吳圓圓　蔡蕭君　李浩經(jīng)　蔡英杰　李宇　王欽

〔摘要〕 目的 通過研究柴胡加龍骨牡蠣湯對(duì)血清炎癥因子及海馬區(qū)單胺類神經(jīng)遞質(zhì)受體的影響，探討其治療抑郁的可能機(jī)制。方法 隨機(jī)從40只大鼠中選取30只建立慢性應(yīng)激抑郁大鼠模型，造模成功后隨機(jī)分為模型組、中藥組、西藥組，每組10只，未進(jìn)行造模的10只大鼠為空白組?？瞻捉M、模型組每天給予蒸餾水6.3 mL/kg，西藥組每天給予鹽酸氟西汀3.17 mg/kg，中藥組每天予柴胡加龍骨牡蠣湯1.638 g/kg，每組均連續(xù)灌胃干預(yù)8周。干預(yù)前后，采用曠場試驗(yàn)觀察大鼠活動(dòng)總路程;采用懸尾實(shí)驗(yàn)觀察大鼠掙扎靜止時(shí)間;采用強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)觀察大鼠游泳不動(dòng)時(shí)間。干預(yù)8周后，采用HE染色觀察各組大鼠海馬組織的病理形態(tài)學(xué)變化;采用ELISA法檢測各組大鼠血清白細(xì)胞介素-1β（interleukin-1β， IL-1β）、白細(xì)胞介素-2（interleukin-2， IL-2）、白細(xì)胞介素-6（interleukin-6， IL-6）、白細(xì)胞介素-17（interleukin-17， IL-17）、白細(xì)胞介素-18（interleukin-18， IL-18）水平;采用免疫組織化學(xué)法觀察各組大鼠海馬組織中的5-羥色胺2A受體（serotonin 5-hydroxytryptamine 2A receptor， 5-HT_2AR）、多巴胺受體D2（dopamine receptor D2， DARD2）表達(dá)水平;采用實(shí)時(shí)熒光PCR檢測各組大鼠海馬組織中的5-HT_2AR、DARD2 mRNA相對(duì)表達(dá)量。結(jié)果 空白組海馬區(qū)組織結(jié)構(gòu)正常，神經(jīng)細(xì)胞形態(tài)正常，排列整齊，細(xì)胞質(zhì)飽滿，細(xì)胞核清晰;模型組神經(jīng)細(xì)胞數(shù)目相對(duì)減少，體積變小，細(xì)胞核出現(xiàn)皺縮;與模型組比較，柴胡龍骨牡蠣湯組和西藥組大鼠神經(jīng)細(xì)胞數(shù)目較多、體積較大、細(xì)胞核皺縮情況均有不同程度減輕，其中，中藥組改善明顯。與空白組比較，模型組活動(dòng)總路程、懸尾掙扎時(shí)間均明顯縮短（P<0.01），游泳不動(dòng)時(shí)間明顯延長（P<0.01），IL-1β、IL-6、IL-18含量明顯升高（P<0.01），IL-2含量明顯降低（P<0.01），5-HT_2AR、DARD2蛋白及mRNA表達(dá)水平均明顯降低（P<0.01）。與模型組比較，中、西藥組活動(dòng)總路程、懸尾掙扎時(shí)間均明顯延長（P<0.01），游泳不動(dòng)時(shí)間均明顯縮短（P<0.01），IL-1β、IL-6、IL-18含量均明顯降低（P<0.05，P<0.01），IL-2均明顯升高（P<0.01），5-HT_2AR、DARD2蛋白及mRNA表達(dá)均明顯升高（P<0.05，P<0.01）;與模型組比較，中藥組IL-17含量明顯降低（P<0.05）。中、西藥組間活動(dòng)總路程、游泳不動(dòng)時(shí)間、懸尾掙扎時(shí)間比較，IL-1β、IL-2、IL-6、IL-17、IL-18含量比較，5-HT_2AR、DARD2蛋白及mRNA表達(dá)水平比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。干預(yù)后，中、西藥組活動(dòng)總路程、懸尾掙扎時(shí)間均明顯長于干預(yù)前（P<0.01），游泳不動(dòng)時(shí)間均明顯短于干預(yù)前（P<0.01）。結(jié)論 柴胡加龍骨牡蠣湯可能通過調(diào)控炎癥因子及單胺類神經(jīng)遞質(zhì)功能治療抑郁。

