劉彬

(新安縣第二人民醫(yī)院 檢驗科,河南 洛陽 471800)

有核紅細(xì)胞也被稱為幼稚紅細(xì)胞，泛指血液中尚未發(fā)育成熟的紅細(xì)胞，根據(jù)其內(nèi)部含有的細(xì)胞核大致可分為原始紅細(xì)胞、早幼紅細(xì)胞、中幼紅細(xì)胞和晚幼紅細(xì)胞四種。在正常情況下，成人外周血液中并不能檢測到有核紅細(xì)胞，若該細(xì)胞檢測為陽性則提示人體出現(xiàn)病理性改變。顯微鏡鏡檢是臨床測定有核紅細(xì)胞計數(shù)最常見的方式，但鑒于其操作步驟復(fù)雜，耗時較長，計數(shù)結(jié)果的準(zhǔn)確性容易受到技術(shù)人員主觀因素的影響，因此臨床始終致力于尋找一種快速且準(zhǔn)確的檢測方式取代傳統(tǒng)鏡檢法在有核紅細(xì)胞檢測中的應(yīng)用。近年來，隨著檢測技術(shù)的不斷發(fā)展，越來越多的全自動生化檢測設(shè)備在臨床廣泛應(yīng)用，全自動血液細(xì)胞分析儀也成為外周血有核紅細(xì)胞計數(shù)檢測的新方式，該設(shè)備檢測便捷性也備受臨床操作技師認(rèn)可，但機(jī)械化的實驗操作能否保障檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性臨床始終存在爭議?；诖它c(diǎn)，本研究選擇84 例行有核紅細(xì)胞檢測患者的血液標(biāo)本進(jìn)行研究，以顯微鏡檢查法為金標(biāo)準(zhǔn)，分析全自動血液細(xì)胞分析儀有核紅細(xì)胞檢測中的應(yīng)用價值。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2019年2月至2021年2月在新安縣第二人民醫(yī)院行有核紅細(xì)胞檢測的84 例受檢者為研究對象，其中男性44 例、女性40 例；年齡1～55 歲、平均(38.94±5.45)歲；根據(jù)科室分布情況顯示：84 例患者中血液科患者35 例、新生兒科15 例、腫瘤科23 例、其他科室11例。所有研究對象均需排除溶血和黃疸癥狀，無脂血的情況嚴(yán)格遵守《臨床化學(xué)檢驗血液標(biāo)本的收集與處理》(WS/T225-2002)的要求進(jìn)行操作。標(biāo)本的采集均在受檢者知情同意的前提下進(jìn)行，不涉及患者隱私和倫理問題。本研究已通過倫理委員會批準(zhǔn)通過。

1.2 方法

1.2.1 儀器與試劑

檢測設(shè)備選用HORIBA ABX SAS(法國)生產(chǎn)的全自動血液分析儀(國械注進(jìn)：20142405820；型號：PENTRA DF NEXUS)、 奧林巴斯OLYMPUS生物顯微鏡(粵械注準(zhǔn)：20152220084；型號：CX23LEDRFS1C)、山東省成武縣華博醫(yī)療器械有限公司生產(chǎn)的一次性EDTAK2 抗凝管和采血針和珠海貝索生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)的瑞氏染液。

1.2.2 檢測方法

全自動血液細(xì)胞分析儀檢測：在血液標(biāo)本準(zhǔn)備完好的情況下，技術(shù)人員嚴(yán)格損傷全自動血液分析儀操作說明書進(jìn)行檢測，所有檢測均在血液標(biāo)本采集后2 h 內(nèi)完成。在檢測期間NRBC 計數(shù)和百分比均應(yīng)在通過有核紅細(xì)胞通道在進(jìn)行監(jiān)測。

