陳依春　孫芳云　張芳俠　郝婷婷　李捷　朱愛華

【摘 要】 目的：采用高效液相色譜（HPLC）法建立香蓮祛痛霜血竭素含量的測定方法。方法：按照HPLC法（中國藥典2015年版四部通則）測定。色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗色譜條件。色譜柱：AgilentC18（250 mm×4.6 mm，5 μm）; 流動相：乙腈-0.05 mol/L磷酸二氫鈉溶液（45∶55）;檢測波長：440 nm;流速：1 mL/min;柱溫：40 ℃;進樣體積：10 μL。結(jié)果：血竭素對照品溶液，以濃度對峰面積進行回歸，在5.817～58.17 μg/mL之間呈線形關(guān)系，平均峰面積675.2，RSD為0.35%;香蓮祛痛霜平均峰面積314.7，RSD為1.36 %;穩(wěn)定性試驗血竭素高氯酸鹽對照品溶液均峰面積674.6， RSD為0.25%，樣品中血竭素高氯酸鹽平均峰面積362.2，RSD為2.32%;血竭素高氯酸鹽的平均回收率為97.8%，RSD（n=9）為2.29%;三組不同批次的樣品1 g血竭素含量為0.03248%。結(jié)論：本方法簡便易行，結(jié)果準確，重復性好，可作為香蓮祛痛霜質(zhì)量控制標準使用。

【關(guān)鍵詞】 香蓮祛痛霜;血竭素;高效液相色譜;質(zhì)量標準

【中圖分類號】R284.1【文獻標志碼】 A? 【文章編號】1007-8517（2022）05-0042-04

基金項目：西藏自治區(qū)科技廳-香蓮祛痛霜Ⅱ期臨床試驗研究（No.2015xzo1G62）;陜西省科技統(tǒng)籌創(chuàng)新工程計劃（2015KTCQ03-07）。

作者簡介：陳依春（1990-），女，漢族，碩士，講師，研究方向為藏藥篩選及藥理藥效研究。E-mail： 15835116973@163.com

通信作者：朱愛華（1960-），女，漢族，本科，研究員，研究方向為中藥新藥開發(fā)研究。E-mail： dlg606 @ 163.com

Determination of Dracodrin in Xiang Lian Qu Tong Cream by High-Performance Liquid Chromatography

CHEN Yichun1 SUN Fangyun1 ZHANG Fangxia1 HAO Tingting1 LI Jie1 ZHU Aihua^2*

1.Engineering Research Center of Tibetan Medicine Detection Technology， Ministry of Education， Basic Research Laboratory

of Life Science and Tibetan Medicine Screening Laboratory of Basic Medical College of Tibetan University for Nationalities，

Xianyang 712082，China;

2.Shanxi Institute of Traditional Chinese Medicine， Xi'an 712000， China

Abstract：Objective To establish a High-Performance Liquid Chromatography（HPLC） method for the determination of dracodrin in Xiang Lian Qu Tong cream. Methods According to the four general principles of Chinese Pharmacopoeia 2015 edition. Chromatographic Conditions and System Applicability Test Chromatographic Conditions. Chromatographic Column： Agilent C18（250 mm×4.6 mm， 5 μm）; Mobile Phase： Acetonitrile-0.05 mol/L Sodium Dihydrogen Phosphate Solution（45∶55）; Detection Wavelength： 440 nm;Flow Rate： 1 mL/min; Column;Temperature： 40 ℃;Injection： 10 μL. Results dracorhodin reference solution showed a linear relationship between 5.817 and 58.17 μg/mL， with an average peak area of 675.2 and RSD of 0.35%. The average peak area of Xianglian Qutong Cream was 314.7 and RSD was 1.36%. The average peak area of dracorhodin perchlorate reference solution was 674.6 and RSD was 0.25%. The average peak area of dracorhodin perchlorate was 362.2， RSD was 2.32%. The average recovery rate of dracorhodin perchlorate was 97.8%， RSD（n=9） was 2.29%. The content of dracorhodin in 1 g of three groups of samples was 0.03248%. Conclusion The method is simple， accurate and reproducible. It can be used as the quality control standard of Xianglian Qutong Cream.335A77C9-C0DD-45C5-936F-EC0409F51462

