匡秀華，王秋珍,2,樊克鋒，張夢涵，張春輝

(1 河南牧業(yè)經(jīng)濟學(xué)院 動物醫(yī)藥學(xué)院，河南 鄭州 450000；2 中國農(nóng)業(yè)大學(xué) 動物醫(yī)學(xué)院，北京 100000)

植物精油又稱揮發(fā)油、香精油，是芳香植物次生代謝產(chǎn)物。植物精油為油狀液體，不溶于水，有香味，相對分子量小、且具有一定的生物活性[1]，由100種以上的成分構(gòu)成。一般而言，植物精油含有醇類、醛類、酸類、酚類、丙酮類、萜烯類[2]，主要有提供細胞營養(yǎng)、凈化空氣和殺菌、天然防腐、提高免疫等功能[3]。在畜禽生產(chǎn)領(lǐng)域，植物精油不僅可以減少畜禽用飼料營養(yǎng)成分損失，增強畜禽體內(nèi)消化酶活性及機體免疫力，而且還可以增強畜禽生產(chǎn)性能、抗應(yīng)激能力，降低畜禽生產(chǎn)成本損耗[4]。

茶樹精油(tea tree oil,TTO)是從互葉白千層的新鮮枝葉中提取出來的一種無色至淡黃色的植物精油。研究表明，茶樹精油具有抗細菌和真菌[5-7]、抗病毒[7-9]、抗炎[10-11]、抗腫瘤[11]、抗氧化[12]和殺蟲作用[13-15]，其抑菌作用強于薰衣草[16]。國內(nèi)外對茶樹精油的應(yīng)用多集中在食品添加劑和洗護用品領(lǐng)域[10]，對其在動物養(yǎng)殖過程中對細菌的抗菌及藥用機理研究甚少。

沙門氏菌(Salmonella)屬腸桿菌科，是一種常見的食源性致病菌和人畜共患病病原菌，能夠引起傷寒、急性腸胃炎、敗血癥等多種疾病?？股厥桥R床治療各種細菌感染性疾病的常用藥物，在畜禽養(yǎng)殖過程中不合理使用抗生素不僅會導(dǎo)致細菌的耐藥性，而且還存在食品安全和公共衛(wèi)生安全風(fēng)險。2020年農(nóng)業(yè)農(nóng)村部的減抗限抗政策，使中獸藥的應(yīng)用和研究成為熱點。本研究對茶樹精油的抗沙門氏菌SH17活性進行初步分析，為茶樹精油作為藥物開發(fā)與推廣應(yīng)用提供理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

1.1.1 試驗菌株 本試驗所用的沙門氏菌SH17，由河南農(nóng)業(yè)大學(xué)藥理教研室提供。通過PCR擴增與測序分析、血清學(xué)鑒定、耐藥因子與毒力因子檢測，結(jié)果表明沙門氏菌SH17為鼠傷寒沙門氏菌(Typhimurium)，攜帶TEM、DHA、gyrA、gyrB、parC、parE、oqxA、oqxB耐藥因子，含有invH、fimA、spvB毒力因子。

1.1.2 試驗試劑 2,3,5-三苯基氯化四氮唑(TTC，T8170B，Beijing Solarbio Science)，甘油(20190112，天津市富宇精細化工有限公司)，總蛋白定量(考馬斯亮藍法，A045-2-2，南京建成生物工程研究所)，堿性磷酸酶(AKP)檢測試劑盒(A059-2-2，南京建成生物工程研究所)，磷酸二氫鉀(20191107，國藥集團化學(xué)試劑有限公司)，磷酸氫二鈉 (20191107，天津市風(fēng)船化學(xué)科技有限公司)，氫氧化鈉 (20191009，天津市化學(xué)試劑三廠)，二甲基亞砜(DMSO,20191008，天津市大茂化學(xué)試劑廠)。Mueller-Hinton瓊脂(2017114，青島高科園海博生物技術(shù)有限公司)，Mueller-Hinton肉湯(20180828，青島高科園海博生物技術(shù)有限公司)。

