俞賽芳，韓珊珊

(三門縣中醫(yī)院 檢驗(yàn)科，浙江 臺州 317100)

貧血是風(fēng)濕免疫系統(tǒng)疾病最常見的關(guān)節(jié)外癥狀之一，且貧血程度與風(fēng)濕免疫系統(tǒng)疾病的活動度有一定的相關(guān)性。風(fēng)濕免疫系統(tǒng)疾病伴發(fā)的貧血主要為慢性病貧血(anaemic of chronic disease，ACD)和缺鐵性貧血(iron deficiency anemia，IDA)，其貧血的發(fā)病機(jī)制尚未明確，但多認(rèn)為與IL-1增多及Epo的合成減少密切相關(guān)。為進(jìn)一步明確風(fēng)濕免疫系統(tǒng)疾病伴貧血患者貧血發(fā)病機(jī)制，本研究觀察患者血清中IL-1及Epo變化，探究血清IL-1及Epo與貧血的相關(guān)性，以期為后期治療方案的制定提供新的思路。

1 資料與方法

1.1 研究對象 選取2019年6月—2020年6月三門縣中醫(yī)院診治的風(fēng)濕系統(tǒng)疾病患者68例，年齡18～75歲，臨床資料完整；另選取同期健康體檢者30名，納入標(biāo)準(zhǔn)：18～75歲，無風(fēng)濕系統(tǒng)疾病或貧血。排除合并其他自身免疫性疾病、惡性腫瘤、嚴(yán)重感染、凝血功能障礙及合并消化道出血、腎性貧血等其他因素導(dǎo)致的貧血患者。

1.2 一般資料 入組患者中男16例，女52例；年齡18～75歲，平均(48.2±14.1歲)；病程2個月～30年；類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎32例，系統(tǒng)性紅斑狼瘡26例，干燥綜合征8例，巨細(xì)胞動脈炎1例，大動脈炎1例。健康對照組中男9名、女21名，年齡32～68歲，平均(46.6±10.3)歲?；颊呓M與健康對照組的性別、年齡差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(>0.05)。

1.3 患者分組 按血紅蛋白(Hb)男≤120 g/L，女≤110 g/L的貧血診斷標(biāo)準(zhǔn)，68例患者中貧血者45例，包括缺鐵性貧血(IDA組)24例，慢性疾病性貧血(ACD組)21例。

1.4 觀察指標(biāo)與檢測方法

1.4.1 實(shí)驗(yàn)室檢測 對比健康對照組、IDA組、ACD組、風(fēng)濕系統(tǒng)疾病不伴貧血患者(無貧血組)的血紅蛋白(HGB)、紅細(xì)胞沉降率(ESR)、血漿鐵蛋白(SF)、促紅細(xì)胞生成素(Epo)、IL-1。魏氏法檢測ESR，IMMAGE 800特定蛋白分析系統(tǒng)檢測SF，ELISA法檢測Epo和IL-1。

1.4.2 紅系造血祖細(xì)胞 采用甲基纖維素培養(yǎng)法，建立若干紅系造血祖細(xì)胞培養(yǎng)體系，分別加入rhIL-1β(英國 PeproTech公司)0、0.05、0.1、0.5、1、5 μg/mL，每個濃度5個復(fù)孔，于37 ℃、25 mmol/L CO飽和濕度孵箱中培養(yǎng)，觀察紅系爆式集落形成單位(burst forming unite-erythroid，BFU-E)、晚期紅系集落形成單位(colony forming unite-erythroid，CFU-E)。根據(jù)細(xì)胞化學(xué)原理，采用原位聯(lián)苯胺染色觀察，鑒定紅系細(xì)胞集落，BFU-E集落計(jì)數(shù)為大于50個細(xì)胞的細(xì)胞團(tuán)。CFU-E集落計(jì)數(shù)為第3天計(jì)數(shù)的40個細(xì)胞組成的細(xì)胞團(tuán)。觀察不同濃度IL-1對紅系造血祖細(xì)胞的作用后，加入rhEpo 2、4、6、8 U/mL(英國 PeproTech公司產(chǎn)品)，觀察是否對不同濃度IL-1形成的作用產(chǎn)生糾正。集落形成率=集落計(jì)數(shù)/培養(yǎng)細(xì)胞總數(shù)×100%。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件處理數(shù)據(jù)，計(jì)量資料4組間比較采用秩和檢驗(yàn)，兩兩比較采用LSD檢驗(yàn)。采用Pearson相關(guān)評估相關(guān)性，<0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 檢測指標(biāo)比較 IDA組、ACD組血清IL-1、Epo水平高于無貧血組、健康對照組，IDA組IL-1水平低于ACD組、Epo水平高于ACD組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(<0.05)。IDA組、ACD組HGB、SF水平低于無貧血組、健康對照組，ESR水平高于無貧血組、健康對照組；IDA組SF、ESR水平低于ACD組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(<0.05)。見表1。

