任濤濤，陳金嬡，靳雨婷，湯軼偉，王向紅，王 碩，3

（1 渤海大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院 遼寧錦州 121013 2 河北農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科技學(xué)院 河北保定 071001 3 天津市食品科學(xué)與健康重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 南開大學(xué)醫(yī)學(xué)院 天津 300071）

由微生物引起的食品污染和腐敗是全球食品工業(yè)面臨的兩個主要問題，也是各國政府對食品質(zhì)量安全與食品供應(yīng)保障的關(guān)注焦點(diǎn)[1]。世界衛(wèi)生組織（World Health Organization，WHO）報告，每年全世界約6 億人口患食源性疾病，42 萬人因食源性疾病而死亡，其中細(xì)菌污染是引起健康問題的主要原因[2-3]。此外，微生物腐敗還造成全球約25%的食品損失，不但給生產(chǎn)者帶來巨大經(jīng)濟(jì)壓力，還加重了社會的環(huán)境負(fù)擔(dān)[4]。食品腐敗菌與致病微生物檢測方法的建立（如細(xì)胞培養(yǎng)、菌落計數(shù)方法[5]、ELISA[6]、表面等離子共振[7]等）可在早期預(yù)測食品微生物的污染情況，對降低食源性疾病發(fā)病率和食品腐敗具有重要意義。然而，這些方法常常繁瑣、費(fèi)時、靈敏度或特異性差，難以滿足當(dāng)前食品安全檢測技術(shù)的市場需求[8]。

分子印跡聚合物（Molecularly imprinted polymers，MIPs） 是基于分子印跡技術(shù)（Molecularimprinting technology，MIT） 制備而成的高分子聚合物，可通過三維空間結(jié)構(gòu)和分子間作用力（氫鍵作用力、范德華力、靜電作用力、疏水作用力等）與模板分子或模板分子結(jié)構(gòu)類似物特異性識別[9]，已在食品中農(nóng)獸藥殘留檢測、活性成分分離、模擬酶催化危害物降解等方面進(jìn)行了廣泛研究[10-12]。

近年來，隨著MIT 和納米技術(shù)的發(fā)展，新型功能單體的開發(fā)以及蛋白、多糖、多肽等生物大分子印跡聚合物的成功制備大大促進(jìn)了細(xì)菌、病毒等微生物印跡技術(shù)的發(fā)展及應(yīng)用。本文主要綜述微生物MIPs 合成方法以及分子印跡技術(shù)在食品腐敗菌與致病微生物檢測中的應(yīng)用，為提升我國食品中有害微生物檢測能力提供參考。

1 微生物MIPs 合成方法

與化學(xué)污染物相比，細(xì)菌、病毒等微生物體積大，表面化學(xué)成分多樣（蛋白、脂多糖、肽聚糖等），構(gòu)象柔順多變，易受pH 值、有機(jī)溶劑、離子等多種因素影響[13-14]。因此，微生物MIPs 的制備多在水相體系或水-有機(jī)溶劑兩相體系中進(jìn)行。

1.1 乳液聚合法

乳液聚合是指模板分子分散在水相中在穩(wěn)定劑作用下通過攪拌水相-油相形成乳液而制備生物大分子MIPs 的方法，該方法可保證蛋白等生物大分子模板在聚合過程中構(gòu)象的穩(wěn)定，提高了生物大分子MIPs 對目標(biāo)物識別的特異性[15]?；谌橐壕酆显?，Long 等[16]以銅綠假單胞菌（Pseudomonas aeruginosa） 細(xì)胞壁的特有成分脂多糖（Lipopolysaccharide，LPS）為模板分子，丙烯酰胺為功能單體、N，N-亞甲基雙丙烯酰胺為交聯(lián)劑，三者溶于蒸餾水為分散相（水相）；以溶有表面活性劑聚氧乙烯月桂醚、磺基琥珀酸鈉二辛酯的正己烷為連續(xù)相（油相），在過硫酸銨、N，N，N，N-四甲基乙二胺引發(fā)體系下制備了可選擇性識別銅綠假單胞菌的分子印跡聚合物（圖1）。

圖1 分子印跡納米微球特異性識別細(xì)菌的過程示意圖[16]Fig.1 Molecularly imprinted nanoparticles for specific recognition of bacteria[16]

