代麗麗，湯維，尤悅，吳宏林，彭光華，陳朝輝，周雪華，耿爽，林笑含

（杭州師范大學(xué)附屬醫(yī)院 耳鼻咽喉科，浙江 杭州 310015）

咽喉反流?。╨aryngopharyngeal reflux disease，LPRD）是耳鼻咽喉科的常見病，因咽喉部受胃內(nèi)容物反流侵襲，臨床常表現(xiàn)為：咽干、咽痛、咽喉部異物感、咽喉部痰多、頻繁清嗓、聲音嘶啞、發(fā)聲疲勞、喉痙攣、慢性咳嗽、窒息感及吞咽困難等[1-2]。近10%的耳鼻喉科門診患者存在LPRD[3]。其中，近55%的聲嘶患者存在LPRD[4]。體外實(shí)驗(yàn)是研究LPRD發(fā)生機(jī)制和探討療效的關(guān)鍵。因此，建立LPRD動(dòng)物模型具有重要意義。目前，關(guān)于LPRD的動(dòng)物模型以新西蘭兔為主，多以食管內(nèi)支架為基礎(chǔ)建立模型，但各有優(yōu)缺點(diǎn)。本研究在國(guó)內(nèi)外相關(guān)研究的基礎(chǔ)上，經(jīng)過改進(jìn)，建立方便易行的LPRD動(dòng)物模型，旨在為臨床提供參考。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和分組

選取2021年1月－2021年5月采用球囊擴(kuò)張食管下括約?。╨ower esophageal sphincter，LES）及食管上括約?。╱pper esophageal sphincter，UES）來制造的，生理狀態(tài)相似的健康普通級(jí)新西蘭兔LPRD模型32 只，以隨機(jī)數(shù)表法對(duì)其進(jìn)行編號(hào)，并將實(shí)驗(yàn)兔分為實(shí)驗(yàn)A 組（n=11）、實(shí)驗(yàn)B 組（n=11）和對(duì)照組（n=10）。實(shí)驗(yàn)兔均為雄性，年齡5個(gè)月，體重2.5～3.0 kg。實(shí)驗(yàn)A組采用球囊擴(kuò)張UES和LES；實(shí)驗(yàn)B組以食管內(nèi)支架為基礎(chǔ)擴(kuò)張UES，聯(lián)合球囊擴(kuò)張LES[5-6]；對(duì)照組在UES及LES處置入食管球囊，但不行食管球囊擴(kuò)張。所有實(shí)驗(yàn)兔在標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室環(huán)境下適應(yīng)性飼養(yǎng)3 d，再行建模操作。比較3 組實(shí)驗(yàn)兔喉咽部喉鏡下反流體征評(píng)分量表（reflux finding score，RFS）的評(píng)分，監(jiān)測(cè)3組實(shí)驗(yàn)兔的喉咽部pH，并記錄組織病理學(xué)變化[5-6]。本研究經(jīng)杭州師范大學(xué)動(dòng)物倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，嚴(yán)格遵循實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用指南及福利原則。

1.2 材料

球囊擴(kuò)張導(dǎo)管（南京微創(chuàng)，型號(hào)：BDC-10/55-7/18，直徑10.0 mm，長(zhǎng)度55.0 mm），壓力泵（南京微創(chuàng)，長(zhǎng)度1 800.0 mm），金屬支架（南京微創(chuàng)，型號(hào)：MTNDA-S-8/50-2.7/1800，直徑8.0 mm，長(zhǎng)度5.0 cm），推送器[南京微創(chuàng)，內(nèi)鏡逆行胰膽管造影術(shù)（endoscopic retrograde cholangiopancreatography，ERCP）置入器，直徑2.7 mm，長(zhǎng)度1 800.0 mm，導(dǎo)絲：直徑0.89 mm（0.035 in）]，咽喉反流監(jiān)測(cè)使用Digitrapper?反流測(cè)試系統(tǒng)（Medtronic，美國(guó)），內(nèi)鏡系統(tǒng)及鼻竇內(nèi)鏡（歐亞，直徑4.0 mm，長(zhǎng)度175.0 mm）。實(shí)驗(yàn)兔購(gòu)于余姚市泗門鎮(zhèn)建飛實(shí)驗(yàn)兔養(yǎng)殖場(chǎng)[動(dòng)物許可證號(hào)：SCXK（浙）2021-0004]。