〔關(guān)鍵詞〕 抑郁證;柴胡加龍骨牡蠣湯;炎癥因子;單胺類神經(jīng)遞質(zhì);郁證

〔中圖分類號(hào)〕R277.7? ? ? ?〔文獻(xiàn)標(biāo)志碼〕A? ? ? ? 〔文章編號(hào)〕doi：10.3969/j.issn.1674-070X.2022.05.010

Effect of Chaihu plus Longgu Muli Decoction on expression of inflammatory factors and

monoamine neurotransmitter receptors in chronic stress-induced depression rats

WU Yuanyuan， CAI Xiaojun*， LI Haojing， CAI Yingjie， LI Yu， WANG Qin

（Heilongjiang Academy of Traditional Chinese Medicine， Harbin， Heilongjiang 150001， China）

〔Abstract〕 Objective To investigate the effect of Chaihu plus Longgu Muli Decoction on serum inflammatory factors and monoamine neurotransmitter receptors in hippocampus， and to explore the possible mechanism of its treatment for depression. Methods 30 rats were randomly selected from 40 rats to establish chronic stress-induced depression rat model. After successful modeling， they were divided into model group， Chinese medicine group and western medicine group， with 10 rats in each group. The 10 rats without modeling were blank group. Blank group and model group were given 6.3 mL/kg distilled water every day; western medicine group was given 3.17 mg/kg fluoxetine hydrochloride every day; Chinese medicine group was treated with 1.638 g/kg Chaihu plus Longgu Muli Decoction every day. Each group was treated by gavage for 8 weeks. Before and after the intervention， open field test was used to observe the total movement distance of rats; suspension tail test was used to observe the struggle and rest time of rats; the immobile swimming time of rats was observed by forced swimming experiment. Eight weeks after intervention， the histopathological changes of hippocampal tissues were observed by HE staining; serum levels of interleukin-1 （IL-1β）， interleukin-2 （IL-2）， interleukin-6 （IL-6）， interleukin-17 （IL-17） and interleukin-18 （IL-18） were detected by ELISA. The expression levels of serotonin 5-hydroxytryptamine 2A receptor （5-HT_2AR） and dopamine receptor D2 （DARD2） in hippocampus were observed by immunohistochemistry; real-time PCR was used to detect the relative expression levels of 5-HT_2AR and DARD2 mRNA in hippocampal tissues of rats in each group. Results In the blank group， the tissue structure of hippocampus was normal， the morphology of nerve cells were normal and neatly arranged， and the cytoplasm was full and the nucleus was clear. In the model group， the number and volume of nerve cells decreased， and the nucleus was shrunken. Compared with model group， the number and size of nerve cells in Chinese medicine group and western medicine group were more and larger， and the nuclear shrinkage were reduced to varying degrees， among which the improvement was obvious in Chinese medicine group. Compared with the blank group， the total movement distance and the struggle time of tail suspension in the model group were significantly shortened （P<0.01）， the immobile swimming time was significantly prolonged （P<0.01）， the content levels of IL-1β， IL-6 and IL-18 were significantly increased （P<0.01）， and the content of IL-2 was significantly decreased （P<0.01）， the protein and mRNA expression levels of 5-HT_2AR and DARD2 were significantly decreased （P<0.01）. Compared with model group， the the total movement distance and the struggle time of tail suspension were significantly prolonged （P<0.01）， and the immobile swimming time was significantly shortened （P<0.01）， the content levels of IL-1β， IL-6 and IL-18 were significantly decreased （P<0.05， P<0.01）， IL-2 was significantly increased （P<0.01）， 5-HT_2AR and DARD2 protein and mRNA expression were significantly increased （P<0.05， P<0.01） in the Chinese medicine group and western medicine group; compared with model group， IL-17 content in Chinese medicine group was significantly decreased （P<0.05）. There were no significant differences in total movement distance， immobile swimming time， struggle time of tail suspension， IL-1β， IL-2， IL-6， IL-17， IL-18 content， 5-HT_2AR， DARD2 protein and mRNA expression levels between Chinese medicine group and western medicine group （P>0.05）. After intervention， the total movement distance， the struggle time of tail suspension were significantly longer than before intervention （P<0.01）， and the immobile swimming time were significantly shorter than before intervention （P<0.01） in Chinese medicine group and western medicine group. Conclusion Chaihu plus Longgu Muli Decoction can treat depression by regulating the functions of inflammatory factors and monoamine neurotransmitters.A75A2BD7-E220-481C-A514-6415FC92B4EB

