黃鈺峰，鄭智慧*，楊梅林，洪衛(wèi)民

（1. 福建中醫(yī)藥大學(xué)護(hù)理學(xué)院，福建 福州 350122 ；2. 福建省三明第一醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科，福建 三明 365000）

腦卒中相關(guān)性肺炎(SAP) 是指未接受機(jī)械通氣治療的腦卒中患者在發(fā)病后7 d 內(nèi)出現(xiàn)的肺炎[1]。此病是腦卒中患者最常見、最嚴(yán)重的并發(fā)癥之一。有研究指出，SAP 的發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，腦卒中引起的意識(shí)障礙、誤吸及免疫抑制是誘發(fā)此病的重要因素[2]。相關(guān)的研究顯示，腦卒中患者在發(fā)生腦損傷后會(huì)出現(xiàn)細(xì)胞免疫功能下降的情況，這會(huì)增加其發(fā)生感染（特別是肺部感染）的風(fēng)險(xiǎn)。發(fā)生感染又會(huì)反過來影響腦卒中患者的恢復(fù)，導(dǎo)致其預(yù)后不佳。本文主要是探討T 淋巴細(xì)胞（CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+）、Toll 樣受體4（TLR4）與核轉(zhuǎn)錄因子-κB P65（NF-κB p65）在SAP患者血清中的表達(dá)及意義。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象

選 取2019 年5 月 至2020 年5 月 福 建 省 三明第一醫(yī)院收治的17 例SAP 患者和同期該院收治的20 例單純腦卒中患者為研究對(duì)象。將17 例SAP 患者作為SAP 組，將20 例單純腦卒中患者作為非SAP 組。SAP 組患者的納入標(biāo)準(zhǔn)是：1）在發(fā)病后24 h 內(nèi)入院；2）經(jīng)頭顱CT 檢查或MRI檢查被確診患有急性腦卒中；3）病情符合《卒中相關(guān)性肺炎診治中國專家共識(shí)》[1]中規(guī)定的SAP的診斷標(biāo)準(zhǔn)；4）未合并惡性腫瘤、器官功能障礙、自身免疫性疾病及中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病。非SAP 組患者的納入標(biāo)準(zhǔn)是：1）性別、年齡、NHISS 評(píng)分等臨床資料與SAP 組患者相匹配（無顯著差異）；2）在發(fā)病后24 h 內(nèi)入院；3）經(jīng)頭顱CT 檢查或MRI 檢查被確診患有急性腦卒中；4）未合并惡性腫瘤、器官功能障礙、自身免疫性疾病及中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病。非SAP 組20 例患者中有男性13 例，女性7 例。SAP 組17 例患者中有男性11 例，女性6 例。兩組患者的性別、年齡、NHISS 評(píng)分相比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＞0.05），具有可比性。本研究經(jīng)我院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審核通過，研究對(duì)象或其家屬已簽署知情同意書。

1.2 方法

在兩組患者入組次日清晨采集其血樣。抽取其空腹靜脈血10 mL（均分為2 管）。使用流式細(xì)胞儀（采用流式細(xì)胞檢測(cè)法）檢測(cè)血清CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+的 水 平， 采 用 熒 光 定量（PCR）法（按照說明書配制反應(yīng)體系，進(jìn)行擴(kuò)增反應(yīng)）檢測(cè)血清TLR4、NF-κB p65 的水平。TLR4 在全血中的修正表達(dá)量I 的計(jì)算方法是：I=樣本TLR4 Copies/樣本Actin Copies；I×100 表示總RNA100 的情況下目的基因mRNA 的表達(dá)量。NF-κB p65 在全血中的修正表達(dá)量I 的計(jì)算方法是：I=樣本NF-κB p65 Copies/樣本Actin Copies ；I×100 表示總RNA100 的情況下目的基因mRNA 的表達(dá)量。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 22.0 軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。計(jì)量資料用均數(shù)± 標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，采用t 檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料用百分比（%）表示，采用χ2 檢驗(yàn)。P ＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組患者血清T 淋巴細(xì)胞水平的對(duì)比

