張恩铚 杜丹陽 劉利根 石心紅

摘要 目的：通過分子對接與網(wǎng)絡(luò)藥理學技術(shù)，深度發(fā)掘蘇黃止咳膠囊主要活性成分，明確其作用靶點與信號通路，分析其治療咳嗽變異性哮喘（CVA）多靶點、多通路的干預作用機制，闡明蘇黃止咳膠囊（SH）的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)及作用機制。方法：依托于網(wǎng)絡(luò)藥理學技術(shù)與分子對接技術(shù)，從SH中篩選活性化合物，并對其通路進行分析。結(jié)果：篩選得到75個活性化合物，其中麻黃與前胡所含化合物占比最多，各為16種，其余依此為紫蘇子13種、枇杷葉11種、五味子7種、牛蒡子5種、地龍4種、紫蘇葉3種。共得到CVA相關(guān)靶點429個，共得到相關(guān)通路316條，其中涉及相關(guān)疾病信號通路2條，與炎癥相關(guān)通路4條，肺損傷保護通路1條。結(jié)論：本文初步探討了SH的主要活性活性成分、相關(guān)靶點及涉及通路，預測其治療CVA的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)及其作用機制，為后續(xù)處方二次開發(fā)優(yōu)化及臨床治療CVA的療效評價指標提供參考與物質(zhì)基礎(chǔ)。

關(guān)鍵詞 分子對接;網(wǎng)絡(luò)藥理學;蘇黃止咳膠囊;咳嗽變異性哮喘;作用機制

Mechanism of Suhuang Zhike Capsules Against Cough Variant Asthma Based on Molecular Docking and Network Pharmacology

ZHANG Enzhi，DU Danyang，LIU Ligen，SHI Xinhong

（School of Traditional Chinese Pharmacy，China Pharmaceutical University，Nanjing 211198，China）

Abstract Objective：To explore the main active components of Suhuang Zhike Capsules（SH），identify the targets and signaling pathways，analyze the multi-target and multi-pathway intervention mechanism in the treatment of cough variant asthma（CVA），and clarify the pharmacodynamic material basis and mechanism of action of SH based on molecular docking method and network pharmacology.Methods：Based on the network pharmacology and molecular docking，active components of SH were screened out and the corresponding pathways were analyzed.Results：Seventy-five active components were screened out from SH，and Ephedrae Herba and Peucedani Radix contained the largest proportions of components，16 for each one，followed by Perillae Fructus for 13，Eriobotryae Folium for 11，Schisandrae Chinensis Fructus for 7，Arctii Fructus for 5，Pheretima for 4，and Perillae Folium for 3.In addition，a total of 429 targets related to CVA and 316 pathways were obtained，including two disease-related signaling pathways，four inflammation-related pathways，and one protection pathway against lung injury.Conclusion：The present study preliminarily discussed the main active components，related targets，and pathways involved in SH and predicted the pharmacodynamic material basis and mechanism of SH against CVA，which is expected to provide references and material basis for the subsequent optimization of prescription modification and research on the efficacy evaluation indexes in the clinical treatment of CVA.

Keywords Molecular docking;Network pharmacology;Suhuang Zhike Capsules; Cough variant asthma;Mechanism of action

中圖分類號：R285;R256.12文獻標識碼：Adoi：10.3969/j.issn.1673-7202.2022.10.003

咳嗽變異性哮喘（Cough Variant Asthma，CVA）是臨床上一種較為特殊的哮喘類型，是導致成人慢性咳嗽的主要病因。臨床特點主要表現(xiàn)為持續(xù)性或慢性咳嗽，在清晨和夜晚咳嗽尤為劇烈，冷空氣、感冒、油煙等會加重咳嗽[1]?；颊邿o明顯臨床感染表現(xiàn)，亦無呼吸困難、氣促、明顯喘息等。一般認為CVA是哮喘或其亞型的前期，也將其稱之為隱匿性哮喘[2]。當前有關(guān)CVA的具體發(fā)病機制尚不明晰，西醫(yī)主要以支氣管擴張劑與吸入激素治療為主，但存在患者接受及依存性差等問題，無法堅持長期治療，病情會反復發(fā)作。研究顯示，蘇黃止咳膠囊（SUHUANG ZHIKE JIAONANG，SH）治療變異性哮喘已取得不錯的臨床療效[3]，但其療效與西醫(yī)治療相比是否存在差異尚無統(tǒng)一定論。0C78C04D-8860-4BF5-ABFB-98B024AB37B0

