余奎楊，劉攀，張浩文，秦濤，胡明星

大多數(shù)肝癌患者確診時(shí)已至中晚期，部分患者通過(guò)手術(shù)切除、系統(tǒng)治療與局部治療結(jié)合等方法減小腫瘤體積，降低腫瘤分期，但術(shù)后復(fù)發(fā)率較高，多數(shù)患者術(shù)后生存不理想。藥物治療特別是抗血管生成藥物聯(lián)合免疫治療可在一定程度上提高生存率，但由于輻射抗性和耐藥性影響了治療效果［1］。探索癌癥耐藥過(guò)程中的分子機(jī)制，篩選新的干預(yù)靶點(diǎn)對(duì)于癌癥治療十分重要。長(zhǎng)鏈非編碼RNA（long noncoding RNA，LncRNA）是近年來(lái)的研究熱點(diǎn)。有研究發(fā)現(xiàn)LncRNA鋅指結(jié)構(gòu)反義轉(zhuǎn)錄本1（zine finger antisense 1，ZFAS1）在大腦、心臟、腎臟、胰腺、胸腺中穩(wěn)定表達(dá)［2］，并且在宮頸癌中高表達(dá)，沉默ZFAS1會(huì)抑制細(xì)胞增殖、遷移和侵襲，并降低順鉑（cisplatin，DDP）的耐藥性［3］。ZFAS 1在肝癌中亦高表達(dá)，可能促進(jìn)癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移并導(dǎo)致預(yù)后不良［4］，但ZFAS1與肝癌耐藥性關(guān)系的相關(guān)研究尚鮮見(jiàn)。ZFAS1能夠調(diào)控微小RNA（microRNA，miRNA）的表達(dá)，從而影響miRNA功能。肝癌細(xì)胞中miR-373表達(dá)下調(diào)，促進(jìn)乙型肝炎病毒的復(fù)制［5］。miR-373在胰腺癌中呈低表達(dá)，上調(diào)miR-373可通過(guò)抑制細(xì)胞增殖、侵襲，從而提高化療敏感性［6］。目前LncRNAZFAS1、miR-373與肝癌細(xì)胞順鉑耐藥關(guān)系的研究尚罕見(jiàn)。順鉑本身化學(xué)性質(zhì)并不活躍，進(jìn)入細(xì)胞后，會(huì)與細(xì)胞內(nèi)親核分子作用形成加合物，其中細(xì)胞核或線粒體內(nèi)DNA為順鉑的主要作用位點(diǎn)，順鉑能破壞DNA的結(jié)構(gòu)和功能，導(dǎo)致DNA斷裂或編碼錯(cuò)誤，無(wú)法轉(zhuǎn)錄，延緩癌細(xì)胞周期。本研究旨在探究ZFAS1對(duì)肝癌細(xì)胞系HepG2順鉑耐藥的影響及其機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 材料 人肝癌細(xì)胞系HepG2（中國(guó)科學(xué)院細(xì)胞庫(kù)，目錄號(hào)：SCSP-510）；順鉑（美國(guó)Harvey公司，貨號(hào)：C21384；純度：99.0%）；si-NC序列、si-ZFAS1序列、inhibitor NC、inhibitormiR-373、mimic NC、mimicmiR-373、ZFAS1WT、ZFAS 1MUT、LipofectamineTM3000均購(gòu)自廣州銳博生物科技有限公司，cDNA合成試劑盒、Cell Counting Kit-8（CCK-8）試劑盒（碧云天生物技術(shù)，產(chǎn)品編號(hào)分別為D7170S、C0038）；2×SYBR qPCR Mix（北京百奧萊博科技有限公司，CAS：PC3301）；兔 源 一 抗 基 質(zhì) 金 屬 蛋 白 酶（MMP）2、MMP9、GAPDH，羊抗兔二抗，雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)試劑盒（英國(guó)Abcam公 司，貨 號(hào) 分 別 為ab92536、ab76003、ab9485、ab205718、ab228530）。Transwell小室（北京優(yōu)尼康生物科技有限公司，型號(hào)：3413）；實(shí)時(shí)熒光定量PCR（real-time quantitative PCR，qPCR）儀（美國(guó)ABI公司，型號(hào)：ABI Veriti）；增強(qiáng)型化學(xué)發(fā)光檢測(cè)系統(tǒng)（上海Tanon公司，型號(hào)：4100）。

