侯鈺煊，馮思琪，張亞玲，靳學(xué)慧

（黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)農(nóng)學(xué)院/黑龍江省植物抗性研究中心，大慶 163319）

水稻（Oryzae）是我國重要糧食作物，黑龍江省是我國粳稻主要種植區(qū)，種植面積近400 萬hm2·年-1，居全國第一，而水稻病害則嚴(yán)重威脅水稻穩(wěn)定生產(chǎn)，是我國農(nóng)業(yè)部門重點(diǎn)關(guān)注對(duì)象[1-3]。近年來，隨著栽培制度和技術(shù)的不斷演變，水稻與病原菌互作環(huán)境不斷發(fā)生變化，加之長期盲目施肥、農(nóng)藥過量使用等因素，致使黑龍江稻區(qū)病害種類增多，發(fā)病程度加重[4-6]，嚴(yán)重影響水稻生產(chǎn)。2001 年宋成燕等[7]研究調(diào)查發(fā)現(xiàn)黑龍江省水稻主要病害有稻瘟病、紋枯病、胡麻葉斑病、惡苗病、葉鞘腐敗病、青枯病等。自2019 年對(duì)黑龍江省水稻病害的調(diào)查發(fā)現(xiàn)，由彎孢菌（Curvularia muehlenbeckiae）引起的水稻葉斑病有逐年加重的趨勢（研究室調(diào)查結(jié)果，另文發(fā)表）。其中水稻葉部真菌病害稻瘟?。∕agnaporthe oryzae）[8-9]、水稻胡麻葉斑病（Bipolaris oryzae）[10]及水稻彎孢葉斑?。–urvularia muehlenbeckiae）[11-12]，在黑龍江省水稻田間發(fā)生較為普遍。Ainsworth（1973）分類系統(tǒng)中3 種病害病原菌均 屬 半 知 菌 類（Fungi Imperfecti） 絲 孢 綱（Hyphomycetes）絲孢目（Hyphomycetales）真菌，均可通過氣流傳播形成病害。3 種病原菌引起的水稻病害均發(fā)生在高溫潮濕的6～8 月，其流行規(guī)律相類似，可侵染水稻葉部及和莖部，嚴(yán)重時(shí)整個(gè)葉片枯死，在其流行年份易導(dǎo)致病害大發(fā)生，引起產(chǎn)量嚴(yán)重?fù)p失，甚至絕產(chǎn)[13-15]。

目前稻瘟病為黑龍江省重點(diǎn)防治對(duì)象，其防治手段主要以化學(xué)防治為主，若三種病害分別施藥防治會(huì)導(dǎo)致重復(fù)用藥，增加田間農(nóng)藥使用量。如何實(shí)現(xiàn)準(zhǔn)確選用藥劑，實(shí)現(xiàn)一藥防治多種病害，或針對(duì)不同病害選取有效藥劑成為精準(zhǔn)施藥和減省田間藥量的有效方法。目前關(guān)于黑龍江省多種水稻葉部病害對(duì)常用莖葉部藥劑的敏感性研究相對(duì)較少，以水稻三種葉部病害病原菌為研究對(duì)象，利用水稻病害田間防治常用藥劑，通過室內(nèi)抑菌試驗(yàn)對(duì)不同病害病原菌進(jìn)行毒力測定，以期明確3 種病原菌對(duì)水稻常用殺菌劑的敏感性差異，旨在為不同病害發(fā)生時(shí)選擇有效藥劑提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

供試菌種：水稻胡麻葉斑病稻平臍蠕孢菌（Bipolaris oryzae）、稻瘟病稻梨孢菌（Magnaporthe oryzae）及水稻彎孢葉斑病病原菌（Curvularia muehlenbeckiae）保存于實(shí)驗(yàn)室。

供試培養(yǎng)基：馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基（PDA）。

選用防治水稻病害常用藥劑：10%苯醚·甲環(huán)唑WG（瑞士先正達(dá)作物保護(hù)有限公司）、45%咪鮮胺EW（山東億嘉農(nóng)化有限公司）、20%三環(huán)唑SC（江門市植保有限公司）、12.5%烯唑醇WP（江蘇輝豐農(nóng)化股份有限公司）、25%氰烯菌酯SC（德國巴斯夫歐洲公司）、43%戊唑醇SC（德國拜耳作物科學(xué)公司）。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 供試藥劑對(duì)3 種水稻葉部病害病原菌的室內(nèi)毒力測定