兩 組 患 者 血 清CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+的水平相比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＞0.05）。詳見表1。

表1 兩組患者血清T 淋巴細(xì)胞水平的對(duì)比（± s）

表1 兩組患者血清T 淋巴細(xì)胞水平的對(duì)比（± s）

組別 D3+(%) CD4+(%) CD8+(%) CD4+/CD8+非SAP 組（n=20） 63.92±9.94 41.36±8.83 19.81±9.56 2.60±1.38 SAP 組（n=17） 65.04±7.41 40.92±8.94 21.13±9.75 2.40±1.29

2.2 兩組患者血清TLR4、NF-κBp65 基因mRNA表達(dá)量的比較

SAP 組 患 者 血 清NF-κB p65 基 因mRNA 的表達(dá)量高于非SAP 組患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＜0.05）。兩 組 患 者 血 清TLR4 基 因mRNA 的表達(dá)量相比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＞0.05）。詳見表2。

表2 兩組患者血清TLR4、NF-κB p65 基因mRNA 表達(dá)量的比較（± s）

表2 兩組患者血清TLR4、NF-κB p65 基因mRNA 表達(dá)量的比較（± s）

注：*與SAP 組比較，P ＜0.05。

組別 TLR4（I×100） NF-κB p65（I×100）非SAP 組（n=20） 3.74±3.15 2.32±1.42*SAP 組（n=17） 4.30±3.15 6.64±1.97

2.3 兩組患者血清T 淋巴細(xì)胞水平與其血清TLR4、NF-κBp65 基因mRNA 表達(dá)量的相關(guān)性

兩組患者血清NF-κB p65 基因mRNA 的表達(dá)量與其血清CD3+、CD4+、CD4+/CD8+的水平呈正相關(guān)（r=0.144，P ＜0.05；r=0.201，P ＜0.05；r=0.071，P ＜0.05）， 與 其 血 清CD8+的 水 平呈負(fù)相關(guān)（r=-0.028，P ＜0.05）。兩組患者血清TRL4 基因mRNA 的表達(dá)量與其血清CD3+、CD4+、CD4+/CD8+的 水 平 呈 正 相 關(guān)（r=0.097，P ＜0.05；r=0.260，P ＜0.05；r=0.149，P ＜0.05），與其血清CD8+的水平呈負(fù)相關(guān)（r=-0.156，P ＜0.05）。詳見表3。