1.3 建立新西蘭兔模型手術(shù)方法及術(shù)后處理

術(shù)前分別禁飲禁食8 h。實(shí)驗(yàn)兔麻醉給予30 mg/kg 3%濃度的戊巴比妥鈉耳緣靜脈注射，麻醉后實(shí)驗(yàn)兔仰臥于手術(shù)臺(tái)上，固定頭部及四肢，以直角開口器撐開兔嘴。

1.3.1 食管球囊擴(kuò)張LES經(jīng)鼻胃管置入球囊至胃內(nèi)，鼻胃管及球囊插入食管內(nèi)的長(zhǎng)度（以門齒為基準(zhǔn)）約35 cm。其中，新西蘭兔門齒距賁門的距離為22 cm，未擴(kuò)張的球囊長(zhǎng)度約6 cm，球囊前導(dǎo)絲約4 cm，鼻胃管內(nèi)可見胃液反流。固定球囊，退出胃管約10 cm，然后將一定量的蒸餾水（約6 mL）注入球囊內(nèi)以擴(kuò)張球囊，向外拉球囊和鼻胃管，直至球囊的近端卡在胃賁門處無(wú)法向外拉。將球囊內(nèi)蒸餾水抽干，固定鼻胃管，向外拉出球囊使其中點(diǎn)位于胃食管交界處。緩慢注入蒸餾水，使囊內(nèi)壓力加至10 psi（1 psi=6.895 kPa），維持5 min，充分?jǐn)U張LES，中間休息3 min再重復(fù)擴(kuò)張球囊一次，共擴(kuò)張2次。見圖1。

圖1 球囊擴(kuò)張LESFig.1 Balloon dilation of LES

1.3.2 食管球囊擴(kuò)張UES經(jīng)鼻胃管將球囊置入食管內(nèi)，鼻胃管及球囊插入食管內(nèi)的長(zhǎng)度（以門齒為基準(zhǔn)）約20 cm（門齒到環(huán)咽肌的長(zhǎng)度約10 cm），固定球囊，向外拉鼻胃管約10 cm，在內(nèi)鏡直視下確定球囊位于環(huán)狀軟骨以下位置，向球囊內(nèi)緩慢注入蒸餾水，使球囊內(nèi)壓力增加至10 psi，維持5 min，使UES 充分?jǐn)U張，中間間隔3 min，共重復(fù)2 次。見圖2。

圖2 球囊擴(kuò)張UESFig.2 Balloon dilation of UES

1.3.3 食管上段置入金屬支架經(jīng)鼻胃管將置入系統(tǒng)的導(dǎo)絲置入距離門齒約20 cm處的食管內(nèi)。在內(nèi)鏡直視下，通過置入系統(tǒng)，將金屬支架釋放在食管內(nèi)，彈開后，呈空心圓柱狀的支架可提供支撐力支撐UES。在兩側(cè)臼齒中間的軟腭處，固定支架頂端的絲線，防止支架位置變動(dòng)以及絲線被實(shí)驗(yàn)兔咬斷。24 h后剪斷絲線并撤除。見圖3。

圖3 支架擴(kuò)張UESFig.3 Stent dilation of UES

1.4 術(shù)后處理

手術(shù)中密切監(jiān)測(cè)實(shí)驗(yàn)兔呼吸及心跳狀況，如遇呼吸困難等情況，立即中止實(shí)驗(yàn)。為預(yù)防術(shù)后感染，術(shù)后30 min內(nèi)，對(duì)實(shí)驗(yàn)兔肌肉注射40萬(wàn)u青霉素鈉注射液。術(shù)后實(shí)驗(yàn)兔給予含5%糖鹽水飼養(yǎng)，禁食24 h后，給予標(biāo)準(zhǔn)飼料飼養(yǎng)。

1.5 觀察指標(biāo)