參考尉文彬[16]的方法，各藥劑設(shè)置5 個(gè)濃度梯度，采用生長速率法[17]在無菌條件下用無菌水將原藥配制成濃度為50 000 mg·L-1的母液，取PDA 培養(yǎng)基9 mL 與藥液1 mL 混勻，配置成5 個(gè)所需濃度后倒入平板中備用，以加入與藥劑等體積無菌水（v·v-1）的PDA 為對(duì)照。分別將胡麻斑病菌（B.oryzae）、稻瘟病菌（M.oryzae）及水稻彎孢葉斑病菌（C.muehlenbeckiae）活化7 d，無菌環(huán)境下取同菌齡5 mm 菌碟放入含不同藥劑濃度的PDA 平板中央，28 ℃恒溫黑暗培養(yǎng)7 d，每個(gè)處理設(shè)4 次重復(fù)，試驗(yàn)重復(fù)3 次。

1.2.2 數(shù)據(jù)處理

3 種病原菌培養(yǎng)7 d 后采用十字交叉法[18]測量菌落直徑，計(jì)算各藥劑處理濃度對(duì)3 種病原菌菌絲生長的抑制率。采用DPS 7.05 軟件計(jì)算各藥劑的毒力回歸方程、EC50值和相關(guān)系數(shù)r2[19]。

菌絲生長抑制率（%）=（[對(duì)照菌落直徑-藥劑處理菌落直徑）/對(duì)照菌落直徑]×100。

2 結(jié)果與分析

2.1 室內(nèi)殺菌劑毒力測定

2.1.1 參試藥劑對(duì)稻瘟病菌的抑制作用

稻瘟病菌對(duì)參試的6 種藥劑敏感性存在差異，見表1。稻瘟病菌菌絲對(duì)參試6 種不同類型的殺菌劑均有不同的敏感性，根據(jù)相應(yīng)毒力回歸方程求出的EC50值范圍在0.002 8～31.593 6 mg·L-1，其中稻瘟病菌對(duì)45%咪鮮胺水乳劑最敏感，其EC50為0.002 8 mg·L-1；對(duì)43%戊唑醇懸浮劑及12.5%烯唑醇可濕性粉劑敏感性次之，其EC50分別為0.037 5、0.082 6 mg·L-1；稻瘟病菌對(duì)10%苯醚·甲環(huán)唑水分散粒劑成中等敏感性，其EC50為0.849 4mg·L-1；對(duì)25%氰烯菌酯和20%三環(huán)唑懸浮劑敏感性相對(duì)較差，其EC50值分別為28.799 2mg·L-1和31.593 6 mg·L-1。

表1 6 種藥劑在不同濃度下對(duì)稻瘟病菌的抑制作用Table 1 Inhibitory effects of 6 fungicides on Magnaporthe oryzae at different concentrations

2.1.2 參試藥劑對(duì)水稻胡麻葉斑病菌的抑制作用

參試6 種藥劑對(duì)水稻胡麻葉斑病菌菌絲生長均有抑制作用，胡麻葉斑病菌對(duì)不同殺菌劑的敏感性不同（表2）。供試藥劑中水稻胡麻葉斑病菌對(duì)45%咪鮮胺水乳劑最為敏感，其EC50為0.003 2 mg·L-1，其次為12.5%烯唑醇可濕性粉劑和43%戊唑醇懸浮劑，其EC50分別為：0.031 0、0.054 3 mg·L-1；水稻胡麻葉斑病菌對(duì)10%苯醚·甲環(huán)唑和20%三環(huán)唑懸浮劑水分散粒劑相對(duì)較為敏感，其EC50分別為0.242 3、0.274 2 mg·L-1；該病原菌對(duì)25%氰烯菌酯懸浮劑最不敏感，EC50值達(dá)到9.168 4 mg·L-1，是6 種藥劑中EC50值最高的藥劑，對(duì)胡麻葉斑病菌的毒力效果最弱。

表2 6 種藥劑對(duì)胡麻葉斑病菌在不同濃度下的抑制作用Table 2 Inhibitory effects of 6 fungicides on Bipolaris oryzae at different concentrations