Key words：Xiang Lian Qu Tong Cream; Dracorhodin; High-performance Liquid Chromatography; Quality Standard

香蓮祛痛霜為國家六類新藥，為中藏藥復方制劑，由雪蓮花、乳香、沒藥、西紅花等十五味中藏藥組成，具有活血化瘀，消腫止痛的功效，主治軟組織挫傷和關(guān)節(jié)扭傷^[1]。該新藥已完成新藥臨床前研究，取得了臨床批件（批件號：2008 L02173）。已經(jīng)完成1期臨床試驗，臨床實驗對生命體征、神經(jīng)系統(tǒng)、呼吸系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)、消化系統(tǒng)等進行觀察， 均未發(fā)生不良事件^[2]。本次研究的主要內(nèi)容：按照國家食品藥品監(jiān)督管理局《中藥、天然藥物注冊分類及申報資料要求》中藥六類的要求及臨床批件的要求，建立主藥和貴細藥材血竭素含量測定方法，確定質(zhì)量控制標準，完善質(zhì)量標準，完成香蓮祛痛霜Ⅱ期臨床試驗，為Ⅲ期臨床研究給藥劑量方案提供依據(jù)，為市場提供優(yōu)效、安全、質(zhì)量可控的新藥產(chǎn)品。

1 實驗材料

1.1 儀器 Agilent 1260液相色譜儀，電子分析天平AG 135（德國METTLE ）。

1.2 試劑與對照品 試劑：二水和磷酸二氫鈉（分析純）天津盛奧化學試劑有限公司;對照品：血竭素高氯酸鹽對照品（批號為：0811-9302），購于中國藥品生物制品鑒定所;乙腈：色譜純 fisher scientific;甲醇：色譜純 fisher scientific;磷酸：分析純 成都市科龍試劑廠。

1.3 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗 色譜柱：Agilent C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）;流動相：乙腈-0.05 moL/L磷酸二氫鈉溶液（45∶55）;檢測波長：440 nm;流速：1 mL/min;柱溫：40 ℃;進樣量：10 μL。

2 實驗方法

2.1 對照品溶液的制備 精密稱取血竭素高氯酸鹽對照品8.01 mg置于10 mL棕色量瓶中，用12%磷酸甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為濃度為58.17 μg/mL血竭素儲備液，吸取儲備液1 mL于10 mL棕色量瓶中，用12%磷酸甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為血竭素二級儲備液。精密吸取二級儲備液5 mL置10 mL量瓶中，用12%磷酸甲醇稀釋并定容至刻度，搖勻，即得濃度為29.08 μg/mL血竭素對照品溶液。（血竭素重量=血竭素高氯酸鹽重量/1.377）。

2.2 供試品溶液的制備 精密稱定樣品2 g，置25 mL棕色量瓶中，加12%磷酸甲醇定容至刻度，搖勻，超聲處理30 min放冷，用12%磷酸甲醇補足缺失重量，過濾即得。

2.3 線性關(guān)系的考察 精密吸取儲備液濃度為58.17 μg/mL對照品溶液1.0 mL置于10 mL棕色量瓶中，用12%磷酸甲醇定容，得濃度為5.817 μg/mL的溶液;精密吸取儲備液5 mL置于10 mL棕色量瓶中，用12%磷酸甲醇定容，得濃度為29.08 μg/mL的溶液;精密吸取濃度為29.08 μg/mL的溶液5 mL置于10 mL棕色量瓶中，用12%磷酸甲醇定容，得濃度為14.54 μg/mL的溶液;精密吸取二級儲備液7.5 mL置10 mL量瓶中，用12%磷酸甲醇稀釋并定容至刻度，搖勻，即得濃度為43.63 μg/mL血竭素對照品溶液。以濃度對峰面積進行回歸，在5.817～58.17 μg/mL之間呈線形關(guān)系。

3 結(jié)果

3.1 線性關(guān)系考察結(jié)果 詳見表1。

3.2 精密度試驗 精密吸取對照品溶液，連續(xù)進樣5次，測得面積值。結(jié)果見表2。精密吸取供試品溶液，連續(xù)進樣5次，測得面積值。結(jié)果見表3。