1.2 方法

1.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)及分組 實(shí)驗(yàn)分組1：正常培養(yǎng)組、si-NC組（轉(zhuǎn)染si-NC陰性序列）、si-ZFAS1組（轉(zhuǎn)染si-ZFAS1序列）。實(shí)驗(yàn)分組2：si-NC組和si-ZFAS1組分別添加0、50、100、200、300μmol/L順鉑處理細(xì)胞12 h。實(shí)驗(yàn)分組3：si-NC組（轉(zhuǎn)染si-NC陰性序列）、si-ZFAS1組（轉(zhuǎn)染si-ZFAS1序列）、si-ZFAS1+inhibitor NC組（轉(zhuǎn)染si-ZFAS1序列+inhibitor NC）、si-ZFAS1+inhibitormiR-373組（轉(zhuǎn)染si-ZFAS 1序列+inhibitormiR-373）。取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞，每組1×106個(gè)/mL，按照說(shuō)明書(shū)使用LipofectamineTM3000對(duì)應(yīng)轉(zhuǎn)染6 h，更換為完全培養(yǎng)液培養(yǎng)48 h進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

1.2.2 qRCR檢測(cè)實(shí)驗(yàn)分組1細(xì)胞中ZFAS 1、miR-373的表達(dá) 6孔板培養(yǎng)細(xì)胞并收集，每孔加500μL Trizol，提取總RNA，cDNA合成試劑盒合成cDNA，qPCR檢測(cè)細(xì)胞中ZFAS1、miR-373的表達(dá)。引物序列：ZFAS1上游引物5′-ACGTGCAGACATCTACAACCT-3′、下游引物5′-TACTTCCAACACCCGCAT-3′，產(chǎn)物大小327 bp；GAPDH上游引物5′-GGAGCGAGATCCCTCCAAAAT-3′、下游引物5′-GGCTGTTGTCATACTTCTCATGG-3′，產(chǎn)物大小197 bp；miR-373上游引物5′-GGCTGTTGTCATACTTCTCATGG-3′、下游引物5′-CAGTGCGTGTCGTGGAGT-3′，產(chǎn)物大小127 bp；U6上游引物5′-GCTTCGGCAGCACATATACTAAAAT-3′、下游引物5′-CGCTTCACGAATTTGCGTGTCAT-3′，產(chǎn)物大小89 bp。20μL反應(yīng)體系：1μL cDNA（50 mg/L）、10μL 2×SYBR qPCR Mix、上下游引物（均為10μmol/L）各0.5μL，8μL ddH2O；反應(yīng)條件：預(yù)變性94℃60 s；變性95℃30 s，退火（ZFAS1：61℃45 s；miR-373：60℃30 s），40個(gè)循環(huán)。2-ΔΔCt法計(jì)算ZFAS1、miR-373相對(duì)表達(dá)水平。

1.2.3 CCK-8法檢測(cè)實(shí)驗(yàn)分組2細(xì)胞增殖情況 將細(xì)胞以5×104個(gè)/孔接種至96孔板中，每孔加100μL完全培養(yǎng)液，待細(xì)胞貼壁后，每孔加入10μL CCK-8試劑，37℃5%CO2培養(yǎng)箱內(nèi)孵育2 h，酶標(biāo)儀在450 nm波長(zhǎng)處測(cè)定光密度（OD）值，增殖率=樣品孔OD450/對(duì)照OD450×100%。

1.2.4 Transwell檢測(cè)實(shí)驗(yàn)分組2細(xì)胞侵襲情況 收集細(xì)胞并計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)，各組細(xì)胞稀釋成1×103個(gè)/mL，添加無(wú)胎牛血清培養(yǎng)液。24孔板中每孔加500μL完全培養(yǎng)液，Transwell小室經(jīng)基質(zhì)膠上下包被后放入24孔板中，小室中加入500 mL無(wú)胎牛血清細(xì)胞稀釋液，37℃5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48 h，結(jié)晶紫染色，顯微鏡下拍照并計(jì)數(shù)。取上、下、左、右、中5個(gè)不同視野，計(jì)算視野中細(xì)胞之和，記為侵襲細(xì)胞數(shù)量。