1.1.3 試驗藥物 茶樹精油，(密度0.906，純度98%，吉安林業(yè)科學(xué)研究所)，恩諾沙星(批號E0786，純度>98%，TCI)，氟苯尼考(批號F0811，純度>98%，TCI)，慶大霉素(批號G0383，純度≥99%，TCI)，阿莫西林(批號A129660，純度≥98%，阿拉丁)，克拉維酸鉀(批號C10190946，純度50%，麥克林)，磺胺異噁唑(批號U0098，純度>98%，TCI)，甲氧芐啶(批號C10404816，純度98%，麥克林)，頭孢噻呋(純度≥98%，河南牧翔動物藥業(yè)有限公司)，四環(huán)素(批號824G022，純度≥98%，Solarbio)。

茶樹精油的配制：將茶樹精油與DMSO按照1∶19體積比混合時，DMSO對菌液的生長狀況無影響[12]。取茶樹精油溶于DMSO，質(zhì)量濃度為843 500 μg/mL。

按照CLSI方法[17]，將恩諾沙星、氟苯尼考、慶大霉素、四環(huán)素、頭孢噻呋、阿莫西林均配制成質(zhì)量濃度為5 120 μg/mL備用；磺胺異噁唑/甲氧芐啶配制成質(zhì)量濃度為48 640/2 560 μg/mL備用；阿莫西林/克拉維酸配制成質(zhì)量濃度為5 120/2 560 μg/mL備用。

1.1.4 試驗設(shè)備 生化培養(yǎng)箱(LDZX-75KBS)，上海新苗醫(yī)療器械制造有限公司；多功能酶標(biāo)儀(Varioskan Thermo Scientific)、小型高速離心機(5K24R Eppendof)、電導(dǎo)儀(DDS-12DW)，上海般特儀器有限公司。

1.2 試驗方法

1.2.1 細菌菌液的制備 將沙門氏菌SH17接種至Mueller-Hinton肉湯中，37 ℃下過夜培養(yǎng)，用新鮮Mueller-Hinton肉湯將其濁度調(diào)至0.5麥?zhǔn)蠁挝唬僖?∶100繼續(xù)稀釋，稀釋后的菌液備用。

1.2.2 藥物敏感性試驗 用微量二倍肉湯稀釋法進行。在96孔中先加入沙門氏菌SH17菌液260 μL，再分別加入茶樹精油或質(zhì)量濃度不同的抗生素30 μL，然后再加入2，3，5-三苯基氯化四氮唑(TTC)10 μL，混合均勻，37 ℃培養(yǎng)18～20 h。將大腸桿菌ATCC25922作為陽性對照，不含任何藥物和茶樹精油的沙門氏菌SH17作為陰性對照。結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)參考CLSL M11-A7[17]，茶樹精油最小抑菌濃度(MIC)的判定以TTC變色為準(zhǔn)。

1.2.3 茶樹精油最小殺菌濃度(MBC)測定 根據(jù)MIC的測定結(jié)果，以不含任何抗生素和茶樹精油的沙門氏菌SH17作為對照，取無菌生長的茶樹精油質(zhì)量濃度分別為10 540，21 090，42 180，84 350 μg/mL的4個孔里面的液體100 μL涂布在Mueller-Hinton瓊脂板上，37 ℃培養(yǎng)24 h。 以在Mueller-Hinton瓊脂板上細菌生長減少99%所對應(yīng)的茶樹精油質(zhì)量濃度為MBC值[18]。

1.2.4 茶樹精油對沙門氏菌SH17耐藥性的影響 (1)含不同質(zhì)量濃度茶樹精油沙門氏菌SH17菌液的準(zhǔn)備。用Mueller-Hinton肉湯將過夜復(fù)蘇的沙門氏菌SH17菌液濁度調(diào)至0.5麥?zhǔn)蠁挝?，再?∶100的比例用Mueller-Hinton肉湯將菌液稀釋，備用。

以藥敏試驗的結(jié)果為基礎(chǔ)，取上述菌液于試管中，再分別向試管中加入茶樹精油，使其質(zhì)量濃度分別為0，2 635，5 270，10 540 μg/mL。然后于37 ℃搖床中160 r/min振蕩培養(yǎng)，分別在振蕩培養(yǎng)0，0.5，1，2，3，4，5，6，7，8 h取樣。

(2)茶樹精油對沙門氏菌SH17生長曲線的影響。參照文獻[19]的方法，用1.2.4(1)中制備的菌液，在600 nm處測定細菌的吸光度(OD)，以不加藥的沙門氏菌SH17菌液作為對照，繪制沙門氏菌SH17的生長曲線。