〔Keywords〕 depression; Chaihu plus Longgu Muli Decoction; inflammatory factor; monoamine neurotransmitter; depression syndrome

抑郁癥是一種常見的精神疾病，其臨床表現(xiàn)為持續(xù)性的情緒低落、興趣減退、負(fù)罪感、自我價(jià)值感喪失、睡眠障礙、食欲不佳、疲倦及注意力不集中等，抑郁程度嚴(yán)重時(shí)患者可出現(xiàn)自殺傾向。抑郁癥可通過縮短端粒長度、加速大腦老化和表觀遺傳老化來促進(jìn)生物老化，增加患者罹患其他疾病的風(fēng)險(xiǎn)[1]。單胺類神經(jīng)遞質(zhì)數(shù)量減少及其受體功能改變在抑郁癥發(fā)病機(jī)制中的作用已得到廣泛認(rèn)可[2];同時(shí)研究表明，抑郁癥的發(fā)生與免疫激活密切相關(guān)，包括炎癥標(biāo)志物、免疫細(xì)胞數(shù)量和抗體滴度異常等，不同抑郁癥狀與不同炎癥因子表達(dá)存在一定的聯(lián)系[3]，中藥可通過干預(yù)海馬神經(jīng)遞質(zhì)表達(dá)及血清中炎癥因子水平對(duì)抑郁癥進(jìn)行治療[4]。抑郁癥是一種情志疾病，屬于中醫(yī)學(xué)“郁證”“百合病”“臟躁”“癲證”等范疇[5]?！鹅`樞·本神》言“愁憂者，氣閉塞而不行”，郁證起病之初，多因情志內(nèi)傷而致氣機(jī)不暢、肝失疏泄，癥見多思慮、善太息等。柴胡加龍骨牡蠣湯出自《傷寒論》，具有和解泄熱、鎮(zhèn)驚安神之功效，臨床治療抑郁癥具有良好成效[6]。全方人參、茯苓、大棗，益氣養(yǎng)血安神，柴胡、桂枝補(bǔ)土而疏木，大黃、生姜、半夏瀉熱而降濁，龍骨、牡蠣斂魂補(bǔ)虛而鎮(zhèn)逆。本實(shí)驗(yàn)研究柴胡加龍骨牡蠣湯對(duì)抑郁大鼠炎癥因子白細(xì)胞介素-1β（interleukin-1β， IL-1β）、白細(xì)胞介素-2（interleukin-2， IL-2）、白細(xì)胞介素-6（interleukin-6， IL-6）、白細(xì)胞介素-17（interleukin-17， IL-17）、白細(xì)胞介素-18（interleukin-18， IL-18）及單胺類神經(jīng)遞質(zhì)受體5-羥色胺2A受體（serotonin 5-hydroxytryptamine 2A receptor， 5-HT_2AR）、多巴胺受體D2（dopamine receptor D2， DARD2）表達(dá)的影響，探討其治療抑郁癥的機(jī)制。