表3 兩組患者血清T 淋巴細(xì)胞水平與其血清TLR4、NFκB p65 基因mRNA 表達(dá)量的相關(guān)性

3 討論

T 淋巴細(xì)胞是一種重要的免疫效應(yīng)細(xì)胞，可分 為CD3+、CD4+、CD8+。這 些T 淋 巴 細(xì) 胞 均 具有調(diào)節(jié)人體免疫活動(dòng)、介導(dǎo)細(xì)胞免疫過程的功能。王冬英等[2]的研究結(jié)果顯示，SAP 組患者血 清CD3+、CD4+、CD4+/CD8+的 水 平 均 明 顯 高于非SAP 組患者，其血清CD8+的水平明顯低于非SAP 組患者。有研究指出，SAP 患者血清CD3+、CD4+、CD4+/CD8+的 水 平 會(huì) 隨 著 其 病 情危險(xiǎn)程度的增高而顯著增高。高危SAP 患者血清CD3+、CD4+、CD4+/CD8+的 水 平 均 高 于 低 危SAP 患者[3]。相關(guān)的研究顯示，腦卒中患者發(fā)病早期外周血T 淋巴細(xì)胞亞群的水平與其SAP 的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)密切相關(guān)[4]。本研究的結(jié)果顯示，兩組患者 血 清CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+的 水 平相比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＞0.05）。這與上述研究結(jié)果不符。這可能與本研究的樣本量較小有關(guān)。NF-kB 是一種具有多向調(diào)節(jié)作用的核轉(zhuǎn)錄因子，可參與諸多生理、病理過程，如炎性反應(yīng)、細(xì)胞凋亡等，尤其是在免疫炎性反應(yīng)過程中可起到重要的作用。其可控制細(xì)胞因子的產(chǎn)生和細(xì)胞的凋亡，在免疫或炎性因素的誘導(dǎo)下其可轉(zhuǎn)移至胞核。有研究指出，NF-kB 的活化及移位可加快信號(hào)通路下游多種促炎細(xì)胞因子（如TNF-α、IL-1β、IL-6）的分泌，加劇炎癥反應(yīng)。相關(guān)的研究顯示，NF-kB 可參與神經(jīng)系統(tǒng)疾病發(fā)生發(fā)展的全過程[5]。本次研究的結(jié)果顯示，SAP 組患者血清NF-κB p65 基因mRNA 的表達(dá)量高于非SAP 組患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＜0.05）。兩組患者血清NF-κB p65 基因mRNA 的表達(dá)量與其血清CD3+、CD4+、CD4+/CD8+的水平呈正相關(guān)（r=0.144，P ＜0.05；r=0.201，P ＜0.05；r=0.071，P ＜0.05），與其血清CD8+的水平呈負(fù)相關(guān)（r=-0.028，P ＜0.05）。這說明，SAP 的發(fā)生可能與NF-κB p65 信號(hào)通路被激活有關(guān)。Toll 樣受體(Toll-like receptors, TLR)是一種可參與非特異性免疫的Ⅰ類重要蛋白質(zhì)分子，也是“連接非特異性免疫和特異性免疫的橋梁”。TLR4 是天然免疫識(shí)別受體，被激活后可同時(shí)啟動(dòng)Myd88、TRIF 這兩條途徑，進(jìn)而可活化NF-κB 及IRFs，啟動(dòng)炎癥基因的表達(dá)。有研究顯示，TLR4/NF-κB 信號(hào)通路在腦缺血后的神經(jīng)炎癥反應(yīng)、腦缺血再灌注損傷中起到重要的作用[6-7]。本次研究的結(jié)果顯示，兩組患者血清TRL4 基因mRNA 的表達(dá)量與其血清CD3+、CD4+、CD4+/CD8+的水平呈正相關(guān)（r=0.097，P ＜0.05；r=0.260，P ＜0.05；r=0.149，P ＜0.05），與其血清CD8+的水平呈負(fù)相關(guān)（r=-0.156，P ＜0.05）。有研究指出，TLR2、TLR3、TLR4、TLR7、TLR9 在腦缺血的發(fā)生、發(fā)展中均起到重要的作用[8]。王娜等[9]在研究中指出，TLR4/NF-κB 信號(hào)通路是與抗炎免疫機(jī)制密切相關(guān)的一條信號(hào)傳導(dǎo)通路，其在炎癥的發(fā)生發(fā)展中起到重要的作用。相關(guān)的研究表明，通過提高腦卒中患者的免疫力，抑制其過度激活的TLR4/NF-κB信號(hào)通路，調(diào)控其體內(nèi)SAP 相關(guān)炎癥因子的水平可有效降低其SAP 的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)。有氧運(yùn)動(dòng)、中醫(yī)藥療法在抑制炎癥信號(hào)通路、調(diào)節(jié)免疫等方面具有獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)，值得在SAP 的防治中推廣應(yīng)用。

綜上所述，腦卒中患者血清TLR4、NF-κB p65 的水平與其血清T 淋巴細(xì)胞的水平密切相關(guān)。SAP 的發(fā)生可能與NF-κB p65 信號(hào)通路被激活有關(guān)。臨床醫(yī)生應(yīng)對(duì)上述情況予以關(guān)注。