1.5.1 一般狀態(tài)術(shù)后定期觀察3組實(shí)驗(yàn)兔的一般狀態(tài)，包括：體重、食欲和死亡情況等，比較3組實(shí)驗(yàn)兔之間的差異。

1.5.2 新西蘭兔上消化道2 h pH 監(jiān)測(cè)采用pH監(jiān)測(cè)系統(tǒng)監(jiān)測(cè)所有實(shí)驗(yàn)兔術(shù)后第2 和4 周的24 h 上消化道pH值。①電極放置：采用鹽酸羥甲唑啉（5 mL∶1.25 mg）收縮實(shí)驗(yàn)兔鼻黏膜血管，并用2%利多卡因膠漿行鼻黏膜表面麻醉，在pH 為4.0 和7.0 的緩沖液中校準(zhǔn)電極，將電極從鼻腔經(jīng)鼻咽部插入口咽部；在內(nèi)鏡直視下，將電極插入至食道入口下方，此時(shí)，探頭與前鼻孔距離為11.0～12.0 cm；為防止電極移動(dòng)，使用絲線縫合，電極固定于前鼻孔和鼻背部，在實(shí)驗(yàn)兔背部安裝無(wú)線數(shù)據(jù)發(fā)射器，將電極線越過實(shí)驗(yàn)兔頭頂與發(fā)射器連接，給實(shí)驗(yàn)兔穿上特制的衣服，防止實(shí)驗(yàn)設(shè)備脫落；記錄2 h 內(nèi)的實(shí)驗(yàn)兔喉咽部pH 值（圖4）；②pH監(jiān)測(cè)結(jié)果的獲取[7]：實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，使用儀器配套的分析軟件（AccuView pH-Z）對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，當(dāng)pH值達(dá)到直立位＜5.5和臥位＜5.0時(shí)，視為1次反流事件[5]；記錄2 h內(nèi)咽喉反流的次數(shù)、反流時(shí)間占比和最長(zhǎng)反流時(shí)間。建模成功的標(biāo)準(zhǔn)為：直立位2 h內(nèi)，反流事件＞1次[8]（圖5）。

圖4 pH監(jiān)測(cè)示意圖Fig.4 Schematic diagram of pH monitoring

圖5 pH監(jiān)測(cè)系統(tǒng)Fig.5 pH monitoring system

1.5.3 喉鏡檢查和RFS分別于建模前3天和建模后4周，對(duì)實(shí)驗(yàn)兔采用喉鏡檢查并拍照，參照RFS對(duì)圖像進(jìn)行評(píng)分。評(píng)分系統(tǒng)包括：聲門下、聲帶及喉彌漫性水腫、紅斑或充血、肉芽腫、后聯(lián)合增生、喉內(nèi)黏稠黏液附著和喉室消失等[9]。

1.5.4 病理檢查手術(shù)4 周后采用戊巴比妥鈉（100 mg/kg）過量麻醉并處死所有實(shí)驗(yàn)兔，取UES 和聲帶等組織，采用10%甲醛溶液固定，石蠟切片后行HE染色，在光鏡下觀察組織病理學(xué)改變。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

選用SPSS 22.0 軟件分析數(shù)據(jù)，符合正態(tài)分布的計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，組間比較采用方差分析，組內(nèi)前后比較采用t檢驗(yàn)；不符合正態(tài)分布的計(jì)量資料以中位數(shù)（四分位數(shù)）[M（P25，P75）]表示，組間比較及組內(nèi)前后比較均采用Kruskal-WallisH秩和檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以率表示，采用χ2檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 LPRD建模結(jié)果

實(shí)驗(yàn)A 組11 只實(shí)驗(yàn)兔建模成功9 只，建模失敗1只，建模死亡1只，死于喉梗阻。實(shí)驗(yàn)B組11只實(shí)驗(yàn)兔建模成功8 只，建模失敗2 只，建模死亡1 只，死于肺部感染。對(duì)照組10只實(shí)驗(yàn)兔建模成功0只，建模失敗10只，建模無(wú)死亡。實(shí)驗(yàn)A組和實(shí)驗(yàn)B組的建模成功率及死亡率比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