以膠體粒子為穩(wěn)定劑的乳液稱為Pickering乳液，制備過程中不使用表面活性劑，已用于多種目標(biāo)物的MIPs 制備過程中[14]。Shen 等[17]創(chuàng)新性的以乙烯基N-丙烯酸殼聚糖修飾的細(xì)菌為粒子穩(wěn)定劑，構(gòu)建水相中穩(wěn)定的油相乳液，含有交聯(lián)劑單體的油相通過自由基引發(fā)聚合，聚合過程中細(xì)菌被印跡在聚合物微球表面。洗脫細(xì)菌后，聚合物微球表面留下模板細(xì)菌的特異性吸附位點(diǎn)（圖2）。依據(jù)同樣方法，Zhao 等[18]合成了單增李斯特菌（Listeria monocytogenes）熒光MIPs。該合成方法簡單，修飾物可根據(jù)細(xì)菌表面的理化性質(zhì)進(jìn)行調(diào)節(jié)，適合推廣到其它微生物MIPs 的制備。

圖2 細(xì)菌乳液聚合示意圖（a），洗脫前（b）后（c）細(xì)菌印跡聚合物掃描電鏡圖[17]Fig.2 Bacterial imprinting by Pickering emulsion polymerization（a），SEM images of bacterial imprinted polymers before（b）and after（c） removal of the template[17]

1.2 電化學(xué)聚合方法

電化學(xué)聚合方法是指在有電極浸入電解質(zhì)溶液中，利用電化學(xué)氧化或還原反應(yīng)，使功能單體、交聯(lián)劑、模板分子等在電極表面發(fā)生聚合反應(yīng)制備MIPs 膜的方法，該方法制備過程簡單，聚合物膜厚度可控[19-20]。

Golabi 等[21]以表皮葡萄球菌（Staphylococcus epidermidis）為模板，3-氨基苯硼酸為功能單體，以NaF 的磷酸鹽緩沖液為電解質(zhì)，在金電極表面成功合成了細(xì)菌MIPs 膜，該印跡膜厚度可通過控制電流進(jìn)行調(diào)節(jié)。印跡在MIPs 表面的細(xì)菌通過果糖的競爭性吸附而分離，再用流動的去離子水洗脫細(xì)菌模板。保存金電極前用磷酸鹽溶液浸泡以去除吸附在MIPs 中的果糖分子，并活化聚合物表面的硼酸基團(tuán)。該方法為食品腐敗菌和致病微生物的MIPs 電化學(xué)傳感器的制備奠定了基礎(chǔ)。Lachen等[22]以蠟樣芽孢桿菌（Bacillus cereus）芽孢為模板細(xì)胞，以吡咯為功能單體，在LiClO4溶液中、100mV/s 電壓下，在聚吡咯修飾的碳糊電極表面成功制備了芽孢M(jìn)IPs 膜。

1.3 微接觸印跡法

細(xì)菌微接觸印跡法是整細(xì)胞印跡的一種。Fu等[23]采用微接觸印跡法在玻璃板上制備了副溶血弧菌（Vibrio parahaemolyticus）MIPs 膜，該方法分為細(xì)菌模板制備和印跡膜制備兩個步驟（圖3）。細(xì)菌模板制備：（a）無水乙醇和去離子水將顯微鏡玻璃載玻片清洗干凈，用酸性食人魚溶液浸泡1h；（b）將福爾馬林滅活的副溶血弧菌懸浮液展涂于玻璃片上，4 ℃保持30 min 使細(xì)菌沉降于載玻片表面；（c）將載玻片置于旋轉(zhuǎn)涂布機(jī)上，1 500 r/min 下離心去除多余溶劑后用作細(xì)菌模板。印跡膜制備：（a）將聚二甲基硅氧烷溶于環(huán)己烷中，真空去除混合物中氣體；（b）取一定量的混合物展涂于干凈的玻璃載玻片上，80 ℃熱板上預(yù)固化2 min 以提高預(yù)聚物黏度；（c）將帶有細(xì)菌模板的玻璃片壓入預(yù)聚合物中，室溫過夜后再用80 ℃熱板固化1 h；（d）去離子水超聲輔助清洗壓印膜，然后在空氣中干燥；（e）為降低印跡膜的非特異性吸附，采用蒸發(fā)-沉積法制備副溶血弧菌氟化聚二甲基硅氧烷印跡膜。該印跡膜對副溶血弧菌具有較好的選擇吸附特性，捕獲率可達(dá)62.9%。

圖3 細(xì)菌印跡膜制備及副溶血弧菌的PCR 檢測示意圖[23]Fig.3 The schematic diagram of bacteria-imprinted film fabrication and PCR detection of Vibrio parahaemolyticus[23]