3.3 溶液穩(wěn)定性試驗 取血竭素高氯酸鹽對照品溶液進樣，考察12 h血竭素高氯酸鹽對照品穩(wěn)定性。結(jié)果見表4。取同一樣品溶液進樣，考察12 h血竭素高氯酸鹽穩(wěn)定性結(jié)果見表5。試驗結(jié)果表明，供試品溶液、對照品溶液在12 h內(nèi)是穩(wěn)定的。

3.4 重現(xiàn)性試驗 取同一批號供試品5份，精密稱定，按供試品溶液制備方法制備，分別取10 μL溶液注入液相色譜儀，記錄血竭素高氯酸鹽面積值，按外標法計算含量。結(jié)果見表6。

3.5 加樣回收試驗 取已測定含量的供試樣品適量，精密稱定后，分別置5 mL棕色容量瓶中，共9份，3份為一組，每組分別加入濃度為14.54 mg/mL、29.08 mg/mL、43.63 mg/mL血竭素高氯酸鹽對照品溶液2 mL，加12%磷酸甲醇定容至刻度，搖勻，超聲處理30 min放冷，用12%磷酸甲醇補足缺失重量，即得。按擬訂的方法進行回收實驗，結(jié)果見表7。結(jié)果表明，本方法血竭素高氯酸鹽的平均回收率為97.8%，RSD（n=9）為2.29%，回收率符合要求。

3.6 三批樣品含量測定 精密稱取三組不同批次的樣品1g，每批次稱取兩次制成平行樣。編號為1-1、1-2;2-1、2-2;3-1、3-2。按照供試樣品配制方法：精密稱定樣品2g，置25 mL棕色量瓶中，加12%磷酸甲醇定容至刻度，搖勻，超聲處理30 min放冷，用12%磷酸甲醇補足缺失重量，過濾即得。

依次配成三組平行樣，用既定的液相條件進行檢測。檢測結(jié)果見表8。

4 討論

香蓮祛痛霜是以藥材中所含有效成分理化性質(zhì)研究的基礎(chǔ)上，按照其有效成分構(gòu)成和性質(zhì)來確定生產(chǎn)工藝路線的。其中處方中的血竭屬于貴細藥，進行倍力微粉技術(shù)制備微粉進入制劑。血竭為棕櫚科植物麒麟竭Daernonorops draco Bl.果實滲出的樹脂經(jīng)加工制成。根據(jù)《中華人民共和國藥典》2015年版一部血竭項下血竭素含量測定的方法，采用高效液相色譜法對香蓮祛痛霜中血竭素的含量進行了測定，在研究中流動相采用乙腈與0.05 mol/L磷酸二氫鈉溶液^[3]，參考相關(guān)文獻^[4-5]，對乙腈和0.05 mol/L磷酸二氫鈉的配比進行了優(yōu)化。當乙腈的比例增加時，血竭素的保留時間過短，出現(xiàn)雜峰干擾，將二者的配比定為45∶55時，能得到良好的分離效果。

本研究采用高效液相色譜法建立香蓮祛痛霜血竭素含量的測定，經(jīng)考察，該方法精密度高，重復性好，回收率符合定量分析要求，結(jié)果準確，重復性好，可作為香蓮祛痛霜質(zhì)量控制標準使用。

參考文獻

[1]孫芳云， 張敏， 曾南陽，等. 香蓮祛痛霜的鎮(zhèn)痛及活血化瘀作用研究[J]. 中藥藥理與臨床，2004， 20（2）： 46-47.

[2]趙麗麗， 姜春梅， 趙春艷，等. 香蓮祛痛霜Ⅰ期臨床耐受性試驗研究[J]. 中藥藥理與臨床， 2013， 29（6）： 166-168.

[3]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典[M]. 北京：中國醫(yī)藥科技出版社， 2015.

[4]何軼， 丁寧， 王瑞忠，等. 冠脈寧片中化工染料檢查及血竭素高氯酸鹽含量測???? 定研究[J].中國藥學雜志， 2015， 50（2）： 120-124.

[5]康勤洪，王雨來.絡能片中血竭素含量的反相高效液相色譜法測定[J]. 時珍國????? 醫(yī)國藥， 2014， 25（3）： 608-609.

（收稿日期：2021-07-12 編輯：陶希睿）335A77C9-C0DD-45C5-936F-EC0409F51462