孫樂明 趙君 陳芝慧 王文淵

摘要：目的建立關(guān)節(jié)克痹丸定性定量檢測(cè)方法，為其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提高提供依據(jù)。方法采用薄層色譜法，對(duì)制劑中麻黃和虎杖進(jìn)行定性鑒別。通過高效液相色譜法測(cè)定了有效成分大黃素的含量。結(jié)果 TLC鑒別方法專屬性好，斑點(diǎn)清晰且分離度好;HPLC含量測(cè)定結(jié)果顯示，大黃素在12.217μg～28.507μg/mL，線性關(guān)系良好。儀器精密度、重復(fù)性、穩(wěn)定性、加樣回收率的RSD值均符合要求。結(jié)論所建立的方法操作簡(jiǎn)單，重復(fù)性較好，可用于關(guān)節(jié)克痹丸的質(zhì)量控制研究。

關(guān)鍵詞：關(guān)節(jié)克痹丸;質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn);薄層色譜法;高效液相色譜法

【中圖分類號(hào)】 R322.7+2 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】 A? ? ? 【文章編號(hào)】2107-2306（2022）13--02

關(guān)節(jié)克痹丸的標(biāo)準(zhǔn)收載于衛(wèi)生部部頒標(biāo)準(zhǔn)中成藥成方制劑第二十冊(cè)，為濃縮丸劑，主要成份由川烏（制）、虎杖、麻黃等15味中藥組成。具有祛風(fēng)散寒、活絡(luò)止痛的功效，用于關(guān)節(jié)炎、四肢酸痛、伸展不利[1]。方中川烏（制）、草烏（制）等為主藥，起祛風(fēng)止痛之效，配以防已、獨(dú)活等除濕止痛，配以桂枝、麻黃等溫陽利水化氣，再佐以黃芩等清熱并防止諸藥過于溫燥，全方配伍適宜，具有消除關(guān)節(jié)腫痛，調(diào)節(jié)免疫平衡，恢復(fù)關(guān)節(jié)功能等作用。其臨床使用有效、安全，不良反應(yīng)極少且較輕[2]。原標(biāo)準(zhǔn)為衛(wèi)生部98年標(biāo)準(zhǔn)，其內(nèi)容只有1項(xiàng)粉末鑒別和1項(xiàng)麻黃的TLC鑒別以及丸劑常規(guī)檢查項(xiàng)目，難以有效的控制藥品質(zhì)量。本次藥品標(biāo)準(zhǔn)提高研究，通過對(duì)原標(biāo)準(zhǔn)符合基礎(chǔ)上，重新對(duì)本品的性狀、鑒別、檢查以及含量測(cè)定進(jìn)行了全面研究，并根據(jù)研究結(jié)果重新制訂了關(guān)節(jié)克痹丸藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)（草案）。增加了虎杖的TLC鑒別，并通過方法學(xué)研究，建立了有效成分大黃素的含量測(cè)定方法，以進(jìn)一步提高該藥的質(zhì)量控制水平。

1. 材料與儀器

薄層板1：硅膠G薄層板（薄層板，規(guī)格：100×200mm，）;薄層板2：自制硅膠G薄層板（固定相：硅膠G，粘合劑：0.5%的CMC-Na，涂布厚度：0.3mm，規(guī)格：100×200mm）; MS304s/01電子天平;P-1型薄層色譜展開缸;5μL點(diǎn)樣毛細(xì)管;SLD-1薄層色譜攝影儀;Waters2690高效液相色譜儀，waters2489雙波長(zhǎng)紫外檢測(cè)器。

關(guān)節(jié)克痹丸（20151201，20151202，20151203，貴州信邦制藥股份有限公司）;鹽酸麻黃堿對(duì)照品，中國藥品生物制品檢定所，批號(hào)為0714-9903;大黃素對(duì)照品，中國食品藥品檢定研究院，批號(hào)為110756-200110。甲醇、乙腈均為色譜純，其余試劑均為分析純，水為超純水。

2.方法與結(jié)果

2.1虎杖的TCL鑒別[3]

取3批本品各10粒，研碎，加甲醇10mL，超聲處理15min，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)尤燃淄?mL使其溶解，作為供試品溶液。取大黃素對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。吸取對(duì)照品溶液5μL，供試品溶液各10μL。分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以石油醚（30～60℃）-甲酸乙酯-甲酸（15：5：1）的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，置于紫外燈下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，置于氨蒸氣中熏后，斑點(diǎn)變?yōu)榧t色。

2.2方法學(xué)驗(yàn)證

2.2.1專屬性考察

吸取對(duì)照品溶液5μL，供試品溶液各10μL。點(diǎn)樣于同一硅膠G薄層板上，展開，取出，晾干，置于紫外燈下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，置于氨蒸氣中熏后，斑點(diǎn)變?yōu)榧t色。表明該方法的專屬性良好。

2.2.2耐用性考察

（1）更換不同品牌薄層板

吸取對(duì)照品溶液5μL，供試品溶液各10μL。點(diǎn)樣，更換不同品牌的薄層板（薄層板1、薄層板2），展開，取出，晾干，置于紫外燈下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，置氨蒸氣中熏后，斑點(diǎn)變?yōu)榧t色，且更換不同品牌薄層板后，各薄層板之間無顯著差異，表明更換不同品牌薄層板對(duì)虎杖的薄層鑒別無影響。

