劉啟燕，張海洋，周 雁，王卓仁，趙會(huì)長，周洪英

（1.湖北省農(nóng)業(yè)科學(xué)院經(jīng)濟(jì)作物研究所，武漢 430064；2.華中農(nóng)業(yè)大學(xué)，武漢 430070）

斑玉蕈（Hypsizygus marmoreus）是離褶傘科（Lyophyllaccae）玉蕈屬（Hypsizygus）的大型真菌，也稱為真姬菇、海鮮菇、蟹味菇、白玉菇等。栽培的斑玉蕈品種主要有淺灰色和純白色兩個(gè)品系，灰色品系常稱為蟹味菇，純白色品系常稱為白玉菇、海鮮菇［1］。中國1986 年3 月從日本引進(jìn)，已形成規(guī)?；耘?。2019 年全國斑玉蕈工廠化生產(chǎn)企業(yè)（可統(tǒng)計(jì)）總有效產(chǎn)能接近920 t/d，相較于2018 年增加8.6%［2］。中國斑玉蕈品種資源少，多為引進(jìn)品種，菌株的生產(chǎn)單位對其獲得的菌株各自命名，導(dǎo)致菌株名稱極為混亂，市場上斑玉蕈同名異種、同種異名、同名異株、同株異名等現(xiàn)象普遍存在，給斑玉蕈菌株交流和生產(chǎn)帶來不便。收集、保存、研究和利用斑玉蕈種質(zhì)資源，選育具有優(yōu)良性狀的斑玉蕈新品種尤為重要。本研究收集斑玉蕈種質(zhì)資源，從農(nóng)藝性狀、生理生化指標(biāo)、拮抗試驗(yàn)等方面對斑玉蕈菌株進(jìn)行種質(zhì)資源評價(jià)，篩選出適合工廠化栽培的優(yōu)良菌株及系列親本，旨在為斑玉蕈產(chǎn)業(yè)發(fā)展奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 供試材料

從全國各地收集13 株斑玉蕈栽培菌株，具體見表1。

表1 供試菌株及來源

1.2 培養(yǎng)料配方

試驗(yàn)所使用的培養(yǎng)料配方為如意情生物科技股份有限公司的生產(chǎn)配方。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 拮抗試驗(yàn) 拮抗試驗(yàn)參照文獻(xiàn)［3］操作。

1.3.2 出菇試驗(yàn) 試驗(yàn)在如意情生物科技股份有限公司進(jìn)行。接種于栽培瓶后在培養(yǎng)室內(nèi)培養(yǎng)，觀察記錄各菌株的菌絲滿瓶時(shí)間，從培養(yǎng)30 d 開始，每隔10 d 檢測1 次瓶重（不含瓶蓋）、培養(yǎng)料的pH 和水分含量，直至搔菌。出菇室內(nèi)常規(guī)管理，搔菌后觀察記錄菌絲恢復(fù)時(shí)間、出原基時(shí)間、幼蕾齊瓶口時(shí)間。定義各生長階段標(biāo)準(zhǔn)，菌絲滿瓶為80%的栽培瓶長滿90%菌絲，搔菌后菌絲恢復(fù)為搔菌后80%栽培瓶的菌絲重新覆蓋培養(yǎng)料表面，出原基為80%栽培瓶有明顯出原基跡象，幼蕾齊口為菌株80%栽培瓶的幼蕾生長至與瓶口齊高。達(dá)到采收標(biāo)準(zhǔn)時(shí)采收，觀察菌株顏色、形態(tài)等性狀，統(tǒng)計(jì)產(chǎn)量及有效芽數(shù)。有效芽采收時(shí)，高度為采收高度2/3 以上的菇。

2 結(jié)果與分析

2.1 拮抗試驗(yàn)

不同菌株間的拮抗反應(yīng)見表2。供試的13 株菌株大部分拮抗線較明顯，僅4 號與9 號菌株間無拮抗線。1 號菌株與4 號、5 號、9 號、11 號、12 號、13 號菌株均有拮抗線但不明顯，11 號、12 號、13 號菌株間拮抗線不明顯。

表2 不同編號菌株間的拮抗反應(yīng)