1 材料

1.1? 動(dòng)物

SPF級(jí)SD雄性大鼠40只，體質(zhì)量（200±20） g，8周齡，購于哈爾濱醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)部，動(dòng)物許可證號(hào)：SCXK（黑）2019-0001。飼養(yǎng)于黑龍江省中醫(yī)藥科學(xué)院SPF級(jí)實(shí)驗(yàn)室，溫度（20±1） ℃，相對(duì)濕度（50±5）%，每天12 h光照，自由攝食飲水，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)倫理審批號(hào)：SYXK（黑）2016-008。

1.2? 藥物與試劑

柴胡加龍骨牡蠣湯：柴胡25 g（批號(hào)：18100014），龍骨25 g（批號(hào)：19056424），牡蠣25 g（批號(hào)：19056614），人參10 g（批號(hào)：19071681），桂枝15 g（批號(hào)：18100164），茯苓15，g（批號(hào)：19071191），清半夏10 g（批號(hào)：19052351），黃芩10 g（批號(hào)：19020124），大黃6 g（批號(hào)：18110294），生姜10 g（批號(hào)：18100154），大棗5 g（批號(hào)：19046814）均購自江陰天江藥業(yè)，加蒸餾水置100 ℃恒溫水浴鍋中加熱，充分?jǐn)嚢柚镣耆芙猓ㄈ葜?60 mL，生藥量為0.26 g/mL，分裝后密封，4 ℃冰箱保存?zhèn)溆?。鹽酸氟西汀分散片（法國禮來有限公司，批號(hào)：9492AA）。IL-1β、IL-2、IL-6、IL-17、IL-18試劑盒均購自南京建成生物工程研究所（批號(hào)分別為H002、H003、H007、H014-1-1、H015-1-1）;DARD2抗體、5-HT_2AR抗體均購自北京博奧森生物技術(shù)有限公司（批號(hào)分別為bs1008R、bs1056R）;蘇木素、伊紅染液均購自南京建成生物工程研究所（批號(hào)分別為D005-1-3、D019-1-3）;辣根過氧化物酶結(jié)合山羊抗兔免疫球蛋白IgG、DAB試劑盒均購自北京中杉金橋生物技術(shù)公司（批號(hào)分別為210060330、PV-9001）。

1.3? 主要儀器

多功能酶標(biāo)儀（奧地利Tecan公司，型號(hào)：M200）;熒光顯微鏡（日本Olympus公司，型號(hào)：DP72）;實(shí)時(shí)熒光PCR儀（杭州博日科技股份有限公司，型號(hào)：Line Gene 9600）。

2 方法

2.1? 慢性應(yīng)激抑郁大鼠模型建立[7]

采用慢性不可預(yù)知溫和應(yīng)激（chronic unpredictable mild stress， CUMS）結(jié)合孤養(yǎng)造模，予以懸尾3 min、禁水24 h、禁食24 h、夾尾1 min、晝夜顛倒24 h、電擊1 min、4 ℃冰水游泳5 min 7種刺激方法，每天不同時(shí)間隨機(jī)采取不同的方法刺激大鼠，一共刺激28 d。孤養(yǎng)方法為每只大鼠單獨(dú)1籠以不透光擋板遮擋，建立慢性應(yīng)激抑郁大鼠模型。

2.2? 分組及給藥方法

用隨機(jī)數(shù)字表法將大鼠分為4組：空白組、模型組、中藥組和西藥組，每組10只，給藥劑量參照本課題組前期實(shí)驗(yàn)[8]。空白組、模型組每天灌胃予蒸餾水6.3 mL/kg;西藥組每天灌胃予鹽酸氟西汀3.17 mg/kg;中藥組每天灌胃予柴胡加龍骨牡蠣湯1.638 g/kg，每組均連續(xù)干預(yù)8周。

2.3? 行為學(xué)檢測方法[9-10]