SH是由中日友好醫(yī)院晁恩祥教授依據(jù)臨床40余年的經(jīng)驗研制而成，是目前上市中成藥中唯一可治療《諸病源候論》中所記載“風咳”一病的藥物，在現(xiàn)代醫(yī)學中，該產(chǎn)品也是針對CVA和感冒后咳嗽所研制[4]。該膠囊由九味藥所組成，分別為麻黃、紫蘇葉、蟬蛻、五味子、前胡、地龍、牛蒡子、蜜枇杷葉和紫蘇子[5]。SH是于2001年國家中醫(yī)藥管理局的新藥創(chuàng)新基金項目立項的項目，在新藥指導下所研制出來，經(jīng)臨床應用證明具有較好的臨床效果[6]。但有關(guān)SH治療CVA的具體活性組分/成分、目標靶點及其作用機制并未完全闡明。因此，本研究將以SH作為研究對象，借助分子對接與網(wǎng)絡(luò)藥理學技術(shù)，通過搭建成分-靶點-通路-疾病網(wǎng)絡(luò)，系統(tǒng)全面地研究活性成分、作用靶點與疾病間的相互連接關(guān)系及密切程度，闡明SH中所含有的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)，以及治療相關(guān)疾病的具體通路，為之后深入闡述SH治療CVA的具體作用機制提供科學依據(jù)，以期為中醫(yī)藥臨床治療CVA提供理論基礎(chǔ)及參考。

1 資料與方法

1.1 資料來源 中藥系統(tǒng)藥理學數(shù)據(jù)庫與分析平臺（Traditional Chinese Medicine Systems Pharmacology Database and Analysis Platform，TCMSP）（http：//tcmspw.com/tcmsp.php），Pharm Mapper數(shù)據(jù)庫（http：//www.lilab-ecust.cn/pharmmapper/submitfile.html），Pubchem數(shù)據(jù)庫（https：//pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/），SIB數(shù)據(jù)庫（http：//www.molecular-modelling.ch/swissdrugdesign.php），GeneCards數(shù)據(jù)庫（https：//www.genecards.org/），UniProt數(shù)據(jù)庫（https：//www.uniprot.org/），STRING（Functional Protein Association Networks）數(shù)據(jù)庫，DisGeNET數(shù)據(jù)庫（https：//www.disgenet.org/），Integrity數(shù)據(jù)庫（https：//integrity.clarivate.com/integrity/xmlxsl），Metascape數(shù)據(jù)庫（https：//metascape.org/gp/index.html），UniProt數(shù)據(jù)庫（https：//www.uniprot.org），RSB數(shù)據(jù)庫（https：//www.rcsb.org），Cytoscape軟件（version 3.6.1），分析工具Network Analyzer及插件CytoNCA、MCODE，Chimera 1.14分子對接軟件，Autodock vina 1.1.2插件。

1.2 研究方法

1.2.1 活性成分的搜索與篩選 首先通過國家知識基礎(chǔ)設(shè)施數(shù)據(jù)庫（China National Knowledge Infrastructure，CNKI）查詢SH近年研究，明確組成SH的各類中藥，利用TCMSP檢索SH中麻黃、紫蘇葉、蟬蛻、五味子、前胡、地龍、牛蒡子、蜜枇杷葉和紫蘇子所含化合物。以麻黃為例，輸入關(guān)鍵詞“麻黃”，搜索得到其相關(guān)活性成分，根據(jù)藥物的ADME（Absorption、Distribution、Metabolism、Excretion）特性，設(shè)定口服生物利用度（Oral Bioavailability，OB）大于30%，類藥性（Drug Likeness，DL）需大于0.18，在此條件下篩選得到麻黃成藥性較高的化學成分作為活性成分。依此篩選出具有明確CAS編號的活性成分作為成分庫。

