劉李婷，石 菲，劉 葉，陳姍姍

（陜西省產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)研究院農(nóng)副食品所，陜西西安 710048）

異黃酮是黃酮類化合物中的一種，主要存在于豆科植物中，其中大豆中的含量最高，故特別稱為大豆異黃酮[1]。大豆異黃酮是強(qiáng)力的抗氧化物，能夠降低自由基對于低密度脂蛋白的氧化，降低低密度脂蛋白—膽固醇在動脈中沉積，減少動脈硬化的風(fēng)險；能有效地預(yù)防和抑制白血病、骨質(zhì)疏松、結(jié)腸癌、肺癌、胃癌、乳腺癌和前列腺癌等多種疾病的發(fā)生，尤其是對乳腺癌和前列腺癌有積極的預(yù)防和治療作用[2]。國內(nèi)有關(guān)大豆異黃酮檢測方法的研究已有很多，包括分光光度法[3]、液相色譜法[4]、醫(yī)學(xué)免疫法和色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法[5]等。由于不同豆制品的成分均較復(fù)雜，大豆異黃酮組分含量會隨著實(shí)際生產(chǎn)環(huán)境和制作工藝發(fā)生相互轉(zhuǎn)化，本研究建立了一種快速簡便、靈敏度高的高效液相色譜法，用于檢測不同豆制品中大豆異黃酮的含量，并比較不同豆制品中大豆異黃酮的種類。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

固體類：豆腐乳、豆瓣醬、豆腐、豆芽、豆干、豆皮、腐竹和辣條；液體類：大豆油、豆乳、豆?jié){、醬油；不同豆類：扁豆、黑豆、黃豆、紅小豆和豇豆，所用樣品均為市售常見樣品。

試劑：甲醇（色譜純）；二甲基亞砜（色譜純）；正己烷（色譜純）；磷酸（分析純）；大豆苷標(biāo)準(zhǔn)品；大豆素標(biāo)準(zhǔn)品；大豆黃苷標(biāo)準(zhǔn)品；大豆黃素標(biāo)準(zhǔn)品；染料木苷標(biāo)準(zhǔn)品；染料木素標(biāo)準(zhǔn)品。

1.2 儀器與設(shè)備

高效液相色譜儀（島津SPD-20A）；超聲波清洗儀（昆山市超聲儀器KQ-500E）；離心機(jī)（湖南湘儀實(shí)驗(yàn)室儀器開發(fā)有限公司）；酸度計(jì)[梅特勒-托利名儀器（上海）有限公司F2系列]。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 樣品前處理

（1）固體。精密稱取固體樣品2.0 g，加5 mL正己烷超聲脫脂10 min，再加10 mL 80%甲醇溶液溶解至50 mL離心管，超聲萃取10 min，離心機(jī)離心（8 000 r/min，3 min），取有機(jī)層用0.45 μm有機(jī)濾膜過濾，HPLC分析含量。

（2）液體。移液槍精密吸取液體樣品2.0 mL于50 mL離心管中，加5 mL正己烷超聲脫脂10 min，再加10 mL 80%甲醇溶液溶解至50 mL離心管，超聲萃取10 min，離心機(jī)離心（8 000 r/min，3 min），取有機(jī)層用0.45 μm有機(jī)濾膜過濾，HPLC分析含量。

1.3.2 儀器條件

色譜柱：C18ODS-3（5 μm，4.6 mm×250 mm）；柱溫：30 ℃；流動相：流動相A為乙腈，流動相B為磷酸水溶液（pH=3）；梯度洗脫，如表1所示；流速：1.0 mL/min檢測波長：260 nm。