(3)茶樹精油對沙門氏菌SH17細胞壁的影響。正常情況下堿性磷酸酶(alkaline phosphatas,AKP)不能透過細胞壁滲出至細胞外，檢測不到其活性，因而其活性可以作為反映沙門氏菌SH17細胞壁是否完整的依據(jù)。

用1.2.4(1)中制備的菌液，按照參考文獻[20]的方法，依據(jù)堿性磷酸酶(AKP)檢測試劑盒的說明方法進行加樣。在520 nm處測定混合液的OD值，以AKP活性的變化反映藥液對細菌細胞壁的影響。

(4)茶樹精油對沙門氏菌SH17胞外蛋白質(zhì)量濃度的影響。用1.2.4(1)中制備的菌液，參照參考文獻[20]，用考馬斯亮藍法進行測定，按試劑盒的說明書進行試驗操作。

(5)茶樹精油對沙門氏菌電導(dǎo)率的影響。電導(dǎo)率是電解質(zhì)溶液導(dǎo)電能力的表現(xiàn)，與溶液中離子濃度成正比。因而可以通過測定電導(dǎo)率來探究菌體細胞內(nèi)容物的外溢情況，間接反映細胞壁的破壞情況[21]。按參考文獻[21]的方法并改良，用1.2.4(1)中制備的菌液，用電導(dǎo)儀測不同時間茶樹精油與沙門氏菌SH17共孵育的電導(dǎo)率，反映細菌細胞膜通透性的變化，探究茶樹精油對沙門氏菌SH17細胞壁的影響。

(6)茶樹精油對沙門氏菌SH17生物膜的影響。按參考文獻[22]的方法，將1.2.4(1)中制備的菌液與藥物吹打混勻，分別取300 μL于96孔板中，以肉湯作為空白對照，37 ℃恒溫培養(yǎng)36 h。之后吸棄96孔板中的液體，每孔加入200 μL甲醇靜置15 min。吸棄甲醇，每孔加入300 μL無菌PBS進行清洗，重復(fù)3次。PBS清洗后，待其自然晾干，每孔加入250 μL 10 g/L的結(jié)晶紫溶液，靜置15 min。吸棄結(jié)晶紫溶液，用無菌PBS清洗3次，每孔加入250 μL體積分數(shù)30%乙酸溶解，30 min后，570 nm波長下測其OD，分析茶樹精油對沙門氏菌SH17生物膜的影響。

1.2.5 茶樹精油對沙門氏菌SH17鞭毛動力的影響 參照文獻[23]的方法并改良。菌液制備：用Mueller-Hinton肉湯將過夜復(fù)蘇的菌液濁度調(diào)至0.5麥?zhǔn)蠁挝?，再?∶100的比例用Mueller-Hinton肉湯將菌液稀釋，備用。取10 μL槍頭吸取上述備用的沙門氏菌SH17菌液，扎在含不同質(zhì)量濃度(0,2 635,5 270,10 540 μg/mL)茶樹精油的半固體培養(yǎng)基中央，靜置3～5 min后，于37 ℃過夜培養(yǎng)18～20 h，觀察并記錄結(jié)果。

2 結(jié)果與分析

2.1 最小抑菌濃度(MIC)與最小殺菌濃度(MBC)

茶樹精油和抗生素對沙門氏菌SH17的MIC見表1。由表1可以看出，沙門氏菌SH17對茶樹精油的MIC為10 540 μg/mL；對阿莫西林/克拉維酸、恩諾沙星、四環(huán)素敏感；對磺胺異噁唑/甲氧芐啶、氟苯尼考、頭孢噻呋、慶大霉素的敏感性較低，表現(xiàn)出耐藥性。

表1 沙門氏菌SH17對茶樹精油和抗生素敏感性試驗結(jié)果

根據(jù)MIC的試驗結(jié)果，吸取無菌生長的茶樹精油質(zhì)量濃度分別為10 540，21 090，42 180，84 350 μg/mL的孔中100 μL菌液,分別涂布Mueller-Hinton瓊脂平板。結(jié)果顯示，從茶樹精油質(zhì)量濃度為10 540 μg/mL的孔中取出的菌液涂布瓊胎平板上培養(yǎng)后僅有微量菌生長；涂市其余茶樹精油質(zhì)量濃度的瓊脂平板無菌生長，推斷茶樹精油對沙門氏菌SH17的MBC為10 540 μg/mL。