顯微鏡鏡檢：選擇一只加入4 mL 稀釋液的試管，利用校準(zhǔn)過的微量吸量管取20 μg 的末梢血液，將其全部吹入稀釋液中混勻；隨后采用人工涂片和瑞氏染色的方式將蓋玻片放置在計數(shù)板上，利用吸管將混勻的紅細(xì)胞懸液充入計數(shù)室，靜置2～3 min。最后采用高倍鏡按照“ 計上不計下、計左不計右”的原則對中央大方格內(nèi)四角和正中的5 個中方格的紅細(xì)胞邊線上的細(xì)胞進(jìn)行計數(shù)。有核紅細(xì)胞計數(shù)結(jié)果以白細(xì)胞計數(shù)與有核紅細(xì)胞百分比相乘表示。

1.3 觀察指標(biāo)

(1)統(tǒng)計兩種檢測方式的檢測結(jié)果，以血液標(biāo)本中檢測出有核紅細(xì)胞視為陽性，未檢測出有核紅細(xì)胞則為陰性，以顯微鏡鏡檢結(jié)果為金標(biāo)準(zhǔn)，分析全自動血液分析儀的診斷效能，包括特異度、靈敏度、陽性預(yù)測值、陰性預(yù)測值和準(zhǔn)確度。同時兩種檢測方式均為陽性的標(biāo)本結(jié)果進(jìn)行線性回歸分析，以顯微鏡鏡檢法的測定值為Y，全自動血液分析儀的測定值為X，得出線性回歸方程，分析兩種檢測方式間的關(guān)系。

(2)另外根據(jù)全自動血液分析儀測定有核紅細(xì)胞計數(shù)的絕對值對血液標(biāo)本進(jìn)行低值、中值和高值的分類，其中低值絕對值≤10×10/L，中值絕對值在(10～20)×10/L，高值絕對值＞20×10/L，計算三個類別的均值、變異系數(shù)，評價標(biāo)本批內(nèi)精密度。

(3)分別在低值標(biāo)本、中值標(biāo)本和高值標(biāo)本中隨機(jī)抽取1 份標(biāo)本為研究對象，將其放置在溫室條件下，分別在放置1 h、2 h、4 h、6 h、8 h、12 h、24 h 和48 h 后，采用全自動血液分析儀測定有核紅細(xì)胞，記錄各階段試驗結(jié)果，計算平均值和批內(nèi)變異系數(shù)值，全自動血液分析儀測定結(jié)果的穩(wěn)定性。

1.4 方法

2 結(jié)果

2.1 兩組檢測方式陽性檢出結(jié)果比較

全自動血液分析儀檢出陽性標(biāo)本46 份、占比54.76%，陰性標(biāo)本38 份、占比45.24%；顯微鏡鏡檢法檢出陽性標(biāo)本49 份、占比58.33%，陰性標(biāo)本35 份、占比41.67%；兩種檢測方式對比，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(χ=0.218，=0.641)。以顯微鏡鏡檢法為金標(biāo)準(zhǔn)，全自動血液分析儀診斷特異度97.14%(34/35)、靈敏度91.84%(45/49)、陽性預(yù)測值97.83%(45/46)、陰性預(yù)測值89.47%(34/38)、準(zhǔn)確度94.05%(79/84)，見表1。

表1 兩組檢測方式陽性檢出結(jié)果比較

對45 例陽性標(biāo)本測定值進(jìn)行線性回歸分析顯示，顯微鏡鏡檢法與全自動血液分析儀測定值之間存在線性關(guān)系，得出回歸方程Y=0.7483X+1.8191，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(=0.7618，＜0.05)，見圖1。

圖1 陽性標(biāo)本顯微鏡鏡檢法與全自動血液分析儀測定值線性回歸曲線圖

2.2 三組全自動血液分析儀測定標(biāo)本批內(nèi)精密度比較

全自動血液分析儀測定低值標(biāo)本、中值標(biāo)本和高值標(biāo)本有核紅細(xì)胞批內(nèi)變異系數(shù)值(3.059%、3.429%、3.711%)均小于性能要求變異系數(shù)(5%)，測定結(jié)果合格，見表2。