1.2.2 活性成分潛在作用靶點的篩選 將之前已篩選好的活性成分CAS編號依次輸入到PubChem數(shù)據(jù)庫中，下載其相關(guān)SMILES化學式及3D結(jié)構(gòu)式（文件格式為SDF）。之后登錄Pham Mapper數(shù)據(jù)庫（反向藥效團匹配數(shù)據(jù)庫），將下載好的活性成分3D結(jié)構(gòu)圖上傳，設(shè)置默認靶點數(shù)為300，點擊Submit（提交），得到有關(guān)各個活性成分得分排名前300的靶點。其次，登錄SIB數(shù)據(jù)庫，將之前得到的SMILES化學式導入數(shù)據(jù)庫，得到各活性成分對應的靶點。最后將2個數(shù)據(jù)庫所得靶點取并集，作為SH的潛在作用靶點。

1.2.3 疾病潛在作用靶點的篩選 首先通過Integrity數(shù)據(jù)庫搜尋關(guān)于CVA的正式英文表達，即Cough Variant Asthma。登錄GeneCards數(shù)據(jù)庫及DisGeNET數(shù)據(jù)庫，輸入上述英文表達，得到其疾病對應的作用靶點，將上述2個數(shù)據(jù)庫所得靶點進行統(tǒng)一并取并集，即得CVA的總疾病靶點。

1.2.4 成分-靶點-疾病網(wǎng)絡(luò)模型構(gòu)建與分析 將上述所得SH總靶點與CVA總靶點取交集，得到SH治療CVA的潛在作用靶點，將數(shù)據(jù)進行歸納整理，使其符合軟件標準，將成分、靶點、疾病數(shù)據(jù)導入Cytoscape軟件（version 3.6.1），繪制成成分-靶點-疾病網(wǎng)絡(luò)圖，并通過運用Network Analyzer、CytoNCA等插件及網(wǎng)絡(luò)拓撲性質(zhì)進行數(shù)據(jù)分析。

1.2.5 疾病靶點蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建 STRING數(shù)據(jù)庫是一個進行在線搜索與構(gòu)建當前已知蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用（Protein-protein Interaction，PPI）網(wǎng)絡(luò)的數(shù)據(jù)庫，現(xiàn)在已更新到了11.0版本，數(shù)據(jù)庫里已存儲5 090個物種，約2 460萬種蛋白，及超過20億條PPI的信息。將之前篩選所得成分-疾病共同作用潛在靶點信息輸入到STRING數(shù)據(jù)庫，將蛋白種類設(shè)置為Homo Sapiens（智人），網(wǎng)絡(luò)搭建依據(jù)設(shè)置為Evidence（證據(jù)），最低PPI閾值設(shè)定為High Confidence（高可信度0.7），同時勾選Hide Disconnected Nodes In The Network（隱藏網(wǎng)絡(luò)中無關(guān)聯(lián)節(jié)點），其余保持默認設(shè)置，點擊Export（導出），選擇下載其TSV格式文件，將下載文件導入Cytoscape軟件，開始構(gòu)建靶點PPI網(wǎng)絡(luò)圖。0C78C04D-8860-4BF5-ABFB-98B024AB37B0

1.2.6 基因本體（Gene Ontology，GO）富集分析和京都基因和基因組百科全書（Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes，KEGG）富集分析 Metascape數(shù)據(jù)庫是一個提供基因注釋與分析資源的門戶網(wǎng)站，其自帶自動化元分析工具，支持在線富集通路分析，具有數(shù)據(jù)更新快，資源庫豐富，簡便操作等優(yōu)勢。登錄Metascape數(shù)據(jù)庫，將之前篩選所得疾病對應作用靶點信息導入庫內(nèi)，點擊Submit（提交），將物種設(shè)置為Sapiens（人類），接著點擊Custom Analysis（個性化分析），進入相應界面后，點擊Enrichment（富集），設(shè)置通路為KEGG Pathway，其余選項均不勾選，最后點擊Enrichment Analysis（富集分析），進入分析報告頁，得到相關(guān)分析結(jié)果。GO分析如上，分別選擇對應通路即可。