1.2.5 蛋白免疫印跡檢測(cè)實(shí)驗(yàn)分組2、3細(xì)胞中MMP2、MMP9蛋白表達(dá) 收集1×106個(gè)細(xì)胞，添加蛋白裂解酶冰上裂解細(xì)胞10 min，收集至離心管中，12 000 r/min 4℃離心20 min，上清液即為細(xì)胞總蛋白。BCA試劑盒測(cè)定蛋白濃度，每個(gè)樣品蛋白總量20μg置于聚丙烯酰胺凝膠上進(jìn)行電泳分離。凝膠上蛋白轉(zhuǎn)移至NC膜上，5%脫脂奶粉室溫封閉NC膜2 h，加入一抗MMP2（1∶2 000）、MMP9（1∶5 000）、GAPDH（1∶5 000）4℃孵育過(guò)夜，對(duì)應(yīng)羊抗兔二抗（1∶5 000）室溫孵育2 h，蛋白顯色液顯色、增強(qiáng)型化學(xué)發(fā)光檢測(cè)系統(tǒng)檢測(cè)蛋白表達(dá)情況。目的蛋白相對(duì)表達(dá)量=目的蛋白灰度值/GAPDH灰度值。

1.2.6 雙熒光素酶鑒定miR-373與ZFAS1的靶向位點(diǎn) Starbase分析miR-373與ZFAS1是否存在互補(bǔ)的結(jié)合位點(diǎn)；將miR-373與ZFAS 1結(jié)合位點(diǎn)及突變位點(diǎn)的序列克隆重組至pGL3-basic熒光素酶報(bào)告載體，構(gòu)建ZFAS1野生型（ZFAS1WT）及突變型（ZFAS1MUT）熒光素酶報(bào)告載體，分別與mimicmiR-373或mimic NC共轉(zhuǎn)染至HepG2中，雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)試劑盒檢測(cè)各組熒光素酶相對(duì)活性。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS 25.0進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，多組間比較采用單因素方差分析，組間多重比較行SNK-q檢驗(yàn)；2組間比較采用t檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 干擾ZFAS1對(duì)細(xì)胞中ZFAS1、miR-373表達(dá)的影響 si-ZFAS1組細(xì)胞中ZFAS1表達(dá)水平均低于正常培養(yǎng)組和si-NC組（P＜0.05），miR-373表達(dá)水平均高于正常培養(yǎng)組和si-NC組（P＜0.05），見(jiàn)表1。

Tab.1 Effects of ZFAS1 interference on the expression of ZFAS1 and miR-373 in cells表1 干擾ZFAS1對(duì)細(xì)胞中ZFAS1、miR-373表達(dá)的影響（n=6，±s）

Tab.1 Effects of ZFAS1 interference on the expression of ZFAS1 and miR-373 in cells表1 干擾ZFAS1對(duì)細(xì)胞中ZFAS1、miR-373表達(dá)的影響（n=6，±s）

＊P＜0.05；a與正常培養(yǎng)組比較，b與si-NC組比較，P＜0.05。

組別正常培養(yǎng)組si-NC組si-ZFAS1組F ZFAS1 1.02±0.13 0.99±0.09 0.46±0.05ab 64.953＊miR-373 1.01±0.08 0.98±0.09 1.48±0.24ab 19.631＊

2.2 不同濃度順鉑處理及干擾ZFAS1后HepG2細(xì)胞增殖情況 si-NC組中，0、50、100、200μmol/L順鉑處理后細(xì)胞增殖率依次降低（P＜0.05），300μmol/L順鉑與200μmol/L順鉑差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。si-ZFAS1組，0、50、100、200、300μmol/L順鉑處理后細(xì)胞增殖率依次降低（P＜0.05）。si-ZFAS1組細(xì)胞增殖率分別低于其對(duì)應(yīng)濃度的si-NC組（P＜0.05），見(jiàn)表2。

Tab.2 Comparison of cell proliferation after treatment with different concentrations of cisplatin between the two groups表2 2組經(jīng)不同濃度順鉑干預(yù)后細(xì)胞增殖情況比較 （n=6，%，±s）

Tab.2 Comparison of cell proliferation after treatment with different concentrations of cisplatin between the two groups表2 2組經(jīng)不同濃度順鉑干預(yù)后細(xì)胞增殖情況比較 （n=6，%，±s）