表1 流動相比例

1.3.3 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

精密稱取干燥的大豆苷、大豆黃苷、染料木苷、大豆黃素、大豆素和染料木素各4 mg，用二甲基亞砜溶液定容至10 mL為標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液，濃度均為400 mg/L。從大豆苷、大豆黃苷、染料木苷、大豆黃素、大豆素和染料木素的6種標(biāo)準(zhǔn)貯備溶液中分別吸取0.2 mL、0.4 mL、0.6 mL、0.8 mL和1.0 mL；加入等體積的水，用50%二甲基亞砜溶液定容至10 mL，得到濃度分別為8.0 mg/mL、16.0 mg/mL、24.0 mg/mL、32.0 mg/mL和40.0 mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)系列。

2 結(jié)果與分析

2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線與線性范圍

標(biāo)準(zhǔn)曲線與線性范圍見表2，6種大豆異黃酮R2均在0.9以上，表明線性關(guān)系良好。

表2 6種大豆異黃酮標(biāo)準(zhǔn)曲線方程

2.2 檢出限

選取樣品分別加標(biāo)，進(jìn)行逐級稀釋，儀器檢測，可檢出的最小濃度為該樣品的檢出限，最終得到該實(shí)驗(yàn)可達(dá)到的檢出限為0.2 μg/mL。

2.3 精密度

吸取8.0 μg/mL的大豆苷、大豆黃苷、染料木苷、大豆素、大豆黃素和染料木素標(biāo)準(zhǔn)品溶液，重復(fù)進(jìn)樣6次，以測得的峰面積為指標(biāo)，測定檢測方法的精密度。測得大豆苷、大豆黃苷、染料木苷、大豆素、大豆黃素和染料木素的RSD值分別為0.05%、0.07%、0.06%、0.17%、0.23%和0.05%（n=6），表明實(shí)驗(yàn)精密度良好。

2.4 樣品檢測結(jié)果

2.4.1 固體類樣品中不同種類大豆異黃酮

固體類樣品中不同種類大豆異黃酮如表3所示。由以上結(jié)果分析可得，不同固體樣品中大豆異黃酮總含量比較為腐竹＞豆干＞豆皮＞豆腐＞豆瓣醬＞豆芽＞豆腐乳＞辣條。由此可判斷加工工序越少，對大豆異黃酮含量損失越少，且保留的種類越豐富，加工樣品原料種類越單一，其含量較高。

表3 固體類樣品異黃酮含量（單位：mg/kg）

2.4.2 液體類樣品中不同種類大豆異黃酮

液體類樣品中不同種類大豆異黃酮如表4所示。由以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果可得，不同液體樣品中大豆異黃酮含量比較為豆乳＞豆?jié){＞醬油＞大豆油。其中大豆油含量較低有可能是因?yàn)橛椭窟^高，未能將異黃酮全部提出，后期實(shí)驗(yàn)過程應(yīng)針對油脂含量高的樣品進(jìn)行進(jìn)一步優(yōu)化。液體樣品中異黃酮含量明顯低于固體樣品，且豆乳、豆?jié){含量相差不大。

表4 液體類樣品異黃酮含量（單位：mg/kg）

2.4.3 不同豆類中不同種類大豆異黃酮

不同豆類中不同種類大豆異黃酮如表5所示。由以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果可得多種豆類產(chǎn)品并不是均含有大豆異黃酮，其中黃豆含量最高，豇豆含量次之。

表5 不同豆類異黃酮含量（單位：mg/kg）

3 結(jié)論

大豆異黃酮作為一種天然抗氧化劑，可用于人們?nèi)粘Ｉ畋＝?，不同種類、不同加工方式影響產(chǎn)品中異黃酮的種類及含量。本研究建立高效液相色譜法測定不同樣品中大豆苷、大豆黃苷、染料木苷、大豆素、大豆黃素和染料木素6種大豆異黃酮。通過分析比較得出，固體類樣品中的大豆異黃酮含量高于液體類樣品，且加工處理方式越單一，對其含量影響越??；豆類產(chǎn)品中多數(shù)不含有大豆異黃酮，黃豆含量最高。該方法回收率高，靈敏度高，且操作簡單，快速高效，可應(yīng)用于實(shí)際樣品中不同種類的大豆異黃酮的分析測定。