（2）更換不同溫度

吸取對(duì)照品溶液5μL，供試品溶液各10μL。點(diǎn)樣于同一硅膠G薄層板上，展開，取出，晾干，置于紫外燈下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，置氨蒸氣中熏后，斑點(diǎn)變?yōu)榧t色，且更換不同溫度后，各薄層板之間無顯著差異，表明更換不同溫度對(duì)虎杖的薄層鑒別無影響。

（3）更換不同濕度

吸取對(duì)照品溶液5μL，供試品溶液各10μL。點(diǎn)樣于同一硅膠G薄層板上，展開，取出，晾干，置于紫外燈下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，置氨蒸氣中熏后，斑點(diǎn)變?yōu)榧t色，且更換不同濕度后，各薄層板之間無顯著差異，表明更換不同濕度對(duì)虎杖的薄層鑒別無影響。

2.3大黃素的含量測(cè)定[4-5]

2.3.1色譜條件

Diamonsil C18柱（250mm×4.6mm，5μm），柱溫35℃，甲醇-0.1%磷酸水（80：20）為流動(dòng)相，流速為1.0mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)254nm。

2.3.2系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

吸取對(duì)照品溶液20μL注入高效液相色譜儀測(cè)定，理論板數(shù)按大黃素計(jì)算大于4000。

2.3.3溶劑制備

對(duì)照品溶液的制備：精密稱取大黃素對(duì)照品適量，加甲醇制成每1mL含20μg的溶液，即得。

供試品溶液的制備：取本品適量，研細(xì)，取粉末1g，精密稱定，置燒瓶中，加三氯甲烷30ml和2.5mol/L硫酸20mL，置80℃水浴中加熱回流2h，冷卻至室溫，搖勻。分取三氯甲烷液，水層用三氯甲烷20mL振搖提取，合并三氯甲烷液，回收溶液至干，殘?jiān)蛹状歼m量使溶解，并轉(zhuǎn)移至25mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。

陰性制劑溶液的制備：取去除虎杖的陰性制劑，同供試品溶液的方法制備，即得。

2.3.4方法學(xué)考察

（1）空白試驗(yàn)

取陰性制劑溶液20μL注入高效液相色譜儀測(cè)定，結(jié)果表明，在大黃素峰處基本無干擾。

（2）標(biāo)準(zhǔn)曲線及線性范圍

取大黃素適量，精密稱定，制成81.45μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)貯備液，再精密吸取上述對(duì)照品溶液1.5mL、2mL、2.5mL、3mL、3.5mL，用甲醇定容至10mL，分別吸取20μL對(duì)照品溶液注入液相色譜儀測(cè)定。結(jié)果見表-1。

經(jīng)回歸分析，得回歸方程：A=74085C+57076，相關(guān)系數(shù)r=0.9991，線性范圍12.217～28.507μg/mL。

（3）精密度試驗(yàn)

吸取濃度為20.362μg/mL的對(duì)照品溶液20μL注入高效液相色譜儀測(cè)定，連續(xù)6次，結(jié)果見表-2。

（4）重復(fù)性試驗(yàn)

配置供試品溶液（批號(hào)）共6份，分別吸取20μL溶液注入液相色譜儀測(cè)定，結(jié)果見表-3。

（5）加樣回收率試驗(yàn)

取批號(hào)關(guān)節(jié)克痹丸，研碎的粉末約0.5g，精密稱定，共6份，精密加入81.45μg/mL大黃素對(duì)照品溶液3.1mL，混勻后，其他處理同含量測(cè)定。分別吸取20μL溶液注入液相色譜儀測(cè)定，結(jié)果見表-4。

（6）供試品穩(wěn)定性試驗(yàn)

取供試品溶液，于0h、2h、4h、6h、8h、10h、12h精密吸取20μL注入高效液相色譜儀，測(cè)定樣品12h的穩(wěn)定性。結(jié)果表明，供試品在12h內(nèi)穩(wěn)定，見表-5。

（7）樣品含量測(cè)定

分別精密吸取20μL注入高效液相色譜儀測(cè)定，結(jié)果如表-6所示。

3. 結(jié)論

質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)是中藥研究的重要內(nèi)容之一，需要在中藥的處方組成、制備工藝和藥效物質(zhì)等基礎(chǔ)上，運(yùn)用現(xiàn)代科學(xué)技術(shù)，建立科學(xué)、合理、可行的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，從而保障藥品的質(zhì)量可控[6]。因此，本實(shí)驗(yàn)對(duì)關(guān)節(jié)克痹丸中虎杖進(jìn)行薄層鑒別，對(duì)有效成分大黃素的含量進(jìn)行測(cè)定，制定關(guān)節(jié)克痹丸的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，提高其質(zhì)量控制水平，保證藥品的安全性和有效性。結(jié)果表明該方法操作簡(jiǎn)單，結(jié)果準(zhǔn)確，專屬性強(qiáng)，穩(wěn)定性和重復(fù)性均較好，為關(guān)節(jié)克痹丸質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的提高提供依據(jù)。

參考文獻(xiàn)：

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作者簡(jiǎn)介：孫樂明（1984-），男，碩士，助理研究員，研究方向?yàn)橹兴幉脑耘嗯c開發(fā)。