＊P＜0.05；a與0μmol/L比較，b與50μmol/L比較，c與100μmol/L比較，d與200μmol/L比較，P＜0.05。

組別si-NC組si-ZFAS1組t 0μmol/L 100.00±0.00 79.65±8.89 5.607＊50μmol/L 86.16±8.46a 53.52±6.68a 7.417＊100μmol/L 56.89±7.95ab 26.16±4.05ab 8.437＊200μmol/L 21.48±6.49abc 6.27±0.46abc 5.726＊300μmol/L 19.86±4.31abc 0.55±0.02abcd 10.974＊F 204.902＊235.867＊

2.3 不同濃度順鉑處理及干擾ZFAS1后HepG2細(xì)胞侵襲情況 2組經(jīng)不同濃度順鉑處理后細(xì)胞侵襲數(shù)量差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；隨順鉑濃度升高，細(xì)胞侵襲數(shù)量基本呈降低趨勢(shì)。si-ZFAS1組細(xì)胞侵襲數(shù)量分別低于其對(duì)應(yīng)濃度的si-NC組（P＜0.05），見(jiàn)圖1、表3。

2.4 不同濃度順鉑處理及干擾ZFAS1后HepG2細(xì)胞中MMP2、MMP9蛋白表達(dá)情況 2組經(jīng)不同濃度順鉑處理后MMP2、MMP9蛋白表達(dá)差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2組100、200、300μmol/L順鉑處理后MMP2蛋白表達(dá)水平均低于0、50μmol/L順鉑，50μmol/L順鉑低于0μmol/L順鉑（P＜0.05）；si-ZFAS1組300μmol/L順鉑處理后低于100μmol/L順鉑（P＜0.05）。2組50、100、200、300μmol/L順鉑處理后MMP9蛋白表達(dá)水平均低于0μmol/L順鉑（P＜0.05）；si-NC組300μmol/L順鉑處理后均低于50、100μmol/L順鉑（P＜0.05），si-ZFAS1組100、200、300μmol/L順鉑處理后低于50μmol/L順鉑（P＜0.05）。si-ZFAS 1組MMP2、MMP9蛋白表達(dá)水平分別低于其對(duì)應(yīng)濃度的si-NC組（P＜0.05），見(jiàn)表4、5，圖2。

Fig.1 Cell invasion in the two groups(×200)圖1 2組細(xì)胞侵襲情況（×200）

Tab.3 Comparison of the number of invasive cells after treatment with different concentrations of cisplatin between the two groups表3 2組經(jīng)不同濃度順鉑干預(yù)后細(xì)胞侵襲數(shù)量比較 （n=6，個(gè)/視野，±s）

Tab.3 Comparison of the number of invasive cells after treatment with different concentrations of cisplatin between the two groups表3 2組經(jīng)不同濃度順鉑干預(yù)后細(xì)胞侵襲數(shù)量比較 （n=6，個(gè)/視野，±s）

＊P＜0.05；a與0μmol/L比較，b與50μmol/L比較，c與100μmol/L比較，d與200μmol/L比較，P＜0.05。

組別si-NC組si-ZFAS1組t 0μmol/L 256.86±8.13 149.16±6.22 25.772＊50μmol/L 157.46±5.15a 76.16±4.18a 30.024＊100μmol/L 106.92±6.16ab 63.15±2.19ab 16.399＊200μmol/L 86.53±4.87abc 46.86±2.82abc 17.267＊300μmol/L 78.49±4.48abc 3.12±0.63abcd 40.808＊F 931.741＊1 226.393＊

Tab.4 Comparison of the relative expression of MMP2 protein between the two groups表4 2組細(xì)胞中MMP2蛋白相對(duì)表達(dá)量比較 （n=6，±s）

Tab.4 Comparison of the relative expression of MMP2 protein between the two groups表4 2組細(xì)胞中MMP2蛋白相對(duì)表達(dá)量比較 （n=6，±s）

＊P＜0.05；a與0μmol/L比較，b與50μmol/L比較，c與100μmol/L比較，P＜0.05。

組別si-NC組si-ZFAS1組t 0μmol/L 0.86±0.08 0.43±0.04 11.776＊50μmol/L 0.73±0.06a 0.34±0.05a 12.231＊100μmol/L 0.36±0.04ab 0.12±0.03ab 11.758＊200μmol/L 0.36±0.08ab 0.09±0.01ab 8.203＊300μmol/L 0.33±0.04ab 0.04±0.01abc 17.229＊F 94.393＊168.058＊