1.2.7 成分-靶點網(wǎng)絡(luò)藥理拓撲學性質(zhì)分析 網(wǎng)絡(luò)藥理模型構(gòu)建后，使用Cytoscape軟件自帶插件Network Analyzer及CytoNCA，對該模型進行網(wǎng)絡(luò)拓撲分析，得到各節(jié)點的介數(shù)中心度（Betweenness Centrality，BC）、距離中心度（Closeness Centrality，CC）和等級值（Degree）。通過對上述3組數(shù)據(jù)進行分析，得到該網(wǎng)絡(luò)模型中具有樞紐作用的活性成分?；诰W(wǎng)絡(luò)藥理學算法理論，除去氧哈林通堿外，從單個活性成分-靶點網(wǎng)絡(luò)角度考慮，上述活性成分可能代表了SH主要療效。而從靶點角度來看，單個靶點受到的活性成分影響越多，則說明SH對該靶點的可調(diào)控可能性越高。

1.2.8 潛在活性成分-靶點分子對接驗證 首先將成分-靶點-疾病網(wǎng)絡(luò)模型中Degree參數(shù)均值作為參考條件，以此篩選出大于均值的核心活性成分，進入TCMSP，下載相關(guān)核心活性成分的MOL2文件。之后再進入RSB數(shù)據(jù)庫（https：//www.rcsb.org）下載關(guān)鍵靶點蛋白的3D結(jié)構(gòu)文件（PDB格式），將靶蛋白文件導入Chimera 1.14軟件，對每個蛋白分子進行Minimize優(yōu)化及去水加氫處理，并移除其原配體;同時導入核心活性成分，除移除配體外，處理方式同上。運行Autodock Vina 1.1.2插件，設(shè)置Binding Pocket區(qū)域范圍，進行分子對接，對得到結(jié)果進行可視化處理。

2 結(jié)果

2.1 活性成分篩選 初步得到95種化學成分，CAS編號共得到75種化合物。在所得化合物中，麻黃含有16個，枇杷葉含有11個，前胡含有16個，牛蒡子含有5個，五味子含有7個，紫蘇子含有13個，紫蘇葉含有3個，地龍含有4個。SH篩選所得化合物基本信息。見表1。

2.2 成分-靶點-疾病網(wǎng)絡(luò)模型構(gòu)建與分析 潛在作用成分-靶點-疾病網(wǎng)絡(luò)相互作用模型綠色橢圓代表SH潛在活性成分，黃色長方形代表作用靶點，紅色菱形則代表疾病。該圖中共包含了505個節(jié)點（包括化學成分75個，靶點429個，疾病1個）與4 419條邊（其中成分-靶點3 991條，靶點-疾病428條），圈內(nèi)的綠色與黃色節(jié)點則表示Degree值較大的成分與靶點，即越接近圈中心，比重越大。見圖1。圖2中，SH的每個潛在活性成分平均連接于53.21（3 991/75）個靶標，而同時每個靶點又平均連接9.30（3 991/429）個藥物活性成分，這種多活性物作用同一靶點與多靶點作用同一活性物的現(xiàn)象充分展現(xiàn)了中藥多成分協(xié)同作用多靶點的特色。同時，從活性物角度來看，作用超過60個靶點的化合物占總化合物的5.3%，整個網(wǎng)絡(luò)體系中，SH內(nèi)應存在可作用于大部分靶點的少數(shù)關(guān)鍵化合物。

2.3 成分-靶點網(wǎng)絡(luò)藥理拓撲學性質(zhì)分析 成分-靶點網(wǎng)絡(luò)模型中具有樞紐作用排名前8的活性成分分別為Deoxyharringtonine（去氧哈林通堿）、（E）-（4-methylbenzylidene）-（4-phenyltriazol-1-yl）amine、Prodelphinidin B6、praeruptorin E（紫花前胡素E）、isoegomaketone（異紫蘇酮）、Farnesiferol A（法尼斯淝醇A）、Pectolinarigenin（柳穿魚黃素）、Herbacetin（草質(zhì)素），其中Deoxyharringtonine（去氧哈林通堿）為抗腫瘤類成分，故排除。分析發(fā)現(xiàn)有約24%的靶點與不少于15個活性成分相互作用，在此之中又有26個靶點鏈接超過30種活性成分。