2 檢測方法

2.1 熒光檢測方法

熒光分析法是利用熒光信號強(qiáng)弱或顏色深淺進(jìn)行定性或定量分析的檢測方法，該方法具有靈敏度高、操作簡單、響應(yīng)時間短等特點(diǎn)，已廣泛應(yīng)用于食品安全檢測[24]。

單增李斯特菌（Listeria monocytogenes）是奶制品、水產(chǎn)品、肉制品、蔬菜等食品中一種重要污染菌，是歐美等國家食品中毒事件爆發(fā)的主要致病菌之一。Zhao 等[18]將N-丙烯酸殼聚糖修飾的CdTe 量子點(diǎn)與單增李斯特菌的復(fù)合物分散于PBS（磷酸鹽）溶液中作為乳液穩(wěn)定劑，以三羥甲基丙烷三甲基丙烯酸酯、二乙烯基苯為功能單體，以過氧化苯甲酰、N，N-二甲基苯胺為引發(fā)劑，采用Pickering 乳液聚合方法制備了細(xì)菌熒光探針。該探針特異性好，隨著目標(biāo)細(xì)菌吸附量的增加，熒光強(qiáng)度顯著降低，最優(yōu)條件下探針對單增李斯特菌的檢出限為103CFU/mL（圖4），可用于牛奶樣品中單增李斯特菌污染狀況的監(jiān)測。

圖4 印跡熒光探針選擇性吸附結(jié)果（a）及不同單增李斯特菌濃度熒光強(qiáng)度圖（b）[18]Fig.4 The selectivity adsorption of MIPs and NIPs on four bacteria mixing solutions（a），fluorescence images of MIPs adsorbing different concentrations of L.monocytogens（b）[18]

金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）是一種常見的食源性革蘭氏陽性致病微生物，約5%的微生物食物中毒由該菌腸毒素引起[25]。Bezdekova等[26]以金黃色葡萄球菌為模板，多巴胺為功能單體，Tirs 緩沖液為溶劑，分別在96 孔板孔內(nèi)和Fe3O4磁性納米材料表面合成了高特異性金黃色葡萄球菌MIPs，聚合物中的模板用Tirs 緩沖液洗脫。制備的金黃色葡萄球菌MIPs 可直接與牛奶等液態(tài)樣品混合對目標(biāo)菌進(jìn)行吸附，去除樣品后MIPs 用去離子水洗去未結(jié)合的細(xì)菌，加入碘化丙錠后通過熒光顯微鏡觀察確定樣品中的細(xì)菌，結(jié)果表明該MIPs 在牛奶樣品中對金黃葡萄球菌的檢出限為103CFU/mL。該研究中應(yīng)用的新型功能單體多巴胺具有水溶性好、反應(yīng)條件溫和，生物相容性好等特點(diǎn)，大大促進(jìn)了食品腐敗菌及致病微生物印跡聚合物材料的發(fā)展及新型檢測方法的建立。

2.2 電化學(xué)傳感器檢測方法

電化學(xué)傳感器的開發(fā)是電分析檢測方法的發(fā)展方向，MIPs 等選擇性電極修飾材料大大提高了電化學(xué)檢測方法的選擇性，在環(huán)境、醫(yī)藥、食品分析等領(lǐng)域發(fā)揮了重要作用[27]。

芽孢桿菌的孢子在環(huán)境脅迫下可長時間休眠，待適合萌發(fā)時又能重新生長返回營養(yǎng)體，引起食物腐敗和食源性疾病[28]。Lachen 等[22]首次通過電化學(xué)聚合方法成功將蠟樣芽孢桿菌（Bacillus cereus）芽孢M(jìn)IPs 膜修飾于碳糊工作電極表面，建立了循環(huán)伏安法電化學(xué)傳感器檢測方法，孢子與電極的最佳孵育時間為5 min，最優(yōu)條件下該方法對蠟樣芽孢桿菌（Bacillus cereus）芽孢的檢測范圍為102～105CFU/mL，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD，n=3）為13%～30%，該方法可快速檢測食品中蠟樣芽孢桿菌（Bacillus cereus）芽孢的污染情況，為細(xì)菌芽孢電化學(xué)檢測方法的建立奠定了基礎(chǔ)。