Tab.5 Comparison of the relative expression of MMP9 protein between the two groups表5 2組細(xì)胞中MMP9蛋白相對(duì)表達(dá)量比較 （n=6，±s）

Tab.5 Comparison of the relative expression of MMP9 protein between the two groups表5 2組細(xì)胞中MMP9蛋白相對(duì)表達(dá)量比較 （n=6，±s）

＊P＜0.05；a與0μmol/L比較，b與50μmol/L比較，c與100μmol/L比較，P＜0.05。

組別si-NC組si-ZFAS1組t 0μmol/L 1.21±0.07 0.86±0.05 12.124＊50μmol/L 0.81±0.09a 0.43±0.03a 9.812＊100μmol/L 0.76±0.06a 0.12±0.03ab 23.369＊200μmol/L 0.69±0.08a 0.09±0.01ab 18.229＊300μmol/L 0.58±0.09abc 0.08±0.01ab 13.525＊F 55.418＊756.867＊

Fig.2 The expression levels of MMP2 and MMP9 in the two groups圖2 2組細(xì)胞中MMP2、MMP9蛋白水平情況

2.5miR-373與ZFAS1的靶向位點(diǎn)驗(yàn)證 Starbase分析miR-373與ZFAS 1存在互補(bǔ)的結(jié)合位點(diǎn)，見(jiàn)圖3。與mimic NC+ZFAS1WT（1.02±0.09）相比，mimicmiR-373+ZFAS1WT（0.46±0.05）熒光素酶相對(duì)活性下 降（t=13.323，n=6，P＜0.05）；mimic NC+ZFAS 1MUT（0.98±0.08）與mimicmiR-373+ZFAS1MUT（1.01±0.12）熒光素酶相對(duì)活性差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=0.510，n=6，P＞0.05）。

Fig.3 The targeting sites of miR-373 and ZFAS1圖3 miR-373與ZFAS1的靶向位點(diǎn)

2.6miR-373對(duì)細(xì)胞中MMP2、MMP9蛋白表達(dá)的影響 si-ZFAS1組、si-ZFAS1+inhibitor NC組細(xì)胞MMP2、MMP9蛋白表達(dá)水平低于si-NC組（P＜0.05）；si-ZFAS1+inhibitormiR-373組細(xì)胞MMP2、MMP9蛋白表達(dá)水平高于si-ZFAS 1組和si-ZFAS 1+inhibitor NC組（P＜0.05），見(jiàn)圖4、表6。

Fig.4 Effects of miR-373 on the protein levels of MMP2 and MMP9 in cells圖4 miR-373對(duì)細(xì)胞中MMP2、MMP9蛋白水平的影響

3 討論

順鉑可與DNA結(jié)合形成DNA復(fù)合物，激活DNA損傷反應(yīng)，最終達(dá)到殺死腫瘤細(xì)胞的目的［7］；但隨其劑量增加，順鉑的效果受到限制，導(dǎo)致腫瘤復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移，出現(xiàn)耐藥現(xiàn)象，這也是肝癌患者預(yù)后不良的常見(jiàn)原因［8］。因此，尋找降低順鉑耐藥性的方法對(duì)于提高肝癌治療效果具有較高價(jià)值。

Tab.6 Comparison of relative expression levels of MMP2 and MMP9 protein between the four groups表6 4組細(xì)胞中MMP2、MMP9蛋白相對(duì)表達(dá)量比較（n=6，±s）

Tab.6 Comparison of relative expression levels of MMP2 and MMP9 protein between the four groups表6 4組細(xì)胞中MMP2、MMP9蛋白相對(duì)表達(dá)量比較（n=6，±s）

＊P＜0.05；a與si-NC組比較，b與si-ZFAS1組比較，c與si-ZFAS1+inhibitor NC組比較，P＜0.05。

組別si-NC組si-ZFAS1組si-ZFAS1+inhibitor NC組si-ZFAS1+inhibitor miR-373組F MMP2蛋白0.56±0.08 0.13±0.02a 0.14±0.01a 0.46±0.05abc 123.979＊MMP9蛋白0.36±0.03 0.08±0.01a 0.06±0.01a 0.28±0.02bc 351.467＊

