任曉亮，呂國華，姜海洲,2，王 林，梁建超，馬學(xué)艷,，金 武,，徐東坡,，占明飛，聞海波,，顧若波,

(1.南京農(nóng)業(yè)大學(xué)無錫漁業(yè)學(xué)院，江蘇無錫 214081；2.中國水產(chǎn)科學(xué)研究院淡水漁業(yè)研究中心，農(nóng)業(yè)農(nóng)村部淡水魚類遺傳育種與養(yǎng)殖生物學(xué)重點(diǎn)開放實(shí)驗(yàn)室，江蘇無錫 214081；3.中國水產(chǎn)科學(xué)研究院淡水漁業(yè)研究中心，中美淡水貝類種質(zhì)資源保護(hù)及利用國際聯(lián)合實(shí)驗(yàn)室，江蘇無錫 214128；4.阜陽市水產(chǎn)管理局，安徽阜陽 236001；5.安徽水韻環(huán)保股份有限公司，安徽蕪湖 241000)

橄欖蟶蚌()屬雙殼綱蚌目蚌科蟶蚌屬()，俗稱蜆子、義河蚶或香蕉蚌，是我國特有的一種珍稀淡水食用蚌類，曾廣泛分布于我國淡水湖泊和河流中，由于其自身繁殖特點(diǎn)以及生境污染、設(shè)施工程建設(shè)等原因，橄欖蟶蚌自然資源出現(xiàn)嚴(yán)重衰退，近十幾年在太湖、鄱陽湖、洞庭湖的貝類種質(zhì)資源調(diào)查中已經(jīng)很難采集到的活體的橄欖蟶蚌，目前僅在湖北天門河、淮河部分流域能采集到橄欖蟶蚌活體，因此開展橄欖蟶蚌的人工繁育以及稚蚌培育技術(shù)研究對保護(hù)橄欖蟶蚌生物資源具有重要意義。

當(dāng)餌料、底質(zhì)以及水質(zhì)指標(biāo)滿足橄欖蟶蚌生存條件，并輔以精細(xì)管理，就可以實(shí)現(xiàn)橄欖蟶蚌的人工養(yǎng)殖。孫光興首次通過鉤介幼蟲體外培養(yǎng)技術(shù)獲得了變態(tài)成功的橄欖蟶蚌稚蚌，為我國橄欖蟶蚌人工繁殖提供了技術(shù)支撐。橄欖蟶蚌目前主要靠人工培育種苗供應(yīng)生產(chǎn)所需，其生命力極其脆弱，稚蚌期是直接影響到人工繁育成敗的關(guān)鍵階段。稚蚌的高死亡率很大一部分原因是缺乏充足的適口餌料生物和適宜的生存環(huán)境。因此，餌料和底質(zhì)是蚌類人工繁育成功的兩個(gè)關(guān)鍵因素。

本試驗(yàn)通過對不同生長階段稚蚌添加不同的餌料和底質(zhì)，探究餌料和底質(zhì)對稚蚌成活率和生長的影響，為橄欖蟶蚌的人工繁殖提供科學(xué)指導(dǎo)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

實(shí)驗(yàn)所用橄欖蟶蚌稚蚌取自中國水產(chǎn)科學(xué)研究院淡水漁業(yè)研究中心南泉養(yǎng)殖基地培育的0～90日齡稚蚌。根據(jù)橄欖蟶蚌稚蚌生長發(fā)育的特征，將稚蚌期分為前期稚蚌(0～30日齡)、中期稚蚌(31～60日齡)及后期稚蚌(61～90日齡)。選取三種藻類，藻1為機(jī)械破壁微擬球藻()，藻2為未破壁微擬球藻，藻3為卵囊藻(sp.)。實(shí)驗(yàn)選取四種底質(zhì)，硬黃泥采自橄欖蟶蚌的采集地霍邱縣；花園泥采自中國水產(chǎn)科學(xué)研究院淡水漁業(yè)研究中心南泉基地；鐵銹泥采自中國水產(chǎn)科學(xué)研究院淡水漁業(yè)研究中心江陰基地；黃泥采自阜陽市王家壩鎮(zhèn)淮河橄欖蟶蚌種質(zhì)資源保護(hù)區(qū)，使用前將0.5 kg泥土溶于5 L水中，混合均勻并用200目篩網(wǎng)過濾。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 餌料種類和密度對前期稚蚌成活和生長的影響