2.2 喉鏡RFS評(píng)分結(jié)果

實(shí)驗(yàn)A 組建模前3 天RFS 為（2.90±1.37）分，建模后4周為（8.60±2.32）分；實(shí)驗(yàn)B組建模前3天RFS為（3.10±1.20）分，建模后4周為（8.40±1.84）分；對(duì)照組建模前3天RFS評(píng)分為（2.40±1.35）分，建模后4周為（2.60±1.17）分。實(shí)驗(yàn)A組與實(shí)驗(yàn)B組組內(nèi)建模前后RFS 比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。對(duì)照組建模前后無(wú)明顯差異。見圖6。

圖6 3組新西蘭兔術(shù)前及術(shù)后喉鏡圖像Fig.6 Preoperative and postoperative laryngoscopy images of three groups of New Zealand rabbits

2.3 咽喉部pH值監(jiān)測(cè)結(jié)果

2.3.1 實(shí)驗(yàn)A 組和實(shí)驗(yàn)B 組建模前后建模成功的實(shí)驗(yàn)A 組，建模前3 天、建模后2 和4 周的酸反流事件數(shù)（次）分別為0.00（0.00，0.00）、4.00（4.00，6.00）和4.00（2.75，5.00）次；建模成功的實(shí)驗(yàn)A組，建模前3 天、建模后2 和4 周的酸反流時(shí)間百分率（%）分別為0.00（0.00，0.00）%、17.50（15.40，19.00）%和16.45（13.30，19.90）%；建模成功的實(shí)驗(yàn)A 組，建模前3 天、建模后2 和4 周的最長(zhǎng)反流時(shí)間（s） 分別為0.00 （0.00，0.00）、27.00 （18.00，33.00）和20.00（17.75，24.75）s。建模成功的實(shí)驗(yàn)B 組，建模前3 天、建模后2 和4 周的酸反流事件數(shù)（次）分別為0.00（0.00，0.00）、4.00（2.75，5.00）和4.00（2.00，5.00）次；建模成功的實(shí)驗(yàn)B 組，建模前3天、建模后2和4周的酸反流時(shí)間百分率（%）分別為 0.00 （0.00， 0.00）% 、 17.50 （12.93，19.15）%和26.50（20.40，28.25）%；建模成功的實(shí)驗(yàn)B 組，建模前3 天、建模后2 和4 周的最長(zhǎng)反流時(shí)間（s） 分別為0.00 （0.00，0.00）、25.50 （20.75，32.75）和23.00（15.50，27.00）s。實(shí)驗(yàn)A 組和實(shí)驗(yàn)B 組酸反流事件數(shù)（次）、酸反流時(shí)間百分率（%）及最長(zhǎng)反流時(shí)間在建模前3 天、建模后2 和4 周組內(nèi)比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

2.3.2 對(duì)照組建模前后對(duì)照組建模前3天、建模后2和4周的酸反流事件數(shù)（次）分別為0.00（0.00，0.00）、1.00（1.00，1.75）和1.00（0.25，1.75）次；建模前3 天、建模后2 和4 周的酸反流時(shí)間百分率（%） 分別為0.00 （0.00，0.00）%、0.20 （0.10，2.75）%和0.80（0.28，1.50）%；建模前3 天、建模后2 和4 周的最長(zhǎng)反流時(shí)間（s）分別為0.00（0.00，0.00）、2.50 （2.00，4.75） 和4.50 （3.00，7.00） s。對(duì)照組酸反流事件數(shù)（次）、酸反流時(shí)間百分率（%）及最長(zhǎng)反流時(shí)間在建模前3 天、建模后2 和4 周組內(nèi)比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

2.3.3 3 組實(shí)驗(yàn)兔比較建模后2 和4 周，實(shí)驗(yàn)A組和實(shí)驗(yàn)B組酸反流事件數(shù)、最長(zhǎng)反流時(shí)間和酸反流時(shí)間百分率較對(duì)照組均有提高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。實(shí)驗(yàn)A 組和實(shí)驗(yàn)B 組比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見附表。