表1 各組血清檢測指標(biāo)比較

2.2 IL-1水平與Epo、ESR、SF及HGB水平的相關(guān)性 患者血清IL-1與SF(=-0.63)、HGB(=-0.43)呈負(fù)相關(guān)(<0.05)，與ESR呈正相關(guān)(=0.79，<0.05)，與Epo無相關(guān)性(=0.14，>0.05)。

2.3 IL-1對正常骨髓CFU-E、BFU-E生成的影響 加入不同濃度的rhIL-1β后，BFU-E及CFU-E的集落形成受到了抑制，隨著加入到培養(yǎng)體中rhIL-1β量的增加，集落形成率降低更為明顯，BFU-E集落形成率依次為100%、82%、79%、65%、51%、40%，CFU-E集落形成率依次為100%、82%、76%、68%、45%、35%，見圖1。

圖1 不同濃度IL-1對BFU-E及CFU-E的抑制作用

2.4 rhEpo對IL-1引發(fā)BFU-E及CFU-E的抑制作用的糾正 加入不同濃度的rhEpo后，集落形成率增加，且隨著rhEpo濃度的增加，集落形成率呈上升趨勢，BFU-E集落形成率依次為45%、59%、66%、80%、91%，CFU-E集落形成率依次為50%、62%、68%、86%、94%，見圖2。

圖2 rhEpo對IL-1引發(fā)BFU-E及CFU-E的抑制作用的糾正

3 討論

風(fēng)濕免疫系統(tǒng)疾病是一類不明病因、臨床表現(xiàn)復(fù)雜多樣、對多器官直接造成危害的自身免疫性疾病。IL-1是一種在細(xì)胞免疫激活中起調(diào)節(jié)作用的炎癥介質(zhì)，當(dāng)不同部位的巨噬細(xì)胞受刺激被激活后，可產(chǎn)生并分泌IL-1，誘導(dǎo)多種風(fēng)濕免疫系統(tǒng)疾病的發(fā)生。有研究表明，IL-1可增加中性粒細(xì)胞釋放乳鐵蛋白，進(jìn)而與轉(zhuǎn)鐵蛋白競爭結(jié)合血清鐵，從而引發(fā)血清游離鐵的新生，而與乳鐵蛋白結(jié)合的血清鐵被單核-巨噬細(xì)胞系統(tǒng)吞噬，進(jìn)而引發(fā)缺鐵性貧血。有研究表明Epo分泌不足可能與IL-1介導(dǎo)的腎小管周圍損傷相關(guān)，同時IL-1還可在轉(zhuǎn)錄水平對Epo的產(chǎn)生具有抑制作用。

本研究結(jié)果顯示，IDA組的IL-1及Epo水平均顯著高于無貧血組及健康對照組；IDA組與ACD組比較，IL-1顯著降低而Epo卻顯著升高。其發(fā)生機(jī)制可能與腎小管細(xì)胞周圍存在的血管傷有關(guān)，其主要發(fā)生原因是IL-1可競爭性地結(jié)合于Epo受體及存在Epo與IL-1抵抗。本研究中，IDA組的HGB及SF水平均顯著低于無貧血組及健康對照組，而ESR水平顯著升高，支持了上述觀點(diǎn)。進(jìn)一步相關(guān)分析顯示，IL-1與Epo無明顯相關(guān)性，與SF、HGB呈負(fù)相關(guān)，與ESR呈正相關(guān)，其原因可能是多種細(xì)胞因子如腫瘤壞死因子α、γ干擾素、IL-6及IL-13等通過不同的方式，相互協(xié)同，抑制骨髓造血。

本組結(jié)果中，IL-1可抑制BFU-E及CFU-E的形成，且隨著濃度的增加抑制作用更明顯。同時，rhEpo可以糾正由IL-1(0.1 μg/mL)所引發(fā)的BFU-E及CFU-E的抑制作用，且糾正程度隨著rhEpo濃度的增大也不斷增大。分析原因可能為：風(fēng)濕免疫系統(tǒng)疾病中，IL-1可與紅細(xì)胞表面的IL-1受體結(jié)合，誘發(fā)紅細(xì)胞的凋亡，而Epo可下調(diào)BFU-E及CFU-E表面的IL-1受體的表達(dá)，從而糾正IL-1的抑制反應(yīng)。

綜上所述，IL-1在風(fēng)濕免疫系統(tǒng)疾病伴貧血的發(fā)病過程中發(fā)揮著重要作用，IL-1可能通過抑制BFU-E及CFU-E的形成引發(fā)貧血，rhEpo可以對此進(jìn)行糾正。這對于臨床上研究風(fēng)濕免疫系統(tǒng)疾病伴貧血的發(fā)生機(jī)制有一定意義，并為今后臨床中使用細(xì)胞因子拮抗劑治療風(fēng)濕免疫系統(tǒng)疾病伴貧血提供了理論依據(jù)。