何利 付志麗 熊燕 趙坤 楊滔 楊玲 劉文

中圖分類號(hào) R289.5;R284 文獻(xiàn)標(biāo)志碼 A 文章編號(hào) 1001-0408（2022）06-0693-06

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2022.06.08

摘 要 目的 研究芍藥甘草湯抗胃潰瘍作用的譜效關(guān)系。方法 制備11批芍藥甘草湯，以無(wú)水乙醇造模法制備胃潰瘍大鼠模型，以胃康靈為陽(yáng)性對(duì)照，考察各批芍藥甘草湯對(duì)模型大鼠胃組織中防御因子一氧化氮（NO）、表皮生長(zhǎng)因子（EGF）、超氧化物歧化酶（SOD）和攻擊因子丙二醛（MDA）含量的影響。采用《中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)（2004A版）》建立11批芍藥甘草湯的HPLC指紋圖譜并進(jìn)行相似度評(píng)價(jià)，通過與混合對(duì)照品比對(duì)指認(rèn)共有峰。通過灰色關(guān)聯(lián)分析法分析芍藥甘草湯抗胃潰瘍作用的譜效關(guān)系。結(jié)果 11批芍藥甘草湯均可顯著降低胃潰瘍模型大鼠胃組織中MDA的含量，顯著增加NO、EGF、SOD的含量（P<0.01），對(duì)胃潰瘍有一定的改善作用。11批樣品的圖譜中共有23個(gè)共有峰，與對(duì)照指紋圖譜的相似度均大于0.9;通過與混合對(duì)照品比對(duì)，共指認(rèn)了7個(gè)共有峰，分別為沒食子酸（峰5）、芍藥內(nèi)酯苷（峰9）、芍藥苷（峰10）、甘草苷（峰12）、芹糖異甘草苷（峰14）、異甘草苷（峰15）、甘草酸（峰22）。7個(gè)指認(rèn)共有峰和藥效指標(biāo)的平均關(guān)聯(lián)度均大于0.6，其中又以峰22（甘草酸）、峰10（芍藥苷）、峰12（甘草苷）的平均關(guān)聯(lián)度較大，分別為0.807、0.772、0.770。結(jié)論 芍藥甘草湯抗胃潰瘍作用是多個(gè)成分協(xié)同作用的結(jié)果，其中甘草酸、芍藥苷、甘草苷可能是其主要的藥效貢獻(xiàn)成分。

關(guān)鍵詞 芍藥甘草湯;抗胃潰瘍;譜效關(guān)系;灰色關(guān)聯(lián)分析

Spectrum-effect relationship of anti-gastric ulcer effect of Shaoyao gancao decoction

HE Li1，F(xiàn)U Zhili1，XIONG Yan1，ZHAO Kun1，YANG Tao1，YANG Ling1，LIU Wen2（1. Dept. of Basic Medicine， Guizhou Nursing Vocational College， Guiyang 550025， China; 2. Dept. of Pharmacy， Guizhou Medical University， Guiyang 550004， China）

ABSTRACT? ?OBJECTIVE To study the spectrum-effect relationship of anti-gastric ulcer effect of Shaoyao gancao decoction. METHODS Eleven batches of Shaoyao gancao decoction were prepared; gastric ulcer model was established by anhydrous ethanol modeling method. Using Weikangling as positive control， the effects of Shaoyao gancao decoction on the contents of defensive factors [nitric oxide （NO）， epidermal growth factor （EGF）， superoxide dismutase （SOD）] and attack factor [malondialdehyde （MDA）] in gastric tissue of model rats were investigated. HPLC fingerprints of 11 batches of Shaoyao gancao decoction were established and similarity evaluation was performed with Similarity Evaluation System of Traditional Chinese Medicine Chromatographic Fingerprint （2004A edition）; common peaks were identified by comparing with mixed control. The spectrum-effect relationship of Shaoyao gancao decoction against gastric ulcer was analyzed based on the grey correlation analysis. RESULTS Eleven batches of Shaoyao ganyao decoction could significantly decrease the content of MDA in gastric tissue， while increased the contents of NO， EGF and SOD in gastric ulcer model rats （P<0.01）， and had a certain inhibitory effect on the gastric ulcer. There were 23 common peaks in chromatograms of 11 batches of samples， and the similarity with the control fingerprint was not less than 0.9. By comparing with mixed control， 7 common peaks were identified， namely gallic acid （peak 5）， albiflorin （peak 9）， paeoniflorin （peak 10）， liquiritin （peak 12）， isoliquiritin apioside （peak 14）， isoliquiritoside （peak 15）， glycyrrhizic acid （peak 22）. The average correlation degree of 7 identified common peaks and pharmacodynamic indexes were greater than 0.6， of which peak 22 （glycyrrhizic acid）， peak 10 （paeoniflorin） and peak 12 （liquiritin） had the largest correlation， and their values were 0.807，0.772 and 0.770 respectively. RESULTS The anti-gastric ulcer effect of Shaoyao gancao decoction is the result of the synergistic effect of multiple components， among which glycyrrhizic acid， paeoniflorin and liquiritin may be the main pharmacodynamic components.