2.2 茶樹精油對沙門氏菌SH17耐藥性的影響

2.2.1 茶樹精油對沙門氏菌SH17生長曲線的影響 茶樹精油對沙門氏菌SH17生長曲線的影響如圖1所示。由圖1可知，在培養(yǎng)0～1 h，沙門氏菌SH17在4種含不同質(zhì)量濃度茶樹精油的菌液中的生長曲線無明顯差別；培養(yǎng)1～6 h，含2 635 μg/mL茶樹精油對沙門氏菌SH17的抑制作用較小，遠不如茶樹精油質(zhì)量濃度為5 270 和10 540 μg/mL處理；在6 h后，2 635 μg/mL茶樹精油對沙門氏菌SH17的抑菌作用增強；在1～8 h，茶樹精油質(zhì)量濃度為5 270和10 540 μg/mL處理對沙門氏菌SH17的生長抑制作用較強，其菌液OD600浮動較小，一直在0.05～0.15浮動。茶樹精油質(zhì)量濃度為10 540 μg/mL時，仍有極少量細菌生長，和MIC、MBC的定義相符[18]。

圖1 茶樹精油對沙門氏菌SH17生長曲線的影響

2.2.2 茶樹精油對沙門氏菌SH17細胞壁的影響 由圖2可知，加入茶樹精油的菌液中堿性磷酸酶活性高于不加茶樹精油的菌液，這表明，茶樹精油破壞了沙門氏菌SH17的細胞壁結(jié)構(gòu)，使菌體內(nèi)的堿性磷酸酶釋放，從而起到抑菌作用。從圖2還可以看出，在培養(yǎng)1～3 h，在茶樹精油質(zhì)量濃度為0，2 635，5 270，105 40 μg/mL時，沙門氏菌SH17堿性磷酸酶活性呈上升趨勢；在3～4 h，各質(zhì)量濃度茶樹精油處理的沙門氏菌SH17堿性磷酸酶活性呈下降趨勢。

從圖2還可以看出，堿性磷酸酶變化具有周期性，可能是由于沙門氏菌SH17生長的周期性所導(dǎo)致的。隨著茶樹精油質(zhì)量濃度的增加，堿性磷酸酶活性升高且變化趨勢類似，表明茶樹精油的質(zhì)量濃度與沙門氏菌SH17堿性磷酸酶活性具有一定關(guān)系，即隨著茶樹精油濃度的增加，沙門氏菌SH17的堿性磷酸酶活性也隨之增加。

2.2.3 茶樹精油對沙門氏菌SH17胞外蛋白質(zhì)量濃度的影響 茶樹精油對沙門氏菌SH17胞外蛋白質(zhì)量濃度的影響如圖3所示。由圖3可知，當(dāng)茶樹精油質(zhì)量濃度為0，2 635，5 270，10 540 μg/m L時，沙門氏菌SH17胞外蛋白質(zhì)量濃度具有初始值。在0～1 h，隨著培養(yǎng)時間的延長，沙門氏菌SH17胞外蛋白質(zhì)量濃度呈急劇上升趨勢。雖然1～2 h和3～4 h，2 635，5 270，10 540 μg/mL茶樹精油使沙門氏菌SH17胞外蛋白質(zhì)量濃度呈下降趨勢；但隨培養(yǎng)時間的延長沙門氏菌SH17胞外蛋白質(zhì)量濃度總體緩慢上升。隨著茶樹精油質(zhì)量濃度的升高，沙門氏菌SH17胞外蛋白質(zhì)量濃度也隨之增加。試驗結(jié)果表明，不同質(zhì)量濃度的茶樹精油作用于沙門氏菌SH17后，可能會對其細胞壁和細胞膜產(chǎn)生影響，從而導(dǎo)致其胞外蛋白質(zhì)量濃度增加。

圖3 茶樹精油對沙門氏菌SH17胞外蛋白質(zhì)量濃度的影響

2.2.4 茶樹精油對沙門氏菌SH17電導(dǎo)率的影響 由圖4可以看出，所有處理沙門氏菌SH17菌液的電導(dǎo)率變化曲線基本一致，均隨著培養(yǎng)時間的延長整體呈上升趨勢；在培養(yǎng)3～4 h時，各菌液的電導(dǎo)率都有所下降，這主要是受沙門氏菌SH17的生長周期影響所致。加入茶樹精油之后菌液的電導(dǎo)率明顯高于不加茶樹精油菌液，且隨著茶樹精油質(zhì)量濃度的增加，菌液的電導(dǎo)率逐漸上升。