附表 3組實(shí)驗(yàn)兔建模后2和4周觀察指標(biāo)比較 M（P25，P75）Attached table Comparison of observation indexes 2 and 4 weeks after the establishment of the model among the three groups of experimental rabbits M（P25，P75）

2.4 病理檢查結(jié)果

對(duì)照組喉咽部及食管上端黏膜未見明顯炎癥。實(shí)驗(yàn)組食管及喉咽部黏膜均可見慢性炎癥，喉咽部黏膜可見大量淋巴細(xì)胞和漿細(xì)胞浸潤(rùn)，伴腺體增生和間質(zhì)水腫；食管黏膜表現(xiàn)為淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)，局部鱗狀上皮可見角化不全。見圖7。

圖7 3組病理特點(diǎn)Fig.7 Pathological features in three groups

3 討論

對(duì)于LPRD發(fā)生機(jī)制的研究及治療方法療效的探討，體外實(shí)驗(yàn)必不可少。因此，建立LPRD 動(dòng)物模型，尤其是如何簡(jiǎn)便、安全地建立動(dòng)物模型，是體外實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)，具有重要意義[10]。在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的選擇上，豬[11]和狗[12]因其咽喉黏膜上皮組織與人類最為相似，被認(rèn)為是最佳的建模動(dòng)物[13]。但存在建模周期長(zhǎng)、購(gòu)買價(jià)格貴、養(yǎng)育成本高和基因庫(kù)相對(duì)不完善等問題。這使得新西蘭兔[14-15]及大鼠[16-17]成為了應(yīng)用最為廣泛的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。但是，鼠的咽喉黏膜與人非角化復(fù)層鱗狀上皮不同，其角化上皮能抵抗一定的反流物，而兔的咽喉黏膜與人體組織相近，且對(duì)反流抗性弱，更易建模，具有良好的經(jīng)濟(jì)性。因此，兔成為建立LPRD動(dòng)物模型的首選。目前，常見的建模方法基本都參照胃食管反流病動(dòng)物模型的建模方式[18-19]，包括：外源性和內(nèi)源性。外源性方法是指：在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物咽喉部涂抹一種或多種外源性物質(zhì)，包括：胃酸、胃蛋白酶和膽鹽等，模仿人咽喉反流物，刺激咽喉部上皮組織，使其產(chǎn)生炎癥及潰瘍，最終引起LPRD[20]。這種方法操作簡(jiǎn)單易行，對(duì)于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的刺激性小，成活率高，劣勢(shì)在于人咽喉反流物較為復(fù)雜，單一或者多種（胃酸、胃蛋白酶和膽鹽等）外源物質(zhì)不能完全模擬人咽喉反流物及LPRD的發(fā)生過程。而內(nèi)源性方法則是通過咽喉手術(shù)，人為改變實(shí)驗(yàn)兔的胃腸道解剖結(jié)構(gòu)，使反流屏障被破壞，從而達(dá)到加強(qiáng)動(dòng)物自身胃腸內(nèi)容物的反流效果，包括：賁門肌松弛術(shù)、賁門置管術(shù)、幽門縮窄術(shù)[21]、鼻飼管置管術(shù)[15]、LES 球囊擴(kuò)張和UES 支架植入[5]等。內(nèi)源性方法的優(yōu)點(diǎn)在于：更加擬合LPRD的病理生理過程，可從發(fā)生機(jī)制上說明問題；缺點(diǎn)在于：手術(shù)及麻醉風(fēng)險(xiǎn)較大，對(duì)于術(shù)者要求高，動(dòng)物成活率較外源性方法低。有研究[22-24]通過大鼠模型發(fā)現(xiàn)，減少大鼠睡眠時(shí)間和給予高脂飲食可誘發(fā)LPRD，該研究從病因?qū)W的角度對(duì)LPRD 動(dòng)物模型進(jìn)行探索，研究意義大，但建模時(shí)間過長(zhǎng)，實(shí)驗(yàn)中混雜因素過多。