KEYWORDS? ?Shaoyao gancao decoction; anti-gastric ulcer; spectrum-effect relationship; grey correlation analysis

胃潰瘍是臨床十分常見的消化性潰瘍之一，是由多種因素引起的胃黏膜肌層壞死性缺損病變[1]?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)普遍認(rèn)為，胃潰瘍的發(fā)病機(jī)制與胃黏膜中攻擊因子與防御因子水平的不平衡有關(guān)，因此通過測(cè)定攻擊因子和防御因子水平可有助于評(píng)估胃潰瘍的轉(zhuǎn)歸情況[2]。

在中醫(yī)學(xué)中，胃潰瘍屬于“胃脘痛”范疇[3]。芍藥甘草湯始載于《傷寒論》，原方由白芍和炙甘草兩味藥按質(zhì)量比1 ∶ 1組成，二藥相伍，可奏酸甘化陰、調(diào)和肝脾、柔筋止痛之效，是古今常用的緩急止痛經(jīng)方[4]。現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，芍藥甘草湯具有保護(hù)胃黏膜、解除平滑肌痙攣等藥理作用，被廣泛用于臨床治療以內(nèi)臟平滑肌過度活動(dòng)、劇烈痙攣等為特征的疾病，尤以胃潰瘍?yōu)樯鮗5-6]。目前，方中各單味藥的化學(xué)成分研究較為明確[7-8]，但治療胃潰瘍的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)尚未見明確報(bào)道。各單味藥的化學(xué)成分研究不能客觀、完整地揭示該方藥效與各成分之間的聯(lián)系，無(wú)法全面、真實(shí)地反映芍藥甘草湯抗胃潰瘍的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)。

本課題組前期對(duì)芍藥甘草湯的提取工藝進(jìn)行了優(yōu)化[9]，并證實(shí)了其抗胃潰瘍的作用[10]。目前，譜效學(xué)已被學(xué)者廣泛應(yīng)用于中藥活性成分和藥理作用關(guān)系的研究領(lǐng)域，該法可通過線性或非線性數(shù)學(xué)處理，將化學(xué)指紋圖譜與中藥藥效有機(jī)結(jié)合，從而挖掘與藥效相關(guān)的物質(zhì)基礎(chǔ)[11]。基于此，本研究擬以大鼠胃組織內(nèi)防御因子一氧化氮（nitric oxide，NO）、表皮生長(zhǎng)因子（epidermal growth factor，EGF）、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）和攻擊因子丙二醛（malondialdehyde，MDA）的含量為藥效指標(biāo)，考察芍藥甘草湯的抗胃潰瘍作用;同時(shí)，本研究擬建立11批芍藥甘草湯的高效液相色譜（high performance liquid chromatography，HPLC）指紋圖譜，然后通過灰色關(guān)聯(lián)分析法將抗胃潰瘍藥效指標(biāo)與指紋圖譜信息進(jìn)行關(guān)聯(lián)，旨在初步探討芍藥甘草湯抗胃潰瘍的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)，為該方的進(jìn)一步研究應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料