大腸桿菌（Escherichia coli）是一種革蘭氏陰性無芽孢細(xì)菌，常存在于飲用水和食品中，是引起腸胃炎的主要原因[29]。Chen 等[30]以大腸桿菌O157：H7 為模板，多巴胺為功能單體，通過電化學(xué)方法直接在玻璃電極表面成功合成了MIPs 膜，該印跡膜可特異性的吸附目標(biāo)細(xì)菌，與偶聯(lián)大腸桿菌多克隆抗體的摻氮石墨烯量子點(diǎn)（pAb-NGQDs）的溶液結(jié)合后，可形成MIPs-EscherichiacoliO157：H7-pAb-N-GQDs 復(fù)合物，該復(fù)合物在K2S2O8作用下能發(fā)生電化學(xué)發(fā)光現(xiàn)象，吸附的目標(biāo)細(xì)菌越多，發(fā)光強(qiáng)度越大，基于該原理建立了大腸桿菌O157：H7 的電化學(xué)發(fā)光檢測方法（圖5）。最優(yōu)條件下，該方法的檢測范圍為101～107CFU/mL，檢出限為8 CFU/mL。

圖5 電化學(xué)發(fā)光傳感器構(gòu)建與檢測過程示意圖[30]Fig.5 Schematic presentation of fabrication procedure of electrochemiluminescence biosensor and detection process[30]

Idil 等[31]以N-甲基丙烯酰-L-組氨酸甲酯、甲基丙烯酸-2-羥乙基酯為功能單體，以乙二醇二甲基丙烯酸酯為交聯(lián)劑，大腸桿菌為模板，采用微接觸紫外引發(fā)印跡聚合方法在成功制備了大腸桿菌MIPs 金電極傳感器，并建立了電容式電化學(xué)檢測方法。最優(yōu)條件下，該方法對大腸桿菌的檢測范圍為102～107CFU/mL，檢出限為70 CFU/mL，實(shí)際水樣品的檢測回收率為81%～97%。Wu 等[32]以大腸桿菌為模板，吡咯為單體，采用電化學(xué)聚合方法制備了玻璃電極MIPs 電化學(xué)傳感器，并建立了阻抗型電化學(xué)檢測方法。該方法可在1 h 內(nèi)實(shí)現(xiàn)對大腸桿菌O157：H7 的檢測，定量限為103CFU/mL，在實(shí)際水樣、蘋果汁及牛奶樣品中性能穩(wěn)定，檢測回收率為96%～107.9%，RSD 小于4%。

2.3 表面等離子共振檢測方法

表面等離子共振（Surface Plasmon Resonance，SPR）檢測是一種基于金屬介質(zhì)波導(dǎo)表面等離子的無損傷、無標(biāo)記檢測技術(shù)，具有樣品使用量少、靈敏度高、快捷方便、可實(shí)時監(jiān)測等優(yōu)點(diǎn)[33]。

Yilmaz 等[34]以甲基丙烯酸-2-羥乙基酯、N-甲基丙烯酰-L-組氨酸甲酯為功能單體、乙二醇二甲基丙烯酸酯為交聯(lián)劑，偶氮二異丁腈為引發(fā)劑，大腸桿菌為模板，采用微接觸印跡方法在SPR 傳感器表面制備大腸桿菌MIPs 膜，并建立了SPR 檢測方法。最優(yōu)條件下，該方法的最低檢出限和定量限分別為1.54×106CFU/mL 和5.13×106CFU/mL，響應(yīng)為113 s。為增強(qiáng)SPR 傳感器相應(yīng)信號，提高SPR 檢測方法的靈敏度，?zgür 等[35]在SPR 傳感器表面合成MIPs 時加入Ag 納米粒子，結(jié)果顯示該SPR 傳感器檢測大腸桿菌的靈敏度顯著提高，最優(yōu)條件下檢出限達(dá)到0.57 CFU/mL。