2.2 出菇試驗(yàn)

各菌株在栽培瓶中生長情況見表3。1 號、4 號和6 號菌株生長速度稍慢，20 d 滿瓶；其他菌株生長均較快，15～17 d 菌絲全部滿瓶。收集到的13 株菌株間生長期最多相差5 d。斑玉蕈有較長的后熟期，滿瓶時(shí)間差異對養(yǎng)菌時(shí)間影響較小。

表3 菌絲及子實(shí)體生長時(shí)間

搔菌后菌絲恢復(fù)較慢的是1 號、4 號、5 號、9 號、11 號、12 號、13 號，10～11 d 料面菌絲完全恢復(fù)，其他菌株7～8 d 恢復(fù)。部分菌株出原基較快，9～11 d 原基清晰可見，部分需要14～17 d。幼蕾生長至齊瓶口的時(shí)間為18～23 d。2 號、3 號、6 號、7 號、8 號、10 號6 株菌株滿瓶及出原基均較快。

2.3 瓶重、pH 及水分變化

選取1 至10 號菌株從培養(yǎng)30 d 開始，每隔10 d檢測1 次瓶重，培養(yǎng)料的pH 和水分含量，直至搔菌，具體情況見圖1。培養(yǎng)30 d 瓶重為963～1 010 g，搔菌瓶重為919～964 g，符合瓶栽斑玉蕈的瓶重要求。瓶重有隨培養(yǎng)時(shí)間增加而降低的趨勢，部分菌株如4 號、7 號、8 號、9 號、10 號均表現(xiàn)為瓶重先降低再增加，其他菌株隨培養(yǎng)時(shí)間增加瓶重降低。隨培養(yǎng)時(shí)間增加，菌絲不斷分解瓶內(nèi)培養(yǎng)基質(zhì)，搔菌時(shí)的瓶重較裝瓶時(shí)明顯減輕。

圖1 不同培養(yǎng)時(shí)間的瓶重

培養(yǎng)過程中培養(yǎng)料pH 的變化趨勢與瓶重較一致，隨時(shí)間延長而降低（圖2）。培養(yǎng)30 d pH 為6.20～7.49，搔菌時(shí)降到5.58～6.50。培養(yǎng)60 d 時(shí)pH有較大幅度的降低，均降至6.08以下。培養(yǎng)60～75 d，除4 號pH 為6.50，其他菌株均在6.00 以下；1 號、7號、8 號、9 號有小幅上升，其他菌株基本處于不斷下降趨勢。培養(yǎng)料水分含量整體隨時(shí)間延長出現(xiàn)先降低后增加的趨勢，隨著菌絲的后熟，栽培料含水量增加。培養(yǎng)30 d 栽培料含水量為67.03%～70.47%，75 d 搔菌時(shí)含水量為70.73%～75.43%，其中4 號、6 號、9號、10 號的含水量一直上升，1 號、2 號、3 號、5 號先下降后上升。

圖2 培養(yǎng)料pH 和含水量變化

2.4 菌株形態(tài)特征、產(chǎn)量及有效芽數(shù)比較

13 株菌株產(chǎn)量及有效芽情況見表4。13 株菌株產(chǎn)量差別較大，差異達(dá)到極顯著水平（P＜0.01）。其中2 號、7 號、8 號產(chǎn)量較高，在370 g 以上；1 號、5 號、9 號產(chǎn)量極低，在105 g 以下，不適合工廠化生產(chǎn)。菌株間有效芽數(shù)的差別也較大，有效芽數(shù)較多的是7 號和10 號，超過140 個(gè)/瓶，1 號、4 號、5 號、9 號的有效芽數(shù)少，均低于40 個(gè)/瓶。

