黃江兵 黃明珠

廣東省湛江中心人民醫(yī)院，廣東湛江 524037

目前，使用全自動生化分析儀進(jìn)行總膽汁酸（TBA）測定已極為普遍，但在樣品檢測時(shí)發(fā)現(xiàn)，先進(jìn)行三酰甘油（TG）和總膽固醇（TC）試劑檢測，再進(jìn)行總膽汁酸測定時(shí)所獲結(jié)果升高，甚至出現(xiàn)假陽性結(jié)果[1]。為具體研究三酰甘油和總膽固醇試劑對總膽汁酸測定的干擾，以及試劑針、攪拌棒和比色杯清洗對結(jié)果的影響，本研究采用同一批血清，單獨(dú)測量或在TC、TG測量后立刻進(jìn)行TBA檢測，并使用0.5%次氯酸鈉、無水乙醇和鹽酸對試劑針和比色杯進(jìn)行清洗，以觀察其對總膽汁酸的干擾作用。

1 資料與方法

1.1 儀器和試劑

美國MD2000型全自動生化分析儀；酶法循環(huán)TBA液體雙試劑 （羅氏診斷上海有限公司生產(chǎn)，批號10063/901006/1）；TC、TG 單試劑（德國 Centronic公司生產(chǎn)，南京威特曼公司分裝，批號0609010、0609020）；生理鹽水；蒸餾水；樣品為Randox質(zhì)控血清。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

（1）對儀器全部清洗Wash All后，以TBA配套校準(zhǔn)品定標(biāo)，單獨(dú)連續(xù)測定Randox2質(zhì)控血清10次，以其均值作為實(shí)驗(yàn)對照；（2）先測量TC或TG后，再測量TBA，以評估TC、TG對TBA的污染；（3）設(shè)定特殊檢測和清洗程序，按生化儀設(shè)計(jì)，在菜單上選擇“干擾”，在第一、第二對話框下分別添加 TBA 和 TC、TG，測量 TC、TG 后，測量 TBA；（4）同（3）檢測和清洗之外，增加試劑針的專門清洗；（5）同（3）外，增加比色杯的專門清洗；（6）同（3）外，同時(shí)增加比色杯和試劑針的專門清洗。以上方案均連續(xù)測量10次，以其平均值為最終測量值。同時(shí)進(jìn)行TC、TG試劑中TBA含量的測定。

增加測定通道，在TC、TG測量完成后，連續(xù)10次測定TBA值，觀察測定通道對干擾的消除。

測定TC、TG試劑中TBA含量，并與生理鹽水比較。

1.3 統(tǒng)計(jì)分析

儀器檢測全部完成后，雙擊桌面“康金實(shí)驗(yàn)室管理系統(tǒng)”將結(jié)果存入報(bào)告軟件中。數(shù)據(jù)導(dǎo)入SPSS 19.0軟件，進(jìn)行分析。數(shù)據(jù)以±s進(jìn)行描述，兩兩比較選擇配對資料t檢驗(yàn)進(jìn)行。

2 結(jié)果

2.1 單獨(dú)測量質(zhì)控血清的結(jié)果

單獨(dú)測量質(zhì)控血清TBA為（20.34±4.66）μmol/L。

2.2 TG對TBA的影響

先測量TG后再測量TBA，其均值為（64.33±3.22）μmol/L，與對照相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。經(jīng)過特殊清洗及增加比色杯和試劑針清洗后，TBA測量值與正常比較無區(qū)別 （P>0.05）（表 1）。

表1 TG測量后不同處理對TBA測量的影響

2.3 TC測量對TBA的影響

先測量TC后再測量TBA，其均值為（56.34±3.56）μmol/L，與對照相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。經(jīng)過特殊清洗后，仍高于對照（P<0.05），但增加比色杯和試劑針清洗后，TBA測量值與正常比較無區(qū)別（P>0.05）（表 2）。

表2 TC測量后不同處理對TBA測量的影響

2.4 TC、TG測量后連續(xù)10次TBA含量

先進(jìn)行TC、TG測量后連續(xù)10次TBA含量，可以看到前6次結(jié)果與對照之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P<0.05），從第7次開始，差異性消失（P>0.05），但測量值仍有輕微區(qū)別（表 3）。

2.4 TC、TG試劑中干擾物質(zhì)TBA含量測定

對TC、TG試劑進(jìn)行TBA檢測，并以生理鹽水為對照，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，生理鹽水中TBA為0.1μmol/L，TC中TBA含量為803μmol/L，TG中TBA為732μmol/L，均高于生理鹽水（P<0.01）。