表2 三組全自動血液分析儀測定標(biāo)本批內(nèi)精密度比較

2.3 三組全自動血液分析儀測定標(biāo)本的穩(wěn)定性比較

全自動血液分析儀測定低值標(biāo)本、中值標(biāo)本和高值標(biāo)本的有核紅細(xì)胞值無明顯變化，批內(nèi)變異系數(shù)(1.685%、1.421%和2.007%)均低于性能要求變異系數(shù)(5%)，測定結(jié)果穩(wěn)定較好，見表3。

表3 三組全自動血液分析儀測定標(biāo)本的穩(wěn)定性比較

3 討論

經(jīng)研究表明，當(dāng)人體血液中出現(xiàn)有核紅細(xì)胞時提示其機(jī)體正處于病理狀態(tài)中，當(dāng)它在兒童和成人外周血液中出現(xiàn)時提示患者可能存在骨髓損傷或潛在的嚴(yán)重疾病，因此對該項指標(biāo)測定在臨床具有重要意義。既往，人工顯微鏡計數(shù)一直被視為有核紅細(xì)胞判定的金標(biāo)準(zhǔn)；但經(jīng)大量臨床實踐發(fā)現(xiàn)，顯微鏡鏡檢法存在操作復(fù)雜的特點(diǎn)，在檢測過程中容易受到推片、細(xì)胞染色、細(xì)胞分布差異以及人為主觀判斷等因素的影響，難以實現(xiàn)檢測過程標(biāo)準(zhǔn)化。近年來，隨著檢測技術(shù)的不斷發(fā)展，全自動血液分析儀在臨床應(yīng)用范圍愈加頻繁，它雖然提高臨床多項指標(biāo)檢測的便捷性，但也同樣存在漏診和誤診情況。經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)，采用自動血液分析儀測定有核紅細(xì)胞時會因其大量的存在增加儀器檢測過程中的白細(xì)胞數(shù)量，部分儀器會對此生產(chǎn)可疑標(biāo)記，幫助識別異常的細(xì)胞，最終的判定還需依賴手動檢查。此外，還有部分分析儀無法檢測出低水平的有核紅細(xì)胞，導(dǎo)致細(xì)胞分類錯誤，白細(xì)胞計數(shù)的假陽性增高，因此準(zhǔn)確的計數(shù)有核紅細(xì)胞尤為重要。但目前，市場上可見的全自動血液分析儀琳瑯滿目，品質(zhì)方面也參差不齊，因此臨床對于該儀器的應(yīng)用價值始終存在爭議。