LPRD 相關(guān)機(jī)制的研究極少。胡穎[25]在新西蘭兔模型的研究中發(fā)現(xiàn)，LPRD 的食道和喉上皮細(xì)胞間隙擴(kuò)大，且在大鼠模型上發(fā)現(xiàn)claudin-3 表達(dá)水平明顯降低。FENG 等[11]用巴馬小型豬建立LPRD 模型，也證實(shí)了喉上皮細(xì)胞間隙擴(kuò)大，并認(rèn)為橋粒明顯減少。這兩項(xiàng)研究均可證明喉咽黏膜屏障被破壞。針對(duì)產(chǎn)生損傷的機(jī)制，有研究[26]基于新西蘭兔模型發(fā)現(xiàn)：白細(xì)胞介素-8 和血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子可能與咽喉反流和喉癌的發(fā)病機(jī)制有關(guān)，但LPRD的相關(guān)機(jī)制仍需進(jìn)一步開展。

本實(shí)驗(yàn)借鑒了LES 球囊擴(kuò)張和UES 支架置入法，并予以改進(jìn)。但原方法中UES金屬支架固定困難，易脫落到胃中，難以保證UES擴(kuò)張效果，且支架難以取出，金屬支架多次使用后還會(huì)出現(xiàn)金屬絲變形，可能損傷血管導(dǎo)致大出血，也可能破壞食管組織導(dǎo)致穿孔。因此，本研究通過球囊擴(kuò)張UES，對(duì)UES解剖結(jié)構(gòu)造成破壞。但在實(shí)驗(yàn)過程中發(fā)現(xiàn)：利用球囊對(duì)UES進(jìn)行擴(kuò)張易導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)兔窒息，需在喉鏡直視下操作，避免球囊導(dǎo)管擴(kuò)張后堵塞聲門。另外，本研究還發(fā)現(xiàn)，在進(jìn)行LES球囊擴(kuò)張后，直接上拉球囊進(jìn)行UES球囊擴(kuò)張，易引起喉痙攣及誤吸，導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)兔在手術(shù)過程中死亡；而在LES 球囊擴(kuò)張后先從食管退出球囊，再重新插入食管，進(jìn)行UES球囊擴(kuò)張，可有效避免誤吸及喉痙攣，降低死亡發(fā)生率。

本研究顯示，有效擴(kuò)張新西蘭兔LES及UES可使實(shí)驗(yàn)兔形成LPRD；建模后pH值監(jiān)測(cè)結(jié)果顯示：實(shí)驗(yàn)兔各項(xiàng)反流指標(biāo)均明顯提高；組織病理學(xué)檢查顯示：實(shí)驗(yàn)組新西蘭兔喉咽部及食道黏膜淋巴細(xì)胞廣泛浸潤(rùn)，提示黏膜發(fā)生不同程度慢性炎癥。這表明：通過有效擴(kuò)張實(shí)驗(yàn)兔LES 及UES，可以建立LPRD 實(shí)驗(yàn)兔模型。本研究有效地?cái)U(kuò)張了新西蘭兔LES及UES，且建模成功率高，符合LPRD病理生理過程，適用于體外研究，相較于LES球囊擴(kuò)張聯(lián)合UES支架固定，操作相對(duì)簡(jiǎn)便，術(shù)后死亡率更低。

綜上所述，本研究通過擴(kuò)張LES和UES，成功建立了LPRD 兔模型，經(jīng)pH 監(jiān)測(cè)、RFS 評(píng)分及病理檢查，驗(yàn)證了模型的有效性，與LES球囊擴(kuò)張和UES支架固定法相比較，成功率和死亡率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。但本研究的建模方法具有一定的局限性：實(shí)驗(yàn)過程中，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物并發(fā)了較嚴(yán)重的胃食管反流。而臨床中的LPRD患者常不伴有胃食管反流，本模型也無(wú)法對(duì)此做出解釋[27]。目前，本研究團(tuán)隊(duì)致力于一種新型LPRD 檢測(cè)試劑的開發(fā)，已在本模型上應(yīng)用，并取得了較好的檢測(cè)效果，為進(jìn)一步開展臨床試驗(yàn)及深入的分子機(jī)制研究奠定了基礎(chǔ)，具有實(shí)用性。