2.2.5 茶樹精油對沙門氏菌SH17生物膜的影響 茶樹精油對沙門氏菌SH17生物膜的影響如圖5所示。

圖5 茶樹精油對沙門氏菌SH17生物膜的影響

由圖5可知，隨著茶樹精油質(zhì)量濃度的增大，其對沙門氏菌SH17形成生物膜的清除作用逐漸增強。當(dāng)茶樹精油質(zhì)量濃度為10 540 μg/mL時，對沙門氏菌SH17的生物膜抑制最為明顯；與0 μg/mL茶樹精油相比，其對沙門氏菌SH17生物膜形成抑制率提高大約50%。有研究表明，茶樹精油對表皮葡萄球菌、金黃色葡萄球菌生物膜的清除作用較強，且隨著茶樹精油質(zhì)量濃度越大，對表皮葡萄球菌、金黃色葡萄球菌生物膜的清除能力越大[24]。這與本研究結(jié)果一致。

2.3 茶樹精油對沙門氏菌SH17鞭毛動力的影響

茶樹精油對沙門氏菌SH17鞭毛動力的影響如圖6所示。

圖6 茶樹精油對沙門氏菌SH17鞭毛動力的影響

由圖6可知，沙門氏菌SH17在不含茶樹精油的空白對照培養(yǎng)基表面呈圓環(huán)狀生長，基本長滿培養(yǎng)皿，且向下在瓊脂中心部位沿著插入位置向外周擴散；當(dāng)茶樹精油質(zhì)量濃度為2 635 μg/mL時，沙門氏菌SH17仍有一定程度的運動性，但相對于不含茶樹精油的空白對照而言，其在培養(yǎng)基表面的生長運動痕跡明顯縮小，且沙門氏菌SH17僅沿著插入培養(yǎng)基的位置生長；當(dāng)茶樹精油質(zhì)量濃度為5 270，10 540 μg/mL時，在培養(yǎng)基平面觀察不到沙門氏菌SH17的運動痕跡，說明茶樹精油對沙門氏菌SH17鞭毛動力有明顯抑制作用，且隨著茶樹精油質(zhì)量濃度的增加，其對沙門氏菌SH17鞭毛動力的抑制作用增強。

3 討 論

研究表明，茶樹精油對革蘭氏陰性菌和革蘭氏陽性菌均有抑制作用，其對雞沙門氏菌、綠膿桿菌MIC分別為0.3%，0.25%～2%[25]；對大腸埃希菌和金黃色葡萄球菌的MBC分別是0.25%和2～4 mg/mL[6-7]，茶樹精油對金黃色葡萄球菌的抑制效果與其質(zhì)量濃度呈正相關(guān)[7]；茶樹精油對單增李斯特菌的MIC為1～2 mg/mL[8]。本試驗中，茶樹精油對臨床分離有耐抗生素表型的沙門氏菌SH17的MIC和MBC均為10 540 μg/mL，提示茶樹精油抑菌作用和殺菌作用可同時發(fā)揮作用。與文獻報道數(shù)值上的差異，可能與選用的菌株有關(guān)。研究表明，不同產(chǎn)地的2種茶樹精油對大腸桿菌、白色念珠菌、綠膿桿菌和金黃色葡萄球菌均有抑制作用，但存在差異，廣西產(chǎn)TTO的MIC為2.64～41.18 mg/mL，澳大利亞產(chǎn)TTO的MIC為1.32～21.09 mg/mL，二者都含有較多的4-萜烯醇[20]。茶樹精油含松油烯-4-醇(44.4%)、檸檬烯、γ-松油烯、α-松油烯等[26]；通過GC-MS從3個廠家的茶樹精油中共分離鑒定出22種化合物，其主要成分為(-)-α-蒎烯、α-松油烯、1,2,3,5-四甲基苯、 D-檸檬烯、桉葉油醇、γ-萜品烯、α-萜品烯、(-)-4-萜品醇、α-松油醇等，且3個廠家的茶樹精油均對金黃色葡萄球、大腸桿菌和白色念珠菌有較強的抑菌效果，且α-松油醇、α-萜品烯、γ-萜品烯、D-檸檬烯含量的高低會影響抑菌效果[27]。