1.1 主要儀器

本研究所用主要儀器包括1260 Ⅱ型HPLC儀、DAD型紫外-可見檢測(cè)器（美國(guó)Agilent公司），Auy220型電子天平（日本Shimadzu公司），SK8210HP型超聲波清洗器（上?？茖?dǎo)超聲儀器有限公司），HH-4型數(shù)顯恒溫水浴鍋（常州澳華儀器有限公司），Spectra MAX Plus 384型酶標(biāo)儀[美谷分子儀器（上海）有限公司]等。

1.2 主要藥品與試劑

沒食子酸對(duì)照品（批號(hào)180213，純度≥99.9%）、芍藥內(nèi)酯苷對(duì)照品（批號(hào)180324，純度≥99.3%）、芹糖異甘草苷對(duì)照品（批號(hào)181216，純度≥98.9%）、異甘草苷對(duì)照品（批號(hào)180826，純度≥98.1%）、甘草酸對(duì)照品（批號(hào)181025，純度≥98.9%）均購(gòu)自成都植標(biāo)化純生物技術(shù)有限公司;芍藥苷對(duì)照品（批號(hào)110736-201842，純度≥99.4%）、甘草苷對(duì)照品（批號(hào)111610-201607，純度≥98.1%）均購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院;磷酸鹽緩沖液（批號(hào)20190517）購(gòu)自北京索萊寶科技有限公司;大鼠EGF酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）試劑盒（批號(hào)ZC36425）、大鼠NO ELISA試劑盒（批號(hào)ZC 37502）、大鼠MDA ELISA試劑盒（批號(hào)ZC 36429）、大鼠SOD ELISA試劑盒（批號(hào)ZC36451）均購(gòu)自上海茁彩生物科技有限公司;10%中性福爾馬林固定液（批號(hào)190603）購(gòu)自貴州科倫藥業(yè)有限公司;蘇木精（批號(hào)H9627）、伊紅Y（批號(hào)71014544）、二甲苯（批號(hào)10023418）、石蠟（批號(hào)69019361）、乙腈（色譜純）、無(wú)水乙醇均購(gòu)自國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司;胃康靈（陽(yáng)性對(duì)照，批號(hào)201910029，規(guī)格0.4 g/粒）購(gòu)自黑龍江葵花藥業(yè)股份有限公司;甲醇（色譜純）購(gòu)自美國(guó)Tedia公司;其余試劑均為分析純，水為超純水。

白芍飲片和炙甘草飲片各11批，分別購(gòu)自貴州各醫(yī)藥企業(yè)或藥房，具體來源信息見表1。上述藥材經(jīng)貴州中醫(yī)藥大學(xué)周漢華教授鑒定，分別為毛茛科植物芍藥Paeonia lactiflora Pall.的干燥根和豆科植物甘草Glycyrrhiza uralensis Fisch.的干燥根和根莖的炮制加工品。

1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

SPF級(jí)SD大鼠84只，雌雄各半，體質(zhì)量為（220±20） g，購(gòu)自遼寧長(zhǎng)生生物技術(shù)股份有限公司，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)為SCXK（遼）2020-0001。

2 方法與結(jié)果

2.1 芍藥甘草湯抗胃潰瘍作用的考察

2.1.1 芍藥甘草湯藥液的制備 按質(zhì)量比1 ∶ 1稱取白芍飲片、炙甘草飲片粉末（過四號(hào)篩）各200 g，加8倍量80%乙醇，回流提取3次，每次1.5 h，過濾，合并濾液，減壓濃縮，于60 ℃下干燥至恒定質(zhì)量，得干浸膏（每1 g干浸膏相當(dāng)于生藥總量3.33 g），粉碎，于干燥器中保存，備用;臨用時(shí)，加水超聲（功率500 W，頻率59 kHz）45 min使溶解，混勻，制成質(zhì)量濃度為0.32 g/mL的藥液。

2.1.2 分組 SD大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，隨機(jī)分為對(duì)照組、模型組、胃康靈組和不同批次（S1～S11）芍藥甘草湯組，每組6只，雌雄各半。