2.4 PPI網(wǎng)絡(luò)分析 K-Core值超過5的模塊共有5個，這些蛋白之間存在著比較緊密的聯(lián)系，可能共同作用于某個生物過程。其中模塊5和模塊4與信號轉(zhuǎn)導有關(guān)，模塊3則與細胞周期調(diào)控相關(guān)。見圖3。對模塊1分析，發(fā)現(xiàn)其中存在大量與炎癥相關(guān)靶點，調(diào)控炎癥反應，參與炎癥應答及細胞防御應答。見圖4。

2.5 GO富集分析及KEGG通路分析 在GO富集分析中，含生物過程（Biological Process，BP）條目8 036條，細胞組分（Cellular Components，CC）條目713條，分子功能（Molecular Function，MF）條目1 384條，KEGG通路分析得到通路共316條，各類別排名前20的通路見圖5。

在KEGG前20條通路中，分子信號通路占7條，疾病信號通路占13條，包含Influenza A、PI3K-AKT、Th 17、IL-17、HIF-1、Pertussis、核因子κB（NF-κB）等。其中Influenza A、Pertussis為流感咳嗽相關(guān)通路，可誘發(fā)咳嗽變異性哮喘的發(fā)生與發(fā)展。Th 17、IL-17、NF-κB、HIF-1為炎癥相關(guān)信號通路，PI3K-AKT為肺損傷保護相關(guān)通路[10-11]。

PI3K-AKT信號通路主要包括2個關(guān)鍵蛋白，即3-磷酸肌醇激酶（Phosphoinositide 3-kinase，PI3K）與絲/蘇氨酸蛋白激酶（AKT）。在細胞的增殖與成活中發(fā)揮著重要作用[12]。經(jīng)PI3K激活的AKT，進一步抑制或激活下游Caspase9、Bad、Forkhead、NF-κB、mTOR、P21、Par-4等分子，從而介導胰島素和多種生長因子所誘發(fā)的細胞生長，促進細胞存活，是重要的抗凋亡調(diào)節(jié)通路[13]。有研究發(fā)現(xiàn)，通過調(diào)節(jié)PI3K-AKT信號通路中相關(guān)分子的表達，可有效改善哮喘模型小鼠的氣道重塑，達到治療哮喘的目的[14]。Th 17細胞以分泌IL-17（白細胞介素-17）而得名，Th 17細胞及分泌出的IL-17在氣道重塑及氣道高原反應過程中發(fā)揮重要作用。Koga等[15]發(fā)現(xiàn)激素抵抗型哮喘模型小鼠的氣道炎癥和氣道高原反應可被Th 17細胞所介導。Rudner等[16]利用上皮細胞在小鼠體內(nèi)過量分泌IL-17，發(fā)現(xiàn)小鼠支氣管及細支氣管上皮細胞增生肥大，同時伴隨肺實質(zhì)中嗜酸性粒細胞和巨噬細胞浸潤。NF-κB是細胞中重要的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子，有研究顯示，在哮喘發(fā)生、發(fā)展過程中，NF-κB信號通路在其中發(fā)揮著重要作用[17-18]。王金磊等[19]發(fā)現(xiàn)在哮喘大鼠模型中，可通過抑制NF-κB信號通路來達到改善哮喘大鼠的氣道炎癥及細胞損傷。HIF-1（缺氧誘導因子）由HIF-1α和HIF-1β 2個亞基組成，在低氧狀態(tài)下可激活多種靶基因的轉(zhuǎn)錄，并且對于細胞生長發(fā)育和生理應激及在某些病理過程中發(fā)揮重要作用。當前已發(fā)現(xiàn)在過敏性氣道炎癥發(fā)展中HIF-1α存在過度表達[20-21]。有研究通過藥物進行干預，下調(diào)HIF-1α表達，可使哮喘氣道炎癥反應得到明顯緩解[22-24]。0C78C04D-8860-4BF5-ABFB-98B024AB37B0