2.3.1? 曠場試驗(yàn)（open field test， OFT）? 干預(yù)前后，記錄分析各大鼠在箱內(nèi)的活動(dòng)總路程，記錄時(shí)間為5 min，整個(gè)過程中保證環(huán)境安靜，待上1只大鼠測試完成后使用75%乙醇清潔設(shè)備。

2.3.2? 懸尾實(shí)驗(yàn)（tail suspension test， TST）? 干預(yù)前后，用醫(yī)用膠布將大鼠尾部距末端約1/3處纏繞固定于懸尾儀上，使大鼠呈倒掛狀態(tài)，觀察并記錄3 min內(nèi)大鼠掙扎靜止時(shí)間。A75A2BD7-E220-481C-A514-6415FC92B4EB

2.3.3? 強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)（forced swimming test， FST）? 干預(yù)前后，在強(qiáng)迫游泳透明玻璃桶中加水，水溫（20±1） ℃，加至30 cm處，將大鼠單獨(dú)且平穩(wěn)放入水中，使用攝像機(jī)及行為學(xué)分析軟件記錄5 min大鼠游泳不動(dòng)時(shí)間，每次更換大鼠時(shí)清除“前任者效應(yīng)”。

2.4? ELISA法測定血清IL-1β、IL-2、IL-6、IL-17A、IL-18

干預(yù)8周后，大鼠腹腔注射2%戊巴比妥鈉麻醉，腹主動(dòng)脈采血，采集到的血液于常溫下靜置2 h后，高速低溫冷凍離心機(jī)以4 ℃，離心半徑10 cm，3000 r/min離心10 min，取上清液，使用相應(yīng)試劑盒檢測上清液中IL-1β、IL-2、IL-6、IL-17A、IL-18含量，嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行操作，酶標(biāo)儀450 nm波長檢測樣本光密度值，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品濃度。

2.5? HE染色觀察海馬組織形態(tài)

干預(yù)8周后，取大鼠海馬組織進(jìn)行石蠟包埋，制成石蠟切片，后脫蠟、水化。蘇木精染色，自來水清洗，置于鹽酸乙醇分化，并用純水沖洗。乙醇伊紅染色，純水沖洗。再脫水，分別放入二甲苯Ⅰ、二甲苯Ⅱ中透明。將切片取出，于組織上滴加中性樹脂，蓋上蓋玻片，拍照觀察。

2.6? 免疫組織化學(xué)法檢測大鼠海馬區(qū)DARD2、5-HT_2AR蛋白表達(dá)情況

干預(yù)8周后，取大鼠腦組織放入4%多聚甲醛磷酸鹽緩沖液內(nèi)固定12 h，脫水、包埋、切片，后常規(guī)脫蠟至水，PBS緩沖液沖洗，過氧化氫阻斷內(nèi)源性過氧化氫酶，枸櫞酸緩沖液進(jìn)行抗原修復(fù)，分別滴加一抗DARD2（1∶100）、5-HT_2AR（1∶150），4 ℃孵育過夜，PBS沖洗后分別滴加反應(yīng)增強(qiáng)液、二抗，DAB染色，封片，于400倍顯微鏡下觀察DARD2、5-HT_2AR蛋白表達(dá)情況。

2.7? 實(shí)時(shí)熒光PCR檢測大鼠海馬組織DARD2、5-HT_2AR mRNA相對(duì)表達(dá)水平[11]

干預(yù)8周后，收集各組大鼠海馬組織后，加入TRIzol試劑以提取RNA，經(jīng)多功能酶標(biāo)儀檢測濃度后，選取純度為1.9～2.0的RNA提取液稀釋至100 ng/μL。實(shí)驗(yàn)反應(yīng)體系：1 μL組織RNA，上游、下游引物各1 μL，17 μL反應(yīng)液（按照PCR試劑盒說明書配制）。擴(kuò)增條件為：95 ℃ 10 min、95 ℃ 10 s、60 ℃ 30 s、72 ℃ 30 s、40個(gè)循環(huán)。溶解曲線分析：95 ℃ 10 s，臺(tái)階采樣、臺(tái)階溫度0.5 ℃。引物序列詳見表1。