2.1.3 給藥與造模 各給藥組大鼠的給藥量均以70 kg成人口服用藥等效劑量的1倍按體表面積換算法進(jìn)行換算，芍藥甘草湯組大鼠灌胃相應(yīng)藥液2.16 g/kg（按生藥總量計(jì)），胃康靈組大鼠灌胃相應(yīng)藥液0.432 g/kg（溶劑為水），對(duì)照組和模型組大鼠灌胃水，每天1次，每次2 mL，連續(xù)給藥7 d。除對(duì)照組外，其余各組大鼠采用無(wú)水乙醇造模法造模，于第6天給藥后禁食不禁水24 h，于第7天末次給藥2 h后灌胃無(wú)水乙醇10 mL/kg復(fù)制胃潰瘍模型。

2.1.4 取樣 各組大鼠造模1.5 h后，麻醉，脫頸處死，自胸骨劍突下沿腹中線開腹，取出胃，用生理鹽水洗凈胃內(nèi)容物，平鋪于玻璃板上，切取胃黏膜中潰瘍瘢痕周圍組織適量，一部分放入10%中性福爾馬林固定液中，固定24 h，待制備蘇木精和伊紅Y染色病理切片;另一部分用預(yù)冷的0.02 mol/L磷酸鹽緩沖液（pH7.0～7.2，下同）清洗，去除血液并用吸水紙吸干，稱定質(zhì)量，備用。將組織塊移入勻漿器中，按質(zhì)量-體積比1 ∶ 5加入5～10 mL預(yù)冷的磷酸鹽緩沖液，充分研磨，得到組織勻漿液。將制備好的組織勻漿液于3 000 r/min離心15 min，取上清液，用于后續(xù)檢測(cè)。

2.1.5 組織病理學(xué)觀察 取固定24 h后的胃組織，用不同體積分?jǐn)?shù)的乙醇脫水，將已透明的組織塊浸入石蠟中完成浸蠟，后續(xù)進(jìn)行包埋、切片、烤片和脫蠟、蘇木精-伊紅Y染色。以中性樹脂封片后，置于顯微鏡下觀察染色結(jié)果（圖1）。結(jié)果顯示，對(duì)照組大鼠胃黏膜上皮細(xì)胞結(jié)構(gòu)完整，黏液細(xì)胞及腺體細(xì)胞排列緊密整齊，黏膜未見充血、炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)。與對(duì)照組比較，模型組大鼠胃黏膜損傷嚴(yán)重，黏膜上皮細(xì)胞大面積缺損，黏液細(xì)胞受損，腺體細(xì)胞排列紊亂，黏膜充血及炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)現(xiàn)象明顯，提示胃潰瘍模型復(fù)制成功。與模型組比較，11批芍藥甘草湯組和胃康靈組大鼠胃黏膜上皮細(xì)胞結(jié)構(gòu)較為完整，黏液細(xì)胞及腺體細(xì)胞脫落受損較少，黏膜充血及炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)現(xiàn)象明顯改善，提示胃黏膜受損均能在一定程度上減輕。

2.1.6 胃組織中MDA、NO、EGF、SOD含量檢測(cè) 按試劑盒說明書使用酶標(biāo)儀檢測(cè)大鼠胃組織勻漿液中MDA、NO、EGF、SOD的含量，運(yùn)用SPSS 23.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。數(shù)據(jù)以x±s表示，組間比較采用單因素方差分析，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。結(jié)果顯示，與對(duì)照組比較，模型組大鼠胃組織中MDA含量顯著升高，NO、EGF、SOD含量均顯著降低（P<0.01）;與模型組比較，11批芍藥甘草湯組大鼠胃組織中MDA含量均顯著降低（P<0.01），NO、EGF、SOD含量均顯著升高（P<0.01），且部分批次的效果顯著優(yōu)于胃康靈（P<0.05或P<0.01），詳見表2。

上述結(jié)果表明，11批芍藥甘草湯均能在一定程度上減少攻擊因子MDA的含量，增加防御因子NO、EGF、SOD的含量，調(diào)節(jié)了攻擊因子和防御因子的動(dòng)態(tài)平衡，對(duì)無(wú)水乙醇所致胃潰瘍有一定的抑制作用。