糞腸球菌（Enterococcus faecalis）隸屬于腸球菌屬，常作為食物中糞便污染指示菌，也是一種重要的機(jī)會性人畜共患致病菌[36]。Erdem 等[37]首先將模板糞腸球菌與功能單體N-甲基丙烯酰-L-組氨酸甲酯混合形成復(fù)合體，將乳液穩(wěn)定劑聚乙烯醇，表面活性劑十二烷基硫酸鈉溶于水相（NaHCO3調(diào)水溶液pH 值），將聚乙烯醇、十二烷基硫酸鈉、第二功能單體甲基丙烯酸羥乙酯、交聯(lián)劑乙二醇二甲基丙烯酸酯溶于有機(jī)相，水相-有機(jī)相攪拌成乳液后加入糞腸球菌-功能單體復(fù)合體，混合體系在NaHSO3和（NH4）2S3O8引發(fā)劑作用下（40 ℃，24 h，500 r/min）制備糞腸球菌聚合物微球。經(jīng)NaCl 溶液洗脫模板后的MIPs 微球經(jīng)旋涂系統(tǒng)將其均勻涂蓋于等離子體傳感器表面，然后將制備的MIPs-SPR 傳感器分別在紫外燈（100 W，365 nm）和烘箱（40 ℃）中固化MIP s（圖6）。試驗(yàn)結(jié)果表明，該SPR 傳感器對目標(biāo)菌具有較高的選擇性，對大腸桿菌、枯草桿菌和金黃色葡萄球菌的響應(yīng)信號弱，檢測的線性范圍為2×104～1×108CFU/mL，最低可檢測出～100 細(xì)菌/mL。該研究通過涂抹技術(shù)將乳液聚合的細(xì)菌印跡納米顆粒作為識別元件固定于SPR 傳感器表面，為其它微生物的廣泛檢測提供了技術(shù)支撐。

圖6 糞腸球菌印跡等離子共振傳感器制備示意圖[37]Fig.6 The preparation of E.faecalis-imprinted plasmonic sensor[37]

食源性病毒是導(dǎo)致食源性疾病的重要病原之一，檢測技術(shù)是開展食源性病毒監(jiān)測與防控工作的基礎(chǔ)[38]。Altintas 等[39]將固定于戊二醛處理的玻璃球表面噬菌體MS2 作為模板，以N-異丙基丙烯酰胺、N-叔丁基丙烯酰胺、N，N′-亞甲基雙丙烯酰胺、丙烯酸為功能單體，功能單體與模板混合后再加入N-（3-氨基丙基）甲級丙烯酰胺鹽酸鹽，在過硫酸銨、N，N，N′，N′-四甲基乙二胺引發(fā)下室溫聚合2 h，然后用雙餾水洗脫（60 ℃）高親和力的MIPs 納米微球。1，1-巰基十一酸修飾的SPR傳感器芯片經(jīng)NHS 和EDC 活化后與MIPs 反應(yīng)，使其固定于傳感器表面，乙醇胺封閉非特異性結(jié)合位點(diǎn)。該方法制備噬菌體MS2 MIPs 聚合物納米顆粒直徑為200～230 nm，最優(yōu)條件下，SPR 檢測方法的檢出限為5×106PFU/mL。該研究為食源性病毒分子印跡SPR 傳感器的構(gòu)建及檢測方法的推廣奠定了基礎(chǔ)。

2.4 石英晶體微天平檢測方法

石英晶體微天平是一種質(zhì)量傳感器裝置，具有簡單、經(jīng)濟(jì)、高分辨等特點(diǎn)，可根據(jù)傳感器表面吸附物質(zhì)引起的質(zhì)量變化進(jìn)行定量分析[40]。

銅綠假單胞菌（Pseudomonas aeruginosa）具鞭毛，是引起肉品和水產(chǎn)品的一種重要革蘭氏陰性腐敗菌，給食品安全帶來巨大隱患[41]。Tokonami等[42]首先通過等離子蝕刻技術(shù)處理石英晶體微天平的鍍金芯片，再以吡咯為功能單體、銅綠假單胞菌為模板，通過電聚合技術(shù)在芯片表面聚合形成含有菌體的聚吡咯（PPy）膜。然后，制備的聚吡咯經(jīng)過氧化處理（OPPy）去除模板細(xì)菌，包括溶菌酶處理（消除菌體細(xì)胞壁多糖與聚合物表面的強(qiáng)相互作用） 和氧化納溶液洗脫銅綠假單胞菌模板兩部分（圖7）。以醋酸鈣不動桿菌（Acinetobacter calcoaceticus），大腸桿菌（Escherichia coli），粘質(zhì)沙雷氏菌（Serratia marcescens）為模板菌的形狀類似菌進(jìn)行選擇性試驗(yàn)，結(jié)果表明制備的MIPs 對銅綠假單胞菌具有高選擇性；最優(yōu)條件下，建立的微天平檢測方法對目標(biāo)菌的信號響應(yīng)范圍為103～109CFU/mL。