3 討論

TBA是人體肝臟分解代謝產(chǎn)物，其測定對肝硬化、膽汁淤積等疾病診斷治療和預(yù)后具有重要意義。由于目前生化測定儀采用第五代循環(huán)酶放大法，其靈敏度高，假陽性率也相應(yīng)增加[2]。隨著儀器使用時(shí)間的延長，樣品、試劑甚至底物之間的交叉污染也日益嚴(yán)重[3]。交叉污染的來源又常以試劑針和比色杯多見。雖然生化儀自身設(shè)有清洗程序，但MD2000型全自動生化分析儀的清洗效果還有待驗(yàn)證，本實(shí)驗(yàn)即對此進(jìn)行了探討。

表 3 TC、TG 測量后連續(xù) 10 次 TBA 含量（μmol/L，±s）

表 3 TC、TG 測量后連續(xù) 10 次 TBA 含量（μmol/L，±s）

注：與對照相比，*P<0.05、**P<0.01

連續(xù)測定次數(shù) TC處理后TBA值 TG處理后TBA值對照1234567891 0 20.34±4.66 55.65±1.34**43.56±4.55**34.32±2.45**27.15±7.66**26.43±5.44*24.32±3.98*23.25±1.43 21.34±4.65 20.53±3.53 20.42±1.32 20.34±4.66 62.36±3.27**54.26±3.98**45.28±1.54**32.76±2.76**28.13±4.23**25.35±3.78*23.27±3.87 22.18±3.62 20.99±4.37 20.51±1.58

研究發(fā)現(xiàn)，對MD2000產(chǎn)品來說，TC或TG對后續(xù)的TBA存在嚴(yán)重的干擾。曾有學(xué)者報(bào)道日立公司7170型全自動生化分析儀也存在同樣問題[4]。與日立系列不同的是，MD生化分析儀經(jīng)過系統(tǒng)自設(shè)的清洗程序就可以大大減少干擾的存在[5]。尤其是TG干擾，僅需設(shè)定自動清洗程序即可達(dá)到抗干擾效果。但對數(shù)據(jù)仔細(xì)分析仍可以看到，雖然固定清洗后TBA測量值已與對照之間無區(qū)別，但測量值仍略高于對照，即使單獨(dú)增加試劑針清洗或比色杯清洗，該趨勢仍然存在。而在固定清洗程序聯(lián)合試劑針、比色杯清洗后，其測量值接近對照，說明使用MD2000對TBA、TG測量時(shí)，如選擇聯(lián)合清洗程序，其誤差可以忽略不計(jì)。

TC測量對后續(xù)的TBA也有影響。使用固定清洗程序后，其干擾仍然存在。甚至在增加試劑針和比色杯清洗后，其顯著性仍接近0.05。但在同時(shí)增加試劑針很比色杯清洗后，顯著性消失，說明TC污染可能同時(shí)出現(xiàn)在這兩個(gè)部位，單純一個(gè)位置的清洗不能完全消除該影響[6]，應(yīng)該進(jìn)行全面處理。

對測量間隔的分析可以看到，TG、TC測量后經(jīng)過6次測量，其干擾仍然存在[7]。從第7次開始，所獲結(jié)果才與對照之間沒有區(qū)別（P＞0.05），但數(shù)值上仍有輕微差異。因此若要通過TG、TC測量后增加通道來減少TBA測量誤差，至少需要增加6通道[8]。對于某些患者血清TBA在臨界值附近的可疑患者，更應(yīng)該加以注意，最好在增加通道的同時(shí)加以儀器的清洗。

對TG、TC試劑的TBA測試可用看到，這兩種因素對TBA的干擾是由于試劑本身的因素造成的，在目前的技術(shù)條件下，很難從根本上預(yù)防。只能通過優(yōu)先測量TBA[9]或上述的儀器清洗和增加通道來盡量減少污染，若要完全消除，只能期待技術(shù)的進(jìn)一步提高。

[1]丁雙雙，汪皓，沈霞.HDL-C試劑干擾血清總膽汁酸測定結(jié)果的原因分析及對策[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)，2011，26（3）：215-217

[2]王春雷，陸文英，張波.常規(guī)生化試劑對總膽汁酸測定的干擾分析[J].實(shí)用醫(yī)技雜志，2007，14（22）：2974-2975.

[3]孟令章.總膽固醇三酰甘油試劑對總膽汁酸測定的交叉污染及對策[J].西部醫(yī)學(xué)，2010，22（7）：1308-1310.

[4]鄧正輝，張華，李龍平.生化試劑對膽汁酸測定的交叉污染及防范措施[J].中國實(shí)用醫(yī)藥，2008，3（10）：55-56.

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[6]馬菊芬，李建忠.總膽固醇 甘油三酯試劑對總膽汁酸測定結(jié)果的影響[J].長冶醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2007，21（5）：383-384.

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[9]郁淼，張莉，秦兵.通過試驗(yàn)設(shè)計(jì)提高總膽汁酸檢測試劑盒的抗干擾性[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床，2012，9（6）：727-728.