2.2 11批芍藥甘草湯HPLC指紋圖譜的建立

2.2.1 芍藥甘草湯提取物的制備 按“2.1.1”項(xiàng)下方法制備芍藥甘草湯的干浸膏，備用。

2.2.2 溶液的制備 （1）混合對(duì)照品溶液：分別取沒食子酸、芍藥內(nèi)酯苷、芍藥苷、甘草苷、芹糖異甘草苷、異甘草苷、甘草酸對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成質(zhì)量濃度分別為48.20、230.58、822.00、294.70、59.68、31.98、416.00 μg/mL的混合對(duì)照品溶液。（2）供試品溶液：精密稱取芍藥甘草湯提取物0.6 g，置于100 mL具塞錐形瓶中，加入甲醇50 mL，輕輕振蕩搖勻后稱定質(zhì)量，超聲（功率500 W，頻率59 kHz）處理45 min，放冷后再次稱定質(zhì)量，用甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，經(jīng)0.45 μm微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

2.2.3 色譜條件 以Diamonsil C18（2）（250 mm×4.6 mm，5 μm）為色譜柱，以乙腈（A）-0.2%磷酸溶液（B）為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫（0～5 min，10%A→13%A;5～11 min，13%A→14%A，11～20 min，14%A→16%A;20～25 min，16%A→18%A;25～27 min，18%A;27～28 min，18%A→20%A;28～34 min，20%A;34～40 min，20%A→30%A;40～50 min，30%A→40%A;50～60 min，40%A→55%A）;檢測(cè)波長(zhǎng)依次為285 nm（0～7 min）、230 nm（7～35 min）、360 nm（35～46 min）、258 nm（46～60 min）;流速為1 mL/min;柱溫為35 ℃;進(jìn)樣量為10 μL。

2.2.4 精密度考察 取同一芍藥甘草湯供試品溶液（編號(hào)S11），按“2.2.3”項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次，以甘草酸峰（因甘草酸峰分離良好且在各批次樣品中出峰穩(wěn)定）為參照峰（S），計(jì)算各共有峰的相對(duì)峰面積和相對(duì)保留時(shí)間。結(jié)果顯示，各共有峰相對(duì)峰面積和相對(duì)保留時(shí)間的RSD均不高于2.90%（n=6），表明本方法精密度良好。

2.2.5 穩(wěn)定性考察 取同一芍藥甘草湯供試品溶液（編號(hào)S11），分別于室溫下放置0、2、4、6、12、24 h時(shí)按“2.2.3”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，以甘草酸峰為參照峰（S），計(jì)算各共有峰的相對(duì)峰面積和相對(duì)保留時(shí)間。結(jié)果顯示，各共有峰相對(duì)峰面積和相對(duì)保留時(shí)間的RSD均不高于2.89%（n=6），表明供試品溶液在室溫下放置24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.2.6 重復(fù)性考察 取同一批芍藥甘草湯提取物（編號(hào)S11），按“2.2.2（2）”項(xiàng)下方法平行制備6份供試品溶液，按“2.2.3”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，以甘草酸峰為參照峰（S），計(jì)算各共有峰的相對(duì)峰面積和相對(duì)保留時(shí)間。結(jié)果顯示，各共有峰相對(duì)峰面積和相對(duì)保留時(shí)間的RSD均不高于2.70%（n=6），表明本方法重復(fù)性良好。

2.2.7 指紋圖譜的建立 取11批白芍飲片、炙甘草飲片，按“2.2.1”項(xiàng)下方法制備提取物，再按“2.2.2（2）”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，分別取10 μL按“2.2.3”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜圖。將色譜數(shù)據(jù)導(dǎo)入《中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)（2004A版）》，以S1樣品圖譜為參照?qǐng)D譜，將時(shí)間窗寬度設(shè)為0.1 s，采用多點(diǎn)校正法進(jìn)行全峰匹配以生成疊加指紋圖譜，采用中位數(shù)法生成對(duì)照指紋圖譜（R），詳見圖2。圖2顯示，11批樣品圖譜中共有23個(gè)共有峰。

2.2.8 共有峰指認(rèn) 取“2.2.2”項(xiàng)下混合對(duì)照品溶液適量，按照“2.2.3”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜圖（圖3）。通過對(duì)比混合對(duì)照品圖譜與對(duì)照指紋圖譜中各成分峰的保留時(shí)間，共指認(rèn)出7個(gè)共有峰，分別為沒食子酸（峰5）、芍藥內(nèi)酯苷（峰9）、芍藥苷（峰10）、甘草苷（峰12）、芹糖異甘草苷（峰14）、異甘草苷（峰15）、甘草酸（峰22）。