圖7 基于過氧化聚吡咯細(xì)菌電極示意圖（a），聚吡咯（b）和過氧化聚吡咯（c）電鏡圖[42]Fig.7 Schematic illustration of electrode arrangement for bacterial detection with OPPy film（a），SEM images of target bacteria and prepared PPy（b） and OPPy（c） films[42]

2.5 共振光散射檢測方法

共振光散射是指當(dāng)電子吸收電磁波頻率與散射頻率相同時，電子因共振而強(qiáng)烈吸收光能量并再次發(fā)生散射的過程稱為共振光散射[43]。基于共振光散射光譜建立的檢測方法具有靈敏度高、檢測速度快、操作簡單等特點(diǎn)，已廣泛用于食品中危害物殘留檢測[44]。

甲型肝炎病毒（Hepatitis A virus，HAV）是一種重要的食源性病毒，可引起大規(guī)模疾病爆發(fā)。Yang 等[45]以制備的SiO2納米粒子為核，以多巴胺為功能單體、HAV 為模板，在Tris 緩沖液中（25 ℃）通過自組裝制備了分子印跡納米微球，去離子水洗去聚合物微球表面反應(yīng)的功能單體和病毒模板，然后分別用乙酸和十二烷基硫酸鈉溶液洗脫印跡的HAV（圖8）。聚合物微球共振光散射光譜強(qiáng)度隨著結(jié)合HAV 數(shù)量的增加而增強(qiáng)，最優(yōu)條件下該方法對目標(biāo)物的檢測濃度為0.04～6.0 nmol/L，檢出限為8.6 pmol/L。Liu 等[46]以氨基修飾的SiO2納米微球?yàn)楹?，N-異丙基丙烯酰胺、N，N′-亞甲基雙丙烯酰胺為功能單體，HAV 為模板，過硫酸銨為引發(fā)劑，室溫反應(yīng)2 h 制備了HAV 印跡聚合物，最后以甲醇/乙酸混合溶劑為洗脫溶劑去除HAV 模板。最優(yōu)條件下，基于該聚合物納米微球建立的共振光散射檢測方法對HAV 的線性范圍為5～25 pmol/L，檢出限為1.1 pmol/L。

圖8 病毒印跡聚合物和檢測方法示意圖[45]Fig.8 Principle of preparation of the virus-MIPs and detection of virus[45]

3 結(jié)語與展望

分子印跡技術(shù)作為合成具有特異識別性能合成材料的技術(shù)，已成為一種新的研究方向。近年來，MIPs 在從小分子識別到生物大分子及微生物的高效識別過程中取得了很大進(jìn)展，逐漸成為天然受體的完美代替品。準(zhǔn)確、快速監(jiān)測食品中微生物的污染狀況對降低食物浪費(fèi)和食源性疾病爆發(fā)具有重要意義。當(dāng)前針對細(xì)菌、病毒等微生物形態(tài)結(jié)構(gòu)和表面化學(xué)基團(tuán)開發(fā)的新型功能單體及合成方法顯著提高了MIPs 在水相環(huán)境中對微生物的識別性能，基于MIPs 建立的新型檢測方法也為食品腐敗菌和致病微生物的監(jiān)測提供了新的技術(shù)支撐。然而，當(dāng)前基于分子印跡技術(shù)對食品腐敗菌及致病微生物的檢測仍處于發(fā)展階段，依然存在以下問題需要深入研究：1） 多巴胺作為新的功能單體促進(jìn)了食品腐敗菌及治病微生物印跡聚合物的發(fā)展，但是聚多巴胺表面的官能團(tuán)密度大，致使聚多巴胺印跡材料的非特異性吸附問題突出?？赏ㄟ^利用多巴胺衍生物或采用進(jìn)一步通過物理或化學(xué)方法改性聚多巴胺膜的方法降低非特異性吸附，提高選擇性；2）開發(fā)新的功能單體或優(yōu)化功能單體組合以提高M(jìn)IPs 對目標(biāo)微生物的特異性吸附，開發(fā)新的微生物印跡方法以適應(yīng)不同食品微生物MIPs 的制備；3）目前只有細(xì)菌細(xì)胞壁的脂多糖作為特征識別基團(tuán)用于制備MIPs，這大大限制了MIT 的應(yīng)用范圍，探索新的微生物特征組成MIPs；4）食品樣品基質(zhì)對微生物MIPs 選擇吸附性能及檢測靈敏度的影響較大，研究消除基質(zhì)影響的方法對加快MIT 在食品腐敗菌及致病微生物污染檢測中應(yīng)用有重要意義。