2.1.3 參試藥劑對(duì)水稻彎孢葉斑病菌的抑制作用

水稻彎孢葉斑病菌對(duì)參試6 種藥劑具不同的敏感性（表3）。水稻彎孢葉斑病菌菌絲對(duì)供試6 種藥劑中最為敏感的是12.5%烯唑醇可濕性粉劑，其EC50為0.026 4 mg·L-1；其次為43%戊唑醇懸浮劑，EC50為0.063 9 mg·L-1；10%苯醚·甲環(huán)唑水分散粒劑和45%咪鮮胺水乳劑對(duì)彎孢菌菌絲具中等抑效果，其EC50分別為0.108 9 mg·L-1與0.123 4 mg·L-1；6 種藥劑中水稻彎孢菌對(duì)20%三環(huán)唑的敏感性相對(duì)較差，其EC50值為3.849 1 mg·L-1，25%氰烯菌酯懸浮劑的EC50值最高，EC50為45.576 0 mg·L-1，表明水稻彎孢菌菌絲對(duì)25%氰烯菌酯懸浮劑最不敏感。

表3 6 種藥劑對(duì)彎孢葉斑病菌在不同濃度下的抑制作用Table 3 Inhibitory effects of 6 fungicides on Curvularia muehlenbeckiae at different concentrations

2.1.4 3 種病原菌對(duì)參試6 種藥劑敏感性的比較

3 種病害病原菌菌絲生長對(duì)6 種水稻常用殺菌劑敏感性差異比較見圖1。稻瘟病菌、胡麻葉斑病菌及彎孢葉斑病菌對(duì)參試藥劑的敏感性均較高，其中45%咪鮮胺、43%戊唑醇、12.5%烯唑醇和10%苯醚·甲環(huán)唑?qū)θN病原菌菌絲生長的EC50值均小于1.0 mg·L-1，同時(shí)也可看出3 種病原菌對(duì)同種藥劑的敏感性也不同，如45%咪鮮胺對(duì)3 中病原菌作用具顯著差異，稻瘟病菌和水稻胡麻葉斑病菌對(duì)咪鮮胺較敏感而水稻彎孢葉斑病菌相對(duì)較不敏感（圖1-A）；稻瘟病菌對(duì)20%三環(huán)唑的敏感性較差，水稻胡麻葉斑病菌和彎孢病菌對(duì)三環(huán)唑相對(duì)較敏感，具顯著差異（圖1-E）。同樣的敏感性差異也存在于10%苯醚·甲環(huán)唑?qū)θN病原菌的菌絲生長的影響（圖1-D）；12.5%烯唑醇和43%戊唑醇對(duì)三種病原菌的EC50值界于0.027 6～0.087 6 mg·L-1間（圖1-B、C）。胡麻葉斑病菌對(duì)20%三環(huán)唑?qū)^為敏感，但稻瘟病菌及彎孢葉斑病菌的敏感性較低（圖1-E）；25%氰烯菌酯對(duì)3 種病原菌的毒力作用均較弱，水稻胡麻葉斑病菌對(duì)25%氰烯菌酯較敏感，相比水稻彎孢菌對(duì)其敏感性相對(duì)較差，具顯著差異（圖1-F）。

圖1 參試藥劑對(duì)3 種病原菌菌絲生長抑制作用的比較Fig.1 Comparison of mycelial growth inhibition effects of the tested fungicides on 3 pathogens

3 討論

黑龍江省是粳稻的主產(chǎn)區(qū)，水稻病害是限制糧食生產(chǎn)安全的重要因素。最近幾年調(diào)查發(fā)現(xiàn)，水稻地上部病害如水稻稻瘟病和水稻胡麻葉斑病，以及黑龍江省水稻新發(fā)現(xiàn)病害水稻彎孢葉斑病發(fā)生有加重趨勢，除在水稻分蘗期侵染葉部外，還可侵染水稻穗頸部，嚴(yán)重影響水稻產(chǎn)量。3 種病害有其相似的發(fā)病規(guī)律，田間防治主要還是以化學(xué)防治為主。如何實(shí)現(xiàn)一藥防治多種病害，且對(duì)3 重病后可進(jìn)行精準(zhǔn)防治是實(shí)現(xiàn)化學(xué)防治減量增效的有效手段，因此，研究通過采用生長速率法來研究3 種病原菌對(duì)防治水稻病害常用藥劑的敏感性，精準(zhǔn)把控防治3 種病害的藥劑。