低質(zhì)量濃度(0.5 mg/mL)茶樹精油可抑制單增李斯特菌的生長[8]，與本試驗5 270 μg/mL茶樹精油對沙門氏菌SH17生長曲線的抑制結(jié)果相似。茶樹精油不僅抑制金黃色葡萄球菌的生長，而且也使菌體總蛋白含量降低，當(dāng)茶樹精油質(zhì)量濃度升至2 MIC時，這種抑制作用更明顯，呈現(xiàn)出劑量依賴關(guān)系，推測可能是茶樹精油破壞了金黃色葡萄球菌細胞膜的完整性[28]。當(dāng)細菌細胞壁的完整性被破壞時，AKP被釋放到培養(yǎng)介質(zhì)中；正常情況下，細菌細胞壁完整時無法檢測到AKP；因而可通過檢測細菌培養(yǎng)介質(zhì)中是否含有AKP來判斷細菌細胞壁是否受損[29]。當(dāng)細菌細胞壁被破壞后，其內(nèi)容物被釋放出來，造成細菌菌體內(nèi)總蛋白含量下降，而胞外蛋白含量增加，電導(dǎo)率增加。茶樹精油可能破壞了沙門氏菌SH17的細胞壁，從而導(dǎo)致AKP活性、胞外蛋白質(zhì)量濃度和電導(dǎo)率均增加。這種現(xiàn)象在研究中藥和/或提取物對沙門氏菌的作用時也可觀察到，如肉桂醛對沙門氏菌的作用[30]。這提示中藥的提取物，包括精油類和單體活性成分，對細菌的作用機制可能是相似的。

本試驗中，5 270和10 540 μg/mL茶樹精油對沙門氏菌SH17生物膜抑制較明顯。研究表明，19.2 μg/mL茶樹精油作用銅綠假單胞桿菌20 h后，其生物膜完全被清除[31]。缺失bapA基因可導(dǎo)致沙門氏菌失去生物被膜的形成能力，其編碼的bapA蛋白是生物膜形成的必需蛋白；在體外培養(yǎng)上皮細胞模型中發(fā)現(xiàn)，Ⅰ型菌毛、Lpf和Pef也有助于生物膜的形成[32]。2～4 mg/mL茶樹精油有較好的抗金黃色葡萄球菌懸浮菌和生物被膜的活性，通過抑制PIA的合成及eDNA的釋放從而有效抑制金黃色葡萄球菌生物被膜的形成，且茶樹油對icaA，sarA，cidA，hla等生物被膜相關(guān)基因有抑制作用[7]。這對下一步如何深入研究茶樹精油對革蘭氏陰性菌生物膜的抑制機制提供了思路。

本試驗結(jié)果顯示，2 635 μg/mL茶樹精油可使沙門氏菌SH17運動力下降，5 270 和10 540 μg/mL茶樹精油則完全抑制了沙門氏菌SH17的運動，表明茶樹精油對沙門氏菌SH17的鞭毛動力有抑制作用。沙門氏菌致病過程中需要bcfD、stfH、fimH等毒力基因發(fā)揮定殖、粘附作用[33-34]。這些毒力基因主要為沙門氏菌T3SS分泌系統(tǒng)，其中flgK、flhB、flhA、fgI、fliL和fliN同時影響鞭毛形成和運動性；motB影響運動性，但不影響鞭毛形成[35]。有研究表明，低質(zhì)量濃度(8～16 μg/mL)非抗生素舍曲林可有效降低沙門氏菌的體外生長活力；0.2 μg/mL舍曲林可使沙門氏菌聚集運動能力顯著降低，致使舍曲林對T3SS的毒力基因hilA、invF、prgH的轉(zhuǎn)錄有顯著抑制作用[36]。沙門氏菌與丁香醛共孵育后，T3SS入侵效應(yīng)蛋白和調(diào)節(jié)蛋白表達顯著下調(diào)；經(jīng)RT-PCR分析，丁香醛可抑制hilD-hilC-rstA-hilA基因調(diào)控路徑，降低下游效應(yīng)蛋白和調(diào)節(jié)蛋白的表達[32]。本試驗僅觀察到了茶樹精油對沙門氏菌SH17鞭毛動力有抑制作用，但具體對沙門氏菌SH17哪個基因有影響尚待進一步研究。