◎ 趙俊美，崔瑞霞，謝珊珊

（河南中測(cè)技術(shù)檢測(cè)服務(wù)有限公司，河南 鄭州 450000）

亞麻籽油分為工業(yè)亞麻籽油和食用亞麻籽油，在我國(guó)西北地區(qū)，人們食用麻籽油已有悠久歷史。亞麻籽油是從胡科植物脂麻種子中榨取的脂肪油。根據(jù)胡麻的生長(zhǎng)特性，適合在西部、北部高寒干旱地區(qū)生長(zhǎng)。

食用亞麻籽油中營(yíng)養(yǎng)成分豐富[1-4]，尤其是其中的反式脂肪酸含量、微量元素含量較高，有較高的推廣價(jià)值。作為食用油，如何更好地保存其中的有益物質(zhì)成為近年來(lái)研究的重點(diǎn)和熱點(diǎn)[5-8]。抗氧化劑[9]可有效阻止食用亞麻籽油中的營(yíng)養(yǎng)成分被氧化，目前常用在食用油中的氧化劑有9種，但是針對(duì)亞麻籽油中含有的抗氧化劑含量測(cè)定研究較少[10-12]。基于此，本文主要利用固相萃取結(jié)合高效液相色譜串聯(lián)二極管檢測(cè)器的方法，對(duì)亞麻籽油中9種抗氧化劑含量進(jìn)行測(cè)定，以供參考。

1 材料與方法

1.1 材料和試劑

甲酸、甲醇、乙腈和正己烷（色譜級(jí)，F(xiàn)isher公司）；

0.22 μm PTFE Hydrohpilic濾膜（默克公司）；PuriTest C18固相萃取柱（500 mg/6 mL，默克公司）；Robussil C18-L色譜柱（4.6 mm× 250 mm，5 μm）。

樣品為購(gòu)于山西省晉城市各農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)和超市不同生產(chǎn)批號(hào)的亞麻籽油，共33批。

1.2 儀器

LC-Waters E2695-2996高效液相色譜儀（沃特世公司）；氮吹儀（日本Eyela公司）；高速離心機(jī)SIGMA1-15K（德國(guó)SIGMA希格瑪離心機(jī)公司）；MS205DU型電子天平（瑞典METTLER TOLEDO）；渦旋振蕩器（德國(guó)伊卡公司）；Milli-QDirect-Q10超純水機(jī)（美國(guó)默克密理博公司）。

9種抗氧化劑標(biāo)準(zhǔn)溶液信息如表1所示，濃度為1 000 mg·L-1，購(gòu)自壇墨質(zhì)檢，貨號(hào)80861JH，溶劑是乙腈，冷藏保存。

表1 乙腈中9種抗氧化劑標(biāo)準(zhǔn)溶液信息表

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 提取

準(zhǔn)確稱取已混合均勻的食用亞麻籽油1.00 g，置于50 mL離心管中，加入10 mL乙腈，渦旋振蕩2 min，超聲10 min，3 000 r·min-1離心5 min，收集上清液于另一離心管中，離心管中油樣用10 mL乙腈重復(fù)提取1次，渦旋振蕩2 min，超聲10 min，3 000 r·min-1離心5 min，合并上清液，待凈化。

1.3.2 凈化

先將小柱依次用5 mL甲醇，再用5 mL乙腈活化平衡，然后將待凈化液傾入柱中，收集流出液，再用10 mL乙腈∶甲醇=2∶1（V/V）進(jìn)行洗脫，并收集洗脫液，30 ℃水浴氮吹蒸發(fā)至干，用2 mL乙腈溶解定容，過(guò)0.22 μm PTFE Hydrohpilic濾膜后待測(cè)。

1.3.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制

把標(biāo)準(zhǔn)溶液用乙腈逐級(jí)稀釋成濃度分別為5 mg·L-1、10 mg·L-1、20 mg·L-1、50 mg·L-1、100 mg·L-1、200 mg·L-1、300 mg·L-1、400 mg·L-1和500 mg·L-1的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.3.4 高效液相色譜條件

色譜柱：Robussil C18-L，4.6 mm×250 mm，5 μm；流動(dòng)相A：0.5%（V/V）甲酸水；流動(dòng)相B：甲醇；柱溫：35 ℃；波長(zhǎng)：280 nm；進(jìn)樣量：10 μL；流速：1.0 mL·min-1；梯度洗脫見表2。

表2 梯度洗脫程序表

1.3.5 外標(biāo)法計(jì)算結(jié)果含量

峰面積外標(biāo)法計(jì)算食用亞麻籽油中抗氧化劑各組分含量。檢測(cè)結(jié)果保留3位有效數(shù)字。

2 結(jié)果與分析

2.1 加標(biāo)實(shí)驗(yàn)結(jié)果

設(shè) 置 添 加 水 平1、2、3分 別 為20.0 mg·kg-1、50.0 mg·kg-1、100.0 mg·kg-1，由表3可知，采取固相萃取結(jié)合液相色譜法檢測(cè)9種抗氧化劑，其加標(biāo)回收率為91.8%～102.1%，RSD均小于6.7%，能夠滿足標(biāo)準(zhǔn)《實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制規(guī)范 食品理化檢測(cè)》（GB/T 27404—2008）[13]中相關(guān)內(nèi)容要求。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中發(fā)現(xiàn)TBHQ易降解，建議標(biāo)準(zhǔn)品現(xiàn)用現(xiàn)配，實(shí)驗(yàn)樣品處理完及時(shí)上機(jī)檢測(cè)。

表3 9種抗氧化劑的加標(biāo)回收率及RSD表

2.2 方法穩(wěn)定性

以亞麻籽油為基質(zhì)連續(xù)4 d做加標(biāo)回收，以驗(yàn)證本方法穩(wěn)定性，結(jié)果如表3所示。結(jié)果表明，本方法在不同時(shí)內(nèi)實(shí)驗(yàn)方法相關(guān)系數(shù)在0.998以上，回收率、精密度均滿足要求，相對(duì)目前已有的檢測(cè)方法，該方法定性定量準(zhǔn)確、重復(fù)性好、檢測(cè)結(jié)果可信、前處理快速，適合亞麻籽油中抗氧化劑含量的測(cè)定。

2.3 實(shí)際樣品的測(cè)定

2021年11月運(yùn)用本研究方法對(duì)山西省33批次食用亞麻籽油進(jìn)行檢測(cè)。通過(guò)對(duì)實(shí)際樣品的檢測(cè)結(jié)果分析，其中5批亞麻籽油檢出TBHQ，檢出濃度在12～116 mg·kg-1范圍內(nèi)；有2批檢出BHA，在一定程度上抗氧化劑在食用亞麻籽油中存在添加。

3 結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)建立了食用亞麻籽油中9種抗氧化劑的前處理方法，并結(jié)合高效液相色譜對(duì)食用亞麻籽油中9種抗氧化劑的含量進(jìn)行了測(cè)定。對(duì)于加標(biāo)量分別為20.0 mg·kg-1、50.0 mg·kg-1、100.0 mg·kg-1的食用亞麻籽油樣品，回收率為91.8%～102.1%，RSD均小于6.7%，符合實(shí)驗(yàn)要求，且方法穩(wěn)定。