-地中海貧血的靈敏度、總準(zhǔn)確性最高。結(jié)果驗證了陳銳芳等[15]研究結(jié)論，顯示聯(lián)合應(yīng)用毛細(xì)管血紅蛋白電泳和MCV 檢測進(jìn)行育齡夫婦孕前β-地中海貧血篩查，能取長補短，提高篩查靈敏度和準(zhǔn)確性。不過本次研究中納入的育齡夫婦靜脈血樣本量不夠大，因此結(jié)果可能存在一定的偏倚，故而需要后續(xù)的深入探討。

綜上所述，聯(lián)合應(yīng)用毛細(xì)管血紅蛋白電泳和MCV 檢測進(jìn)行育齡夫婦孕前β-地中海貧血篩查，能一定程度上提高篩查的靈敏度和準(zhǔn)確性，且對于其臨床分型也有一定的指導(dǎo)意義。