本研究旨在探究ZFAS1在肝癌耐藥性中的作用。ZFAS 1作為新發(fā)現(xiàn)的LncRNA，是Zinc finger NFX1型基因的反義RNA，被鑒定為乳腺上皮細(xì)胞分化的調(diào)節(jié)因子［9］。之后有研究發(fā)現(xiàn)ZFAS1作為促癌基因在神經(jīng)膠質(zhì)瘤、肺癌、結(jié)腸癌、肝癌、卵巢癌和胃癌等多種惡性腫瘤中表達(dá)上調(diào)［10］；ZFAS1與肝癌時(shí)肝內(nèi)、外侵襲及預(yù)后不良等臨床病理特征關(guān)系密切，其可能作為預(yù)測(cè)患者預(yù)后的一種新的生物標(biāo)志物［11］。更深入的研究顯示，ZFAS1不僅影響預(yù)后，也與卵巢癌治療過(guò)程中順鉑耐藥性及化療敏感性有關(guān)［12］，但在肝癌中尚未發(fā)現(xiàn)其與順鉑耐藥性之間的關(guān)系。本研究結(jié)果顯示，0～200μmol/L順鉑處理肝癌細(xì)胞后，細(xì)胞增殖率隨順鉑濃度的增高而降低，但當(dāng)順鉑濃度為300μmol/L時(shí)，細(xì)胞增殖率則無(wú)明顯變化，提示當(dāng)順鉑達(dá)一定濃度時(shí)，肝癌細(xì)胞可能會(huì)產(chǎn)生耐藥性，導(dǎo)致順鉑的效果受到抑制。同時(shí)，以不同濃度順鉑處理肝癌細(xì)胞后檢測(cè)細(xì)胞侵襲情況和侵襲蛋白MMP2、MMP9表達(dá)情況，結(jié)果亦顯示，順鉑在一定程度上能夠抑制細(xì)胞侵襲，但達(dá)一定濃度時(shí)該作用減弱。另外，同一濃度順鉑處理肝癌細(xì)胞，干擾ZFAS1后，細(xì)胞增殖率、侵襲細(xì)胞數(shù)量及侵襲蛋白MMP2、MMP9表達(dá)水平均較si-NC組明顯降低，提示在肝癌細(xì)胞中抑制ZFAS1的表達(dá)能夠提高化療敏感性。

進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，ZFAS1通過(guò)調(diào)控miRNA實(shí)現(xiàn)對(duì)順鉑耐藥性的逆轉(zhuǎn)。在膠質(zhì)瘤中下調(diào)ZFAS1表達(dá)可促進(jìn)miR-432-5p過(guò)表達(dá)進(jìn)而抑制細(xì)胞活力，從而降低神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞對(duì)順鉑的耐藥性［13］。miR-373、miR-423-5p、miR-370-3p在三陰性乳腺癌中可影響順鉑耐藥性［14］。miR-373作為其中一員，與腫瘤增殖、凋亡、侵襲、遷移等關(guān)系密切，且能影響順鉑耐藥性。miR-373在大腸癌中表達(dá)下調(diào)，上調(diào)miR-373表達(dá)可誘導(dǎo)結(jié)腸癌細(xì)胞凋亡和周期停滯以及抑制細(xì)胞生長(zhǎng)、遷移和侵襲，并降低5-氟尿嘧啶的耐藥性［15］。LncRNA作為miR-373上游調(diào)控因子，是引起miR-373異常表達(dá)的重要調(diào)控點(diǎn)［16］。但關(guān)于肝癌中ZFAS1與miR-373的相關(guān)研究尚鮮見(jiàn)。本研究結(jié)果顯示，ZFAS1上存在miR-373結(jié)合位點(diǎn)，單純干擾ZFAS1能夠促進(jìn)miR-373的表達(dá)；在干擾ZFAS1基礎(chǔ)上添加miR-373抑制劑可升高侵襲蛋白MMP2、MMP9的表達(dá)水平，提示在肝癌細(xì)胞中干擾ZFAS1可通過(guò)上調(diào)miR-373的表達(dá)抑制蛋白侵襲，進(jìn)而降低順鉑耐藥性。

綜上所述，干擾ZFAS1可促進(jìn)miR-373表達(dá)來(lái)緩解肝癌細(xì)胞順鉑耐藥，且此作用可能是通過(guò)抑制細(xì)胞侵襲實(shí)現(xiàn)的。本研究驗(yàn)證了肝癌細(xì)胞中ZFAS1與細(xì)胞耐藥之間的關(guān)系，但miR-373與侵襲之間的關(guān)系尚需進(jìn)一步驗(yàn)證。