2.2.9 相似度評(píng)價(jià) 采用《中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)（2004A版）》對(duì)11批芍藥甘草湯的指紋圖譜進(jìn)行相似度評(píng)價(jià)。結(jié)果顯示，11批樣品的色譜圖與對(duì)照指紋圖譜的相似度均大于0.9，詳見表3。這說明11批樣品化學(xué)成分的一致性良好。

2.3 芍藥甘草湯抗胃潰瘍作用的譜效關(guān)系

2.3.1 抗胃潰瘍指標(biāo)的數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)化 將“2.1.6”項(xiàng)下各組大鼠胃組織中攻擊因子MDA和防御因子NO、EGF、SOD含量按下式進(jìn)行數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)化：MDA抑制率=[（模型組含量-芍藥甘草湯組含量）/模型組含量]×100%;NO、EGF、SOD促進(jìn)率=[（芍藥甘草湯組含量-模型組含量）/芍藥甘草湯組含量]×100%，結(jié)果見表4。

2.3.2 灰色關(guān)聯(lián)分析 采用均值法對(duì)原始數(shù)據(jù)進(jìn)行無(wú)量綱化處理[12]。分別以11批芍藥甘草湯對(duì)胃潰瘍模型大鼠胃組織中攻擊因子MDA的抑制率和防御因子NO、SOD、EGF的促進(jìn)率作為參考序列X0（k），取對(duì)應(yīng)批次芍藥甘草湯HPLC指紋圖譜指認(rèn)的7個(gè)共有峰的相對(duì)峰面積作為比較序列Xi（k）（i表示共有峰編號(hào)），代入下式計(jì)算參考序列與比較序列的灰色關(guān)聯(lián)系數(shù)：ζ0i（k）=[Δ（min）+ρΔ（max）

Δ0i（k）+ρΔ（max）

] ，其中Δ0i（k）=|X0（k）-Xi（k）|，分辨系數(shù)ρ為0.5[13]。然后，再計(jì)算灰色關(guān)聯(lián)度（r），即為參考序列與比較序列的灰色關(guān)聯(lián)系數(shù)ζ0i（k）的平均值[14]。各個(gè)藥效指標(biāo)r的均值，即為相應(yīng)成分的平均關(guān)聯(lián)度，結(jié)果見表5。

根據(jù)灰色關(guān)聯(lián)分析結(jié)果可知，芍藥甘草湯指紋圖譜中指認(rèn)的7個(gè)共有峰與藥效指標(biāo)間的平均關(guān)聯(lián)度均大于0.6，表明各指認(rèn)共有峰與藥效指標(biāo)間均有關(guān)聯(lián)性[15]，平均關(guān)聯(lián)度由高到低依次為：甘草酸（峰22）>芍藥苷（峰10）>甘草苷（峰12）>異甘草苷（峰15）>芹糖異甘草苷（峰14）>芍藥內(nèi)酯苷（峰9）>沒食子酸（峰5），其中與藥效指標(biāo)關(guān)聯(lián)性最強(qiáng)的前3位分別為甘草酸（峰22）、芍藥苷（峰10）、甘草苷（峰12），其平均關(guān)聯(lián)度均大于0.75。結(jié)果表明，芍藥甘草湯的抗胃潰瘍活性可能并非某單一成分的作用，而是多成分協(xié)同起效的結(jié)果，其中又以甘草酸（峰22）、芍藥苷（峰10）、甘草苷（峰12）對(duì)藥效活性的貢獻(xiàn)最大，提示這3個(gè)成分可能是芍藥甘草湯發(fā)揮抗胃潰瘍作用的主要藥效貢獻(xiàn)成分。

3 討論

本課題組前期對(duì)檢測(cè)波長(zhǎng)進(jìn)行考察發(fā)現(xiàn)，由于芍藥甘草湯成分復(fù)雜，單一波長(zhǎng)難以全面體現(xiàn)所有成分的特征，故在全波長(zhǎng)掃描的基礎(chǔ)上，采用波長(zhǎng)切換法著重考察了285、230、360、258 nm波長(zhǎng)下的色譜信息。結(jié)果顯示，在本實(shí)驗(yàn)波長(zhǎng)切換條件下，檢測(cè)到的色譜峰較多，基線較穩(wěn)定，色譜信息較為全面，更有利于進(jìn)行后續(xù)的譜效關(guān)系分析。