2.6 潛在活性成分與關(guān)鍵靶蛋白的分子對接結(jié)果? 根據(jù)Degree值篩選得到前五位活性化合物：（E）-（4-Methylbenzylidene）-（4-Phenyltriazol-1-Yl）Amine、Prodelphinidin B6、Praeruptorin E（紫花前胡素E）、Isoegomaketone（異紫蘇酮）、Farnesiferol A（法尼斯淝醇A）。研究表明，配體與受體相結(jié)合，所需結(jié)合能越低，則說明其結(jié)合構(gòu)象越穩(wěn)定，即結(jié)合可能性越高[25]。本研究結(jié)果顯示，SH與CVA共同作用靶點結(jié)合能（Bind Energy）均為負值，說明在化合物與靶點蛋白間均有結(jié)合活性，當結(jié)合能小于-5 Kcal/mol時說明具有較強結(jié)合活性，當小于-7 Kcal/mol時則有強烈結(jié)合活性[26-27]。分子對接結(jié)果見圖6，其中相對有較強結(jié)合活性的化合物與靶蛋白分子對接模式部分見圖7。結(jié)果說明SH的潛在活性成分與交集靶點蛋白之間結(jié)合性能一般，因此在之后的SH相關(guān)藥效動力學研究中應將蛋白間結(jié)合能納入影響因素來綜合考量。

3 討論

在PPI網(wǎng)絡(luò)圖中，蛋白間的連線數(shù)量越多，相互關(guān)聯(lián)程度越高，則說明此蛋白在治療疾病中發(fā)揮的藥理作用較為明顯[7]。在該圖中，其節(jié)點大小由Degree決定，顏色由暗色到亮色的轉(zhuǎn)變則取決于BC，線條的粗細及顏色則代表了邊介數(shù)和合并分數(shù)。對該PPI網(wǎng)絡(luò)圖進行拓撲學分析，得到此網(wǎng)絡(luò)中的樞紐蛋白，按照等級值進行選取。相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)，SATA3在各類炎癥性疾病發(fā)病過程中發(fā)揮著重要作用，當前已證明抑制該蛋白可對疾病進展起到緩解作用[8]。而IL-6則是當前發(fā)現(xiàn)的功能最為廣泛的細胞因子之一，參與調(diào)節(jié)免疫反應、細胞增殖分化等，同時作為炎癥介質(zhì)，具備促炎與抗炎雙重作用[9]。

CVA亦稱作隱匿性哮喘或咳型哮喘，是一種潛在的哮喘表達形式，同時亦為引發(fā)兒童慢性咳嗽的最常見疾病之一。此病最早于1972年由Glauser[28]報道，在1975年后該病患者也相繼被報道[29-30]。直到1982年由Hannaway和Hopper[31]才正式建立有關(guān)CVA的診斷。咳嗽與喘息都是哮喘的癥狀，但早前人們只有在出現(xiàn)喘息時才能判斷為哮喘，這是一種錯誤理解。臨床上被診斷為上呼吸道感染、支氣管炎或慢性咳嗽尚未診明的患者中，有許多人實際上就是CVA。

該病病因未完全明確，發(fā)病機制較為復雜，一般認為其發(fā)生受到環(huán)境與遺傳雙重因素影響。本研究結(jié)果顯示，CVA的發(fā)病與病毒感染、免疫功能調(diào)節(jié)等有關(guān)。揭示了Th 17細胞通路、NF-κB通路、IL-17細胞通路、HIF-1細胞通路、PI3K-AKT等通路在CAV發(fā)病機制中的作用。

在中醫(yī)論著中，尚無與CVA完全對應的病名。該病具有反復發(fā)作等臨床證候特點，且多與外邪侵襲（風、寒、燥、火）有關(guān)，其發(fā)病與感冒的發(fā)生發(fā)展有密切聯(lián)系。感冒之后，六淫余邪未除;或因過量食用生冷、清熱苦寒的食物及使用大量抗生素等，則體內(nèi)風寒、濕冷久留不去，不去則熱，又風熱之邪被遏，五臟寒熱錯雜，內(nèi)生痰濕，附著于肺，則咳嗽久久不愈;咳而不愈則致肺傷，故肺氣虧虛，虛者，則風冷之氣更易伏于肺絡(luò)，留積于內(nèi)，正邪相搏，氣道壅澀，故久咳不止。從中醫(yī)角度來看，CVA的病機本質(zhì)實則為外感失治，邪郁于肺絡(luò)，肺氣失宣，肺管不利，氣道攣急所致[32]。