2.8? 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 26.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。符合正態(tài)分布或近似正態(tài)分布的計(jì)量資料以“x±s”表示，多組計(jì)量資料符合正態(tài)性、方差齊性采用單因素方差分析，組間比較采用LSD法;若不滿足方差齊性采用Dunnett-T3檢驗(yàn);同組干預(yù)前后比較使用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn);當(dāng)各組不滿足正態(tài)性時(shí)，采用秩和檢驗(yàn)。以P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1? 各組大鼠干預(yù)前后行為學(xué)比較

與空白組比較，模型組活動(dòng)總路程、懸尾掙扎時(shí)間均明顯縮短（P<0.01），游泳不動(dòng)時(shí)間明顯延長（P<0.01）。干預(yù)前，模型組、西藥組、中藥組間活動(dòng)總路程、懸尾掙扎及游泳不動(dòng)時(shí)間比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），具有可比性。干預(yù)后，中、西藥組活動(dòng)總路程、懸尾掙扎時(shí)間均明顯長于干預(yù)前（P<0.01），游泳不動(dòng)時(shí)間均明顯短于干預(yù)前（P<0.01）。干預(yù)后，中、西藥組活動(dòng)總路程、懸尾掙扎時(shí)間均明顯長于模型組（P<0.01），游泳不動(dòng)時(shí)間均明顯短于模型組（P<0.01）。干預(yù)后，中、西藥組活動(dòng)總路程、游泳不動(dòng)時(shí)間、懸尾掙扎時(shí)間比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。詳見表2。

3.2? 各組大鼠海馬組織病理形態(tài)比較

空白組海馬區(qū)組織顯微結(jié)構(gòu)正常，神經(jīng)細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)正常，排列整齊，細(xì)胞質(zhì)飽滿，細(xì)胞核清晰;模型組神經(jīng)細(xì)胞數(shù)目相對(duì)減少，體積變小，細(xì)胞核出現(xiàn)皺縮;與模型組比較，中、西藥組大鼠神經(jīng)細(xì)胞數(shù)目較多、體積較大、細(xì)胞核皺縮情況均有不同程度減輕，其中，中藥組改善明顯。詳見圖1。

3.3? 各組大鼠細(xì)胞血清因子水平比較

與空白組比較，模型組IL-1β、IL-6、IL-18含量明顯升高（P<0.01），IL-2含量明顯降低（P<0.01）。與模型組比較，中、西藥組IL-1β、IL-6、IL-18含量均明顯降低（P<0.05，P<0.01），中藥組IL-17含量明顯降低（P<0.05），中、西藥組IL-2均明顯升高（P<0.01）。中、西藥組IL-1β、IL-2、IL-6、IL-17、IL-18含量比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。詳見表3。

3.4? 大鼠海馬組織5-HT_2AR、DARD2蛋白表達(dá)比較

模型組大鼠海馬結(jié)構(gòu)神經(jīng)元細(xì)胞體積變小，排列紊亂，棕黃色染色顆粒少且染色淺，表示5-HT_2AR、DARD2陽性表達(dá)較少。詳見圖2。

與空白組比較，模型組5-HT_2AR、DARD2蛋白表達(dá)水平均明顯降低（P<0.01）。與模型組比較，中、西藥組5-HT_2AR、DARD2蛋白表達(dá)水平均明顯升高（P<0.05）。中、西藥組5-HT2AR、DARD2蛋白表達(dá)水平比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。詳見圖3。

3.5? 各組大鼠海馬組織5-HT_2AR、DARD2 mRNA相對(duì)表達(dá)水平比較A75A2BD7-E220-481C-A514-6415FC92B4EB

與空白組比較，模型組5-HT_2AR、DARD2 mRNA表達(dá)均明顯降低（P<0.01）。與模型組比較，中、西藥組5-HT2AR、DARD2 mRNA表達(dá)均明顯升高（P<0.05，P<0.01）。中、西藥組5-HT_2AR、DARD2 mRNA表達(dá)比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。詳見表4。