胃潰瘍是臨床十分常見的消化性潰瘍之一，病因復(fù)雜?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)普遍認(rèn)為，胃黏膜保護(hù)因子與攻擊因子的失衡是胃潰瘍的重要發(fā)病機(jī)制[2]。本研究對(duì)胃黏膜攻擊因子和防御因子進(jìn)行了篩選：眾多研究表明，氧化應(yīng)激反應(yīng)與胃潰瘍發(fā)生的病理生理機(jī)制密切相關(guān)[16-17]，其中MDA是氧自由基作用與脂質(zhì)過氧化反應(yīng)降解所形成的產(chǎn)物，可直接損傷胃黏膜，是導(dǎo)致胃潰瘍損傷的重要攻擊因子之一;SOD可對(duì)氧自由基進(jìn)行清除，從而抑制因氧自由基與多價(jià)不飽和脂肪酸結(jié)合形成MDA對(duì)胃黏膜細(xì)胞的損傷作用，是胃黏膜的重要保護(hù)因子[18];胃潰瘍?cè)诎l(fā)生及愈合過程中涉及胃黏膜組織損傷、血管新生、上皮組織重構(gòu)等過程，EGF作為胃黏膜防御因子的代表，不僅能抑制胃酸分泌和胃黏膜細(xì)胞凋亡，還能促進(jìn)黏膜血管再生，并誘導(dǎo)上皮細(xì)胞合成，從而保護(hù)胃黏膜不受攻擊因子的損傷[19];充足的胃黏膜血流對(duì)胃黏膜的防御機(jī)制十分重要，NO作為血管調(diào)節(jié)因子，可舒張血管，增加胃黏膜血流量，從而輸送更多的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，為上皮損傷的重建提供能量，以維持胃黏膜的完整性并促進(jìn)急性損傷的愈合[20]。因此，本研究選擇攻擊因子MDA和防御因子SOD、NO、EGF作為抗胃潰瘍程度的評(píng)價(jià)指標(biāo)，以更全面反映芍藥甘草湯的藥效，并利于后續(xù)開展譜效關(guān)系分析。

芍藥甘草湯作為古代經(jīng)典名方之一，既往臨床研究已證實(shí)其具有較好的抗胃潰瘍作用[5-6]，然而尚未有研究對(duì)其具體的抗胃潰瘍物質(zhì)進(jìn)行深入剖析和探索。單一的藥效學(xué)或者指紋圖譜研究都難以闡明其抗胃潰瘍的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)，故本研究對(duì)其藥效指標(biāo)和指紋圖譜的相關(guān)性進(jìn)行了探討，以進(jìn)一步揭示其內(nèi)在的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)。本研究結(jié)果顯示，從芍藥甘草湯中指認(rèn)的7個(gè)共有峰與4個(gè)抗胃潰瘍活性指標(biāo)均有關(guān)聯(lián)性（平均關(guān)聯(lián)度>0.6），提示中藥作為一個(gè)極其復(fù)雜的化合物體系，其治療作用的發(fā)揮很有可能是幾個(gè)成分甚至幾類成分共同作用的結(jié)果;其中又以峰22、峰10、峰12的平均關(guān)聯(lián)度較大，具有較強(qiáng)的關(guān)聯(lián)性（平均關(guān)聯(lián)度>0.75），提示甘草酸、芍藥苷、甘草苷可能是芍藥甘草湯發(fā)揮抗胃潰瘍作用的主要藥效貢獻(xiàn)成分。但是本實(shí)驗(yàn)僅指認(rèn)了7個(gè)共有峰，有待后續(xù)進(jìn)一步研究。

綜上所述，本研究成功建立了芍藥甘草湯抗胃潰瘍的譜效關(guān)系，可為該方的抗胃潰瘍藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究提供參考，也可為后期深入研究芍藥甘草湯的臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。

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（收稿日期：2021-11-01 修回日期：2022-02-10）

（編輯：鄒麗娟）