SH為晁恩祥教授依據(jù)多年臨床經(jīng)驗所創(chuàng)立，患者在服用后均得到了較為滿意的臨床療效，且減少了激素類藥物的使用頻率。但由于其處方組成復雜，化學成分較多，其具體作用機制未能得到明確闡述。網(wǎng)絡(luò)藥理學研究有著整體性與信息及時性等特性，可將成分及作用機制清晰呈現(xiàn)，而這恰好與中藥復方的復雜及不確定性相吻合。本研究通過分子對接與網(wǎng)絡(luò)藥理學技術(shù)發(fā)掘預測并優(yōu)選SH有效成分及其作用靶點，構(gòu)建可視化“成分-靶點-疾病-通路”多層次、多維度網(wǎng)絡(luò)圖，明確其藥效物質(zhì)基礎(chǔ)，深入探究其治病機制，闡明其靶點作用通路，為SH后續(xù)的處方優(yōu)化及藥效學評價提供參考。同時也為其他復方中藥的研究提供思路與方法，使其提高實驗工作效率，促進現(xiàn)代中醫(yī)藥發(fā)展及新藥的發(fā)現(xiàn)與創(chuàng)新[33-35]。

參考文獻

[1]周慶偉.抗敏止嗽顆粒治療咳嗽變異性哮喘89例[J].中醫(yī)研究，2005，18（10）：38-39.

[2]Ohta K，Yamaguchi M，Akiyama K，et al.Japanese guideline for adult asthma[J].Allergol Int，2011，60（2）：115-145.

[3]張燕萍，趙丹，林琳，等.蘇黃止咳膠囊治療咳嗽變異型哮喘140例臨床研究[J].中華中醫(yī)藥雜志，2007，22（11）：773-776.

[4]張洪春，趙丹，晁燕，等.從蘇黃止咳膠囊的研發(fā)探討中藥新藥選題思路[J].中藥新藥與臨床藥理，2009，20（5）：485-487.

[5]王加良，張艷麗，范景輝，等.一測多評法同時測定蘇黃止咳膠囊中7種成分[J].中成藥，2019，41（7）：1505-1510.

[6]晁恩祥.咳嗽變異型哮喘證治[J].世界中醫(yī)藥，2006，1（1）：37-40.

[7]韓立柱，胡坤霞，巨紅葉，等.基于網(wǎng)絡(luò)藥理學的杜仲-山茱萸配伍治療糖尿病的作用機制[J].天然產(chǎn)物研究與開發(fā)，2019，31（7）：1130-1137，1182.

[8]薛翔，劉紅梅，邵旦兵，等.JAK/STAT信號通路調(diào)節(jié)機制的研究進展[J].現(xiàn)代生物醫(yī)學進展，2015，15（11）：2161-2165.

[9]劉徽，朱波，林治華.IL-6信號通路與腫瘤[J].細胞與分子免疫學雜志，2011，27（3）：353-355.

[10]Tang L，Li Q，Bai J，et al.Severe pneumonia mortality in elderly patients is associated with downregulation of Toll-like receptors 2 and 4 on monocytes[J].Am J Med Sci，2014，347（1）：34-41.0C78C04D-8860-4BF5-ABFB-98B024AB37B0

[11]粟敦妍，李杰，潘立立，等.熒光增強型四嗪生物正交熒光探針的設(shè)計與合成[J].藥學學報，2021，56（4）：1086-1095.

[12]Osaki M，Oshimura M，Ito H.PI3K-Akt pathway： its functions and alterations in human cancer[J].Apoptosis，2004，9（6）：667-676.

[13]Song G，Ouyang G，Bao S.The activation of Akt/PKB signaling pathway and cell survival[J].J Cell Mol Med，2005，9（1）：59-71.

[14]莊展鑫.平喘寧調(diào)節(jié)PI3K-AKT/PKB信號通路相關(guān)蛋白干預哮喘氣道重塑的效應機制研究[D].合肥：安徽中醫(yī)藥大學，2016.

[15]Koga C，Kabashima K，Shiraishi N，et al.Possible pathogenic role of Th17 cells for atopic dermatitis[J].J Invest Dermatol，2008，128（11）：2625-2630.

[16]Rudner XL，Happel KI，Young EA，et al.Interleukin-23（IL-23）-IL-17 cytokine axis in murine Pneumocystis carinii infection[J].Infect Immun，2007，75（6）：3055-3061.