橄欖蟶蚌稚蚌剛完成變態(tài)發(fā)育時(shí)的殼長約為100 μm，遠(yuǎn)小于三角帆蚌()和紫黑翼蚌()稚蚌，因個(gè)體較小，此時(shí)開口餌料的選擇至關(guān)重要，而此時(shí)橄欖蟶蚌稚蚌對底質(zhì)需求量較少，底質(zhì)的影響因素較小。因此僅探究餌料種類及密度對0～30日齡稚蚌生長和成活的影響，不同底質(zhì)對其存活和生長的影響有待進(jìn)一步探究完善。將體外培養(yǎng)獲得的前期稚蚌設(shè)置A1、A2、A3 3個(gè)處理組，每組3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)放3 000只稚蚌。將稚蚌放入(45 cm×32 cm×15 cm)的養(yǎng)殖箱中培育，養(yǎng)殖水體約為20 dm，將養(yǎng)殖箱放入循環(huán)保溫系統(tǒng)中，控制水溫在(24±1)℃。每天上午翻池一次，換水1次，每次換水30 min，養(yǎng)殖箱出水口處套1個(gè)200目的篩網(wǎng)，防止稚蚌流失。換水后加入藻類和黃泥底質(zhì)(親本采自王家壩保護(hù)區(qū)，因此選用王家壩保護(hù)區(qū)內(nèi)采集的底泥)，其中A1組投喂藻1，A2組投喂藻2，濃度為3.4×10個(gè)/mL，A3組投喂藻1，濃度為6.8×10個(gè)/mL。養(yǎng)殖30 d后，在200目篩網(wǎng)上將稚蚌洗出，統(tǒng)計(jì)存活稚蚌數(shù)量，并隨機(jī)選取30只稚蚌，在光學(xué)顯微鏡(Olympus CX41)下拍照并測量其殼長(精確至0.01 mm)。

1.2.2 餌料種類和底質(zhì)種類對中期稚蚌成活和生長的影響

31～60日齡階段是稚蚌快速生長的關(guān)鍵時(shí)期，此時(shí)餌料和底質(zhì)對其生長均有重要作用，因此探究餌料種類和底質(zhì)種類對中期稚蚌生長和成活的影響。實(shí)驗(yàn)選取殼長為(1.66±0.03)mm，殼高為(1.01±0.02)mm的中期橄欖蟶蚌稚蚌，設(shè)計(jì)B1、B2、B3、B4、B5 5組，每組3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)放50只蚌。培育方法同1.2.1。換水后B1～B4添加黃泥底質(zhì)，B5添加硬黃泥底質(zhì)。B1組投喂藻3，B2組投喂50%藻3+50%藻2，B3組投喂藻2，B4和B5組投喂藻1，每日按照1.0×10個(gè)/mL藻類濃度投喂1次。成活率統(tǒng)計(jì)和殼長殼高測量同1.2.1。

1.2.3 底質(zhì)對后期稚蚌成活和生長的影響

90日齡后稚蚌可長到1 cm以上，此時(shí)已可以放到大水體中養(yǎng)殖，且4種餌料對中期稚蚌的成活已無顯著影響，因此僅探究底質(zhì)對后期稚蚌成活率和生長的影響，尋找適宜橄欖蟶蚌稚蚌生存的底質(zhì)條件。實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)C1、C2、C3、C4四組，每組設(shè)置3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)放3 000只稚蚌。培育方法同1.2.1。其中C1組底質(zhì)為硬黃泥，C2組底質(zhì)為鐵銹泥，C3組底質(zhì)為黃泥，C4組底質(zhì)為花園泥，均投喂藻1，藻類密度為3.4×10個(gè)/mL。成活率統(tǒng)計(jì)和殼長殼高測量同1.2.1。

1.3 生長性能指標(biāo)測定

根據(jù)以下公式計(jì)算稚蚌生長性能相關(guān)指標(biāo)：

成活率=×100%；

殼長日生長率=(-)/×100%；

殼高日生長率=(-)/×100%，

式中：為實(shí)驗(yàn)結(jié)束稚蚌存活數(shù)量，為實(shí)驗(yàn)開始稚蚌數(shù)量；、為實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)的殼長和殼高，、為實(shí)驗(yàn)開始時(shí)的殼長和殼高，為實(shí)驗(yàn)天數(shù)。

1.4 數(shù)據(jù)處理

試驗(yàn)結(jié)果采用SPSS 20軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，采用One-Way ANOVA 進(jìn)行單因素方差分析，用最小顯著性差異法進(jìn)行組間多重比較，所有結(jié)果均以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示，<0.05為差異顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 餌料種類和密度對前期稚蚌成活和生長的影響

如表1所示：成活率A1組最高為(74.76±3.41)%，A2組最低為(58.00±0.90)%；殼長、殼高A1組最高，分別為(1.28±0.04)mm、(0.84±0.12)mm，A2組最低，分別為(0.82±0.07)mm、(0.66±0.04)mm。單因素方差分析表明：A1、A3組成活率、殼長和殼高均無顯著差異，但均顯著高于A2組。