4 討論

《醫(yī)學(xué)衷中參西錄·補(bǔ)絡(luò)補(bǔ)管湯》云：“人身陽之精為魂，陰之精為魄。龍骨能安魂，牡蠣能強(qiáng)魄?；昶前矎?qiáng)，精神自足，虛弱自愈也。是龍骨、牡蠣，固為補(bǔ)魂魄精神之妙藥也。”龍骨、牡蠣相須為用，補(bǔ)虛弱而安心神、定魂魄?！堕L沙藥解·茯苓》言茯苓“利水燥土，瀉飲消痰，善安悸動(dòng)”，《長沙藥解·人參》言人參“入戊土而益胃氣，走己土而益脾陽，理中第一，止渴非?！?，《長沙藥解·大棗》言大棗“補(bǔ)太陰己土之精，化陽明戊土之氣，生津潤肺而除燥，養(yǎng)血滋肝而息風(fēng)”，此三藥合用，和胃益氣、養(yǎng)血安神。柴胡，清膽經(jīng)之郁火，瀉心家之煩熱;黃芩清相火而退肝經(jīng)之郁蒸;大黃瀉里熱而和胃氣，三藥合用和解清熱安神。桂枝性靈動(dòng)，疏木達(dá)郁以安驚悸，溫扶脾陽以行水化痰，諸陰藥得之調(diào)和陰陽，理中安神。由于中藥成分復(fù)雜，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)可以為柴胡加龍骨牡蠣湯治療抑郁的機(jī)制提供更多可靠信息，同時(shí)選擇合適的動(dòng)物模型在整個(gè)研究實(shí)驗(yàn)過程中尤為重要。

本實(shí)驗(yàn)以CUMS結(jié)合孤養(yǎng)模式復(fù)制抑郁大鼠模型，研究表明由該方法制備的模型可出現(xiàn)機(jī)體免疫系統(tǒng)激活、單胺類神經(jīng)遞質(zhì)減少等抑郁癥狀，與臨床患者發(fā)病機(jī)制相似[12-13]。OFT、TST、FST可用于評(píng)價(jià)應(yīng)激性抑郁模型的表面效度[14]，單胺類神經(jīng)遞質(zhì)、炎癥因子等可用于檢測模型的結(jié)構(gòu)效度[15]。磁共振成像顯示抑郁癥患者神經(jīng)元密度變小、神經(jīng)元細(xì)胞體積縮小、同時(shí)海馬體積減少[16]。本次實(shí)驗(yàn)行為學(xué)測試（OFT、TST、FST）顯示，柴胡加龍骨牡蠣湯具有明顯的抗抑郁作用，這與Wang[17]的研究結(jié)果一致，實(shí)驗(yàn)證明，柴胡加龍骨牡蠣湯可增加抑郁大鼠海馬區(qū)神經(jīng)元數(shù)量并改善其形態(tài)，從而減輕大鼠抑郁癥狀。

中藥可通過多靶點(diǎn)、多環(huán)節(jié)治療抑郁，不同中藥其作用機(jī)制也不盡相同[18]，本實(shí)驗(yàn)主要對(duì)柴胡加龍骨牡蠣湯治療抑郁的機(jī)制進(jìn)行初步研究。炎癥因子、單胺類神經(jīng)遞質(zhì)在抑郁發(fā)病機(jī)制中的作用已被廣泛認(rèn)可，前期研究表明，當(dāng)患者體內(nèi)免疫失衡時(shí)，如IL-1β、IL-6、IL-17、IL-18升高以及IL-2水平下降，可導(dǎo)致色氨酸代謝異常，使單胺類神經(jīng)遞質(zhì)功能障礙、生成減少，從而產(chǎn)生抑郁癥狀[19]。本研究探討柴胡加龍骨牡蠣湯對(duì)大鼠血清IL-1β、IL-2、IL-6、IL-17、IL-18水平及海馬組織中5-HT_2AR、DARD2表達(dá)的影響，以進(jìn)一步明確柴胡加龍骨牡蠣湯對(duì)抑郁的治療作用。