在本研究中，對84 例行有核紅細(xì)胞測定患者的血標(biāo)本依次給予全自動血液細(xì)胞分析儀和顯微鏡鏡檢法檢測，結(jié)果顯示，兩種檢測方式在有核紅細(xì)胞陽性檢出結(jié)果方面對比差異無統(tǒng)計學(xué)意義(＞0.05)；而在黃海麗的研究結(jié)果中也證實，儀器法陽性檢出結(jié)果與鏡檢法陽性檢出結(jié)果對比差異無統(tǒng)計學(xué)意義(＞0.05)，由此可以證實，兩種檢測方式在有核紅細(xì)胞檢出方面均有較高的應(yīng)用價值。以顯微鏡鏡檢法為金標(biāo)準(zhǔn)，可以得出全自動血液細(xì)胞分析儀特異度97.14%、靈敏度91.84%、陽性預(yù)測值97.83%、陰性預(yù)測值89.47%、準(zhǔn)確度94.05%，進(jìn)一步證實，該檢測方式的可靠性和有效性。分析其原因可以發(fā)現(xiàn)，本研究選用的PENTRA DF NEXUS 全自動血液分析儀是由法國生產(chǎn)的五分類血液分析儀，其基本原理是基于阻抗法、光學(xué)法和流式細(xì)胞術(shù)技術(shù)人體全血樣本中的被分析物進(jìn)行定量檢測。其中阻抗法即為電阻抗法，它可以將細(xì)胞巡夜置于不導(dǎo)電的容器中，插入傳感器，接通電源后可以使兩側(cè)電極產(chǎn)生穩(wěn)定電流，幫助稀釋的細(xì)胞巡夜經(jīng)傳感器外側(cè)向內(nèi)部流動，感應(yīng)區(qū)內(nèi)電阻因此增高，引起電壓瞬間變化并形成脈沖信號，脈沖振幅越高，細(xì)胞體積越大，脈沖數(shù)量越多，細(xì)胞數(shù)量越多，進(jìn)而得出血液中血細(xì)胞數(shù)量和體積值。利用光學(xué)法在進(jìn)行檢測時，其主要試劑是鞘液，鑒于人體紅細(xì)胞的滲透壓要略高于鞘液，使得紅細(xì)胞中的血紅蛋白從細(xì)胞中擴(kuò)散開，讓鞘液中的水分進(jìn)入細(xì)胞中，在此情況下即使紅細(xì)胞膜仍保持完好，但其也已與鞘液之間形成相同的折射指數(shù)，確保其可以清楚地呈現(xiàn)在激光下，而白細(xì)胞則始終保持在其最原始的結(jié)構(gòu)形態(tài)下，利用光學(xué)流動通道進(jìn)行分類和計數(shù)。流式細(xì)胞技術(shù)則是在細(xì)胞分子的水平上通過單克隆抗體對單個細(xì)胞及其他生物粒子進(jìn)行多參數(shù)、快速的定量分析，不僅可以高速分析上萬個細(xì)胞，還可以從一個細(xì)胞中測得多項參數(shù)，在臨床實際用于過程中始終具備速度快、精確度高和準(zhǔn)確性好的優(yōu)勢。通過對三項技術(shù)的融合，該型號的全自動血液細(xì)胞分析儀具備較高的檢測性能，在有核紅細(xì)胞的檢測中可以快速有效地對其進(jìn)行判定。

經(jīng)本研究發(fā)現(xiàn)，全自動血液分析儀測定低值標(biāo)本、中值標(biāo)本和高值標(biāo)本有核紅細(xì)胞批內(nèi)變異系數(shù)(3.059%、3.429%、3.711%)均小于性能要求變異系數(shù)(5%)；而利用全自動血液分析儀測定低值標(biāo)本、中值標(biāo)本和高值標(biāo)本的有核紅細(xì)胞在放置1 h、2 h、4 h、6 h、8 h、12 h、24 h 和48 h 后的水平發(fā)現(xiàn)無明顯變化，批內(nèi)變異系數(shù)(1.685%、1.421% 和2.007%)均低于性能要求變異系數(shù)(5%)，由此可見，全自動血液細(xì)胞分析儀在有核紅細(xì)胞檢測具有穩(wěn)定性強(qiáng)、精密度高的優(yōu)勢。除此以外，對陽性標(biāo)本兩種方式測定值的線性分析發(fā)現(xiàn)，顯微鏡鏡檢法與全自動血液分析儀測定值之間存在線性關(guān)系，得出回歸方程Y=0.7483X+1.8191，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(R2=0.7618，＜0.05)，進(jìn)一步證實，全自動血液細(xì)胞分析儀與顯微鏡鏡檢法之間有效良好的相關(guān)性，檢測結(jié)果準(zhǔn)確可靠。

綜上所述，全自動血液細(xì)胞分析儀在有核紅細(xì)胞檢測具有性能良好，穩(wěn)定性強(qiáng)及可重復(fù)操作等優(yōu)勢，并且其測定結(jié)果與顯微鏡鏡檢法相比具有良好的線性關(guān)系，在保障檢測結(jié)果準(zhǔn)確可靠方面效果突出，臨床應(yīng)用價值顯著。但本研究仍存在研究樣本較少的劣勢，受研究條件限制，未對標(biāo)本的攜帶污染率進(jìn)行評估，未能進(jìn)一步展現(xiàn)儀器的性能的一致性，導(dǎo)致檢測結(jié)果的差異可能受儀器性能方面的影響，檢測結(jié)果可能存在偏頗，期待在今后的研究中可以進(jìn)一步擴(kuò)大樣本容量，完善研究方案。