表4 13 株菌株產(chǎn)量及有效芽情況

13 株斑玉蕈菌株子實(shí)體見圖3。13 株菌株子實(shí)體大致可分為三類，區(qū)別較大。第一類是典型的袋栽海鮮菇品種，編號為1 號、4 號、5 號、9 號、11 號、12號、13 號，主要表現(xiàn)為出芽數(shù)少，菇帽厚實(shí)潔白、大小均勻，菇柄短粗直挺、無菌絲黏連，整體產(chǎn)量偏低，1 號、5 號、9 號瘤蓋較嚴(yán)重，其他菌株瘤蓋較少；第二類是瓶栽白玉菇品種，編號為3 號、6 號、10 號，主要表現(xiàn)為總芽量多、碎芽少，菇帽白色、大小均勻，菇柄細(xì)長易彎曲、根部氣生菌絲多；第三類是瓶栽蟹味菇品種，編號為2 號、7 號、8 號，主要表現(xiàn)為芽數(shù)多，菇帽灰白、有深色的網(wǎng)紋、大小不均勻、長瘤少，菇柄細(xì)長易彎曲、根部氣生菌絲多，單產(chǎn)高。

圖3 13 株斑玉蕈菌株子實(shí)體特征

3 小結(jié)與討論

1）栽培瓶水分含量和pH 變化可作為菌絲后熟的重要標(biāo)志。高君輝等［4］研究表明，隨著培養(yǎng)時(shí)間延長，培養(yǎng)料含水量上升，培養(yǎng)料含水量達(dá)到73%～74%時(shí)斑玉蕈的單產(chǎn)最高。張職視［5］研究表明，袋栽斑玉蕈菌包從裝袋到生理成熟，其含水量由57.9%上升至70.5%，袋上部pH 由6.5 下降到5.5。本試驗(yàn)結(jié)論與前人一致，菌絲滿瓶后平均含水量為69.29%，搔菌前栽培瓶的平均含水量上升到72.65%，pH 由滿瓶時(shí)的6.83 下降至搔菌時(shí)的5.86。

2）拮抗反應(yīng)是真菌識別異己保持群體遺傳特性的反應(yīng)。當(dāng)不同親和性菌株共同培養(yǎng)時(shí)，為防止與遺傳上明顯不同的個(gè)體間菌絲融合，菌株就會(huì)在交界處形成隆起、凹溝或隔離，以保持個(gè)體遺傳上的獨(dú)立和穩(wěn)定［3］。試驗(yàn)顯示，4 號和9 號菌株無拮抗線，其有效芽數(shù)均較少、平均產(chǎn)量也較低、子實(shí)體的表現(xiàn)均可歸為典型袋栽海鮮菇品種，可初步判定為同種異名菌株。11 號、12 號、13 號菌株間有拮抗線但不明顯，其農(nóng)藝性狀表現(xiàn)較一致，菇帽厚實(shí)潔白、菇柄短粗直挺、產(chǎn)量偏低，說明其親緣關(guān)系較近。8 號、9號、10 號菌株間的拮抗線明顯，分別為瓶栽蟹味菇、袋栽海鮮菇、瓶栽白玉菇的典型代表。前人的研究均顯示拮抗反應(yīng)有局限性，難以區(qū)分兩個(gè)在遺傳上有相似背景或者親緣關(guān)系很近的菌株［6-9］。本研究與前人結(jié)論吻合，1 號菌株與4 號、5 號、9 號、11 號、12 號、13 號菌株均有拮抗線但不明顯，除1 號菌株外，其他菌株間均有拮抗線但有的不明顯、有的明顯。說明拮抗反應(yīng)作為菌株分型，在初步研究時(shí)具有簡潔高效的特點(diǎn)，細(xì)致準(zhǔn)確顯示菌株的親緣關(guān)系需要酯酶同工酶、ISSR 等方法［6-9］。

3）綜合考察各菌株的生理生化指標(biāo)及農(nóng)藝性狀，篩選出適合工廠瓶栽的菌株，為蟹味菇RH2 和白玉菇RB2。其中蟹味菇RH2，菇帽為淺灰色，大小均勻，長瘤極少，菇柄偏白色，細(xì)長，根部氣生菌絲多導(dǎo)致菇柄易黏連，平均有效芽為120 芽/株，每瓶產(chǎn)量為392.1 g。白玉菇RB2，菇帽為亮白色，大小適中，長瘤極少，菇柄亮白色，細(xì)長，根部氣生菌絲多易黏連，有效芽為152 個(gè)/株，每瓶產(chǎn)量為321.9 g。