壓力刺激導(dǎo)致NOD樣受體（node-like receptor， NLRs）聚集激活，IL-1β、IL-18、IL-6產(chǎn)生增多觸發(fā)炎癥反應(yīng)，損傷大腦神經(jīng)元，干預(yù)神經(jīng)重塑，影響神經(jīng)元的相互作用及認(rèn)知功能，導(dǎo)致抑郁[18]。而激活DARD2可導(dǎo)致NLRs被抑制，減少IL-1、IL-6的產(chǎn)生[20-21]。IL-17與IL-17R結(jié)合可激活核因子-κB蛋白（nuclear factor kappa-B， NF-κB）通路，上調(diào)其他炎癥因子基因表達(dá)，刺激促炎細(xì)胞因子IL-1β、IL-6的產(chǎn)生[22]。研究顯示，抑郁癥患者的血清中IL-17的表達(dá)增加，且隨著IL-17的增加患者抑郁情緒更加明顯[23]，由Th17細(xì)胞產(chǎn)生分泌的IL-17A具有中樞毒性[24]，可通過激活星形細(xì)胞和小膠質(zhì)細(xì)胞，增強(qiáng)神經(jīng)刺激反應(yīng)（包括由中樞細(xì)胞產(chǎn)生IL-17A），或直接通過誘導(dǎo)神經(jīng)元損傷，增加抑郁行為的易感性[25]。IL-2生成分泌的減少以及IL-2信號(hào)通路受阻、抑炎作用的減弱均與抑郁的發(fā)生發(fā)展相關(guān)，抑郁患者體內(nèi)IL-2水平降低時(shí)，抑郁癥狀加劇、病程進(jìn)展加快[26]。柴胡加龍骨牡蠣湯可降低抑郁大鼠IL-1β、IL-6、IL-17、IL-18血清水平，升高IL-2血清水平，以減輕大鼠抑郁癥狀。

DARD2、5-HT_2AR在中樞系統(tǒng)中表達(dá)極為豐富，所介導(dǎo)的信號(hào)在高級(jí)腦部功能中存在重要作用，當(dāng)其異常時(shí)可導(dǎo)致精神疾病[27]。5-HT與小膠質(zhì)細(xì)胞的5-HT_2AR結(jié)合可調(diào)節(jié)中樞系統(tǒng)炎癥刺激導(dǎo)致的趨化反應(yīng)，可抑制炎癥的進(jìn)一步發(fā)生發(fā)展[28]，改善抑郁。DA信號(hào)主要通過D1受體和D2受體進(jìn)行傳遞，其中DARD2研究最為廣泛，DARD2基因多態(tài)性與精神障礙的發(fā)生密切相關(guān)[29]，選擇性DARD2激動(dòng)劑通過上調(diào)酪氨酸羥基酶的表達(dá)和增加大鼠海馬神經(jīng)元生成緩解抑郁癥狀[30]。本次實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明，柴胡加龍骨牡蠣湯可增加抑郁大鼠DARD2、5-HT_2AR的表達(dá)，從而減少大鼠抑郁行為。

實(shí)驗(yàn)證明，柴胡加龍骨牡蠣湯可通過調(diào)控炎癥因子及單胺類神經(jīng)遞質(zhì)功能有效治療抑郁，然而柴胡加龍骨牡蠣湯對(duì)抑郁大鼠炎癥因子及單胺類神經(jīng)遞質(zhì)的調(diào)控是通過哪些酶和代謝途徑發(fā)揮作用，有待結(jié)合生物分子學(xué)、網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)、代謝組學(xué)等研究手段進(jìn)一步明確。

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（本文編輯? 黎志清）A75A2BD7-E220-481C-A514-6415FC92B4EB