[17]Yang X，Li Y，He Y，et al.Cordycepin alleviates airway hyperreactivity in a murine model of asthma by attenuating the inflammatory process[J].Int Immunopharmacol，2015，26（2）：401-408.

[18]Yan GH，Choi YH.Phellinus linteus Extract Exerts Anti-asthmatic Effects by Suppressing NF-κB and p38 MAPK Activity in an OVA-induced Mouse Model of Asthma[J].Immune Netw，2014，14（2）：107-115.

[19]王金磊，李承德，孫宏偉，等.黃芪多糖抑制NF-κB/MAPK信號通路和改善哮喘大鼠氣道炎癥的作用[J].中國藥理學通報，2016，32（4）：489-493.

[20]Huerta-Yepez S，Baay-Guzman GJ，Bebenek IG，et al.Hypoxia inducible factor promotes murine allergic airway inflammation and is increased in asthma and rhinitis[J].Allergy，2011，66（7）：909-918.

[21]Yuksel H，Yilmaz O，Karaman M，et al.Role of vascular endothelial growth factor antagonism on airway remodeling in asthma[J].Ann Allergy Asthma Immunol，2013，110（3）：150-155.

[22]王莉，張艷麗，王秀芳，等.mTOR/4EBP1/HIF-1α/VEGF信號通路在哮喘小鼠肺組織中的表達及意義[J].中國當代兒科雜志，2017，19（1）：104-110.

[23]劉鑫，鄒中蘭，梅全慧，等.射干麻黃湯對慢性哮喘大鼠缺氧誘導因子-1α、血管內(nèi)皮生長因子表達及氣道重塑的影響[J].中國實驗方劑學雜志，2012，18（8）：190-195.

[24]孫妍，王金榮，韓秀珍，等.布地奈德對慢性支氣管哮喘小鼠肺組織HIF-1α和VEGF表達及氣道重塑的影響[J].中國當代兒科雜志，2012，14（8）：622-627.

[25]姚衛(wèi)峰，翟園園，林麗麗，等.融合“成分-靶點-共有通路”網(wǎng)絡(luò)和分子對接技術(shù)的清肺口服液抗新型冠狀病毒肺炎的活性成分初探[J].南京中醫(yī)藥大學學報，2020，36（2）：174-178.

[26]徐森楠，莊莉，翟園園，等.基于網(wǎng)絡(luò)藥理學研究二至丸防治骨質(zhì)疏松癥的物質(zhì)基礎(chǔ)與作用機制[J].中國藥學雜志，2018，53（22）：1913-1920.

[27]路麗，關(guān)琴笑，田元新，等.基于分子對接技術(shù)模擬預測大黃用于缺血性腦中風的物質(zhì)基礎(chǔ)[J].中藥材，2015，38（4）：781-785.

[28]Glauser FL.Variant asthma[J].Ann Allergy，1972，30（8）：457-459.

[29]McFadden ER Jr.Exertional dyspnea and cough as preludes to acute attacks of bronchial asthma[J].N Engl J Med，1975，292（11）：555-559.

[30]Corrao WM，Braman SS，Irwin RS.Chronic cough as the sole presenting manifestation of bronchial asthma[J].N Engl J Med，1979，300（12）：633-637.

[31]Hannaway PJ，Hopper GD.Cough variant asthma in children[J].JAMA，1982，247（2）：206-208.

[32]李潘營，袁培培，侯穎，等.葶藶子活性組分通過調(diào)控氣道炎癥和上皮損傷改善過敏性哮喘大鼠肺通透性[J].中國中藥雜志，2022，47（4）：1009-1016.

[33]Hopkins AL.Network pharmacology： the next paradigm in drug discovery[J].Nat Chem Biol，2008，4（11）：682-690.

[34]張鐵軍，白鋼，陳常青，等.基于“五原則”的復方中藥質(zhì)量標志物（Q-marker）研究路徑[J].中草藥，2018，49（1）：1-13.

[35]An J，Yang H，Zhang Q，et al.Natural products for treatment of osteoporosis： The effects and mechanisms on promoting osteoblast-mediated bone formation[J].Life Sci，2016，147：46-58.

（2020-07-22收稿 本文編輯：魏慶雙）0C78C04D-8860-4BF5-ABFB-98B024AB37B0