研究發(fā)現(xiàn)水稻3 種病害的病原菌對(duì)參試的6 種藥劑較為敏感，其中敏感性最高的是45%咪鮮胺。咪鮮胺能夠抑制菌絲內(nèi)的麥角甾醇的生物合成，具有內(nèi)吸性和傳導(dǎo)性，對(duì)多種植物病原菌均有良好的抑制作用[20]。從研究結(jié)果可知該藥劑對(duì)三種病原菌均有較好抑制作用，對(duì)比而言只有水稻彎孢病菌敏感性稍差。說明該藥劑可以在田間施用兼防稻瘟病及水稻胡麻葉斑病，但是國寶煥[21]研究報(bào)導(dǎo)該藥劑若長期使用會(huì)產(chǎn)生抗藥性，因此，要防治過程中盡可能避免一種藥劑長期使用，可與其它藥劑交替使用或聯(lián)合使用。烯唑醇和戊唑醇屬于脫甲基抑制類殺菌劑（demethylation inhibitors DMI），二者的殺菌機(jī)理是破壞病原菌的細(xì)胞膜無能，從而抑制菌絲生長、孢子萌發(fā)和新孢子形成[22-23]。從研究結(jié)果看，三種病原菌對(duì)二者敏感性均較好，EC50值0～0.1mg·L-1間，是田間兼防三種病害的有效殺菌劑。三環(huán)唑是防治水稻稻瘟病常用的保護(hù)性殺菌劑，其作用機(jī)理是抑制稻瘟病菌黑色素的產(chǎn)生，從而影響病原菌侵染。從研究結(jié)果看稻瘟病菌菌絲對(duì)該藥劑的敏感性相對(duì)較差，但是水稻胡麻葉斑病菌和水稻彎孢葉斑病菌的菌絲生長有較好的抑制效果，可見該藥劑在水稻稻瘟病防治過程中可以用來兼防胡麻葉斑病和水稻彎孢葉斑病。同樣，苯醚甲環(huán)唑?qū)θN病原菌的抑制作用與三環(huán)唑表現(xiàn)一致，水稻田間應(yīng)用主要用來防治稻瘟病，對(duì)比而言其對(duì)稻瘟病菌的菌絲生長抑制效果相對(duì)較差，但田間稻瘟病菌對(duì)其敏感性較高[24]，該藥劑可抑制病原菌產(chǎn)孢及分生孢子成熟，從而抑制病原菌生長繁殖，達(dá)到防治病害的目的[25]，從研究結(jié)果可以看出，其對(duì)水稻胡麻葉斑病菌和水稻彎孢葉斑病菌菌絲均有良好的生長抑制作用。氰烯菌酯是氰基丙烯酸酯類殺菌劑[26]，兼具保護(hù)作用和治療作用，該藥劑對(duì)鐮刀菌有特效，研究發(fā)現(xiàn)參試的3 種病原菌對(duì)該藥劑都有較高的敏感性，尤其對(duì)水稻胡麻葉斑病菌抑制效果最好。由于該藥劑與其它殺菌劑不產(chǎn)生交互抗性，可與其它藥劑聯(lián)合使用，并且可兼防水稻成株期串珠鐮孢菌引起的水稻惡苗病的種子帶菌量[27]。

綜上，首次探究了黑龍江省水稻田常見三種莖葉部病害病原菌對(duì)防治水稻病害常用藥劑的敏感性比較，研究發(fā)現(xiàn)參試的6 種藥劑對(duì)三種病原菌均有抑制作用，其中病原菌對(duì)咪鮮胺最為敏感，抑制效果最好，其他參試藥劑也有很好的抑菌作用，建議多種藥劑交替使用或聯(lián)合使用，以減少田間藥效下降的情況產(chǎn)生。

4 結(jié)論

稻瘟病、水稻胡麻葉斑病和水稻彎孢葉斑病是水稻主要葉部病害，就三種病害的病原菌，選取6 種防治水稻病害常用藥劑對(duì)其進(jìn)行室內(nèi)菌絲敏感性實(shí)驗(yàn)，研究發(fā)現(xiàn)6 種藥劑對(duì)三種病原菌均有抑制作用，且3 中病原局對(duì)每種藥劑的敏感性存在差異。其中45%咪鮮胺、43%戊唑醇、12.5%烯唑醇和10%苯醚甲環(huán)唑?qū)? 種病原菌的抑菌效果最好，稻瘟病菌和胡麻葉斑病菌對(duì)45%咪鮮胺較為敏感，12.5%烯唑醇對(duì)水稻彎孢葉斑病菌抑制作用最好，25%氰烯菌酯的抑菌效果相對(duì)較差。