表1 餌料種類和密度對橄欖蟶蚌前期稚蚌成活和生長的影響

2.2 餌料種類和底質(zhì)種類對中期稚蚌成活和生長的影響

如表2所示：成活率B2組最高為(89.30±2.40)%，B3組最低為(84.70±4.67)%；殼長、殼高B4組最高，分別為(7.82±0.07)mm、(3.10±0.03)mm，殼長B3組最低，為(7.12±0.06)mm，殼高B1和B3最低，均為(2.90±0.03)mm。B5組成活率略高于B4組，但殼長、殼高均低于B4組。單因素方差分析表明：4組餌料對橄欖蟶蚌中期稚蚌的成活無顯著差異。B2組和B4組殼長和殼高無顯著性差異，但顯著高于B1組和B3組。2種底質(zhì)對中期稚蚌成活率無顯著差異，但B4組殼長、殼高顯著高于B5組。

表2 餌料種類對橄欖蟶蚌中期稚蚌成活和生長的影響

2.3 底質(zhì)種類對后期稚蚌成活和生長的影響

如表4所示：成活率C3組最高為(98.88±1.92)%，C4組的成活率最低，僅為(86.67±12.02)%；C1組殼長最高為(1.24±0.03)cm，C2組的殼長最低為(1.20±0.02)cm。單因素方差分析結(jié)果顯示：4組成活率和殼長均無顯著差異。

表3 不同底質(zhì)對后期稚蚌成活和生長的影響

3 討論

3.1 藻類對稚蚌成活和生長的影響

藻類、細(xì)菌、浮游植物和底泥都是淡水蚌類的食物來源，其中藻類是稚蚌最重要的食物來源，王揚(yáng)才等研究發(fā)現(xiàn)藻類約占貝類食物組成的90%，藻類的質(zhì)量和數(shù)量直接影響到稚蚌的生長和成活。微擬球藻因其細(xì)胞內(nèi)含有豐富的不飽和脂肪酸(主要是EPA)，有助于水生生物幼體的生長發(fā)育，所以廣泛應(yīng)用于水產(chǎn)養(yǎng)殖生產(chǎn)中。張佳康等用小球藻()、卵囊藻、微擬球藻和四尾柵藻()分別投喂三角帆蚌稚蚌，微擬球藻效果要優(yōu)于其他藻類。而劉建國在用微擬球藻投喂櫛孔扇貝()幼苗時(shí)發(fā)現(xiàn)，微擬球藻雖然能夠被攝食，但卻不易消化，容易導(dǎo)致食物在胃內(nèi)滯留盈漲，造成代謝性饑餓或者營養(yǎng)不良。前期稚蚌餌料實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：投喂破壁微擬球藻的前期稚蚌成活率和殼長都顯著高于投喂未破壁微擬球藻，可能是因?yàn)殚蠙煜|蚌的消化系統(tǒng)缺乏唾液腺和食道腺，消化道管壁的肌層很薄甚至沒有，所以消化吸收能力和消化管的蠕動(dòng)能力較弱，微擬球藻細(xì)胞壁較厚抑制了前期稚蚌的消化和吸收，導(dǎo)致稚蚌成活率低、生長慢。因此在養(yǎng)殖前期稚蚌時(shí)應(yīng)投喂破壁微擬球藻，有助于提高稚蚌成活和生長。中期稚蚌的餌料試驗(yàn)結(jié)果可能是因?yàn)殡S著稚蚌的生長，單一藻類的投喂可能無法滿足稚蚌下一階段生長對于營養(yǎng)的需求。卵囊藻和未破壁微擬球藻的最佳混合比例還有待進(jìn)一步研究。中期稚蚌投喂未破壁微擬球藻組成活率為84.7%，相比于前期稚蚌成活率已大大提高，說明隨著稚蚌的生長，消化管的蠕動(dòng)能力和消化能力增強(qiáng)，可以食用未破壁微擬球藻，所以在橄欖蟶蚌稚蚌人工培育后期，可使用國內(nèi)生產(chǎn)的未破壁微擬球藻進(jìn)行投喂，降低餌料成本。

何進(jìn)金等在對菲律賓蛤仔()仔稚貝食性研究中發(fā)現(xiàn)，高密度餌料條件下稚貝的生長速度明顯高于低密度餌料條件。陳愛華等對大竹蟶()稚貝生長和存活的研究中發(fā)現(xiàn)，隨餌料密度的增加，稚貝存活率先升后降，在藻類密度達(dá)到2×10個(gè)/mL時(shí)最高，在4×10個(gè)/mL時(shí)開始下降。孫明龍等在對三角帆蚌的研究中提出：貝類攝食存在一定的閾值，即其單位時(shí)間內(nèi)能夠消化的餌料量存在上限。HUA等在藻類密度對稚蚌生長及存活的研究中發(fā)現(xiàn)：3.5×10個(gè)/mL、8.5×10個(gè)/mL和1.75×10個(gè)/mL三個(gè)濃度沒有明顯差異。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示3.4×10個(gè)/mL成活率和殼長略高于6.8×10個(gè)/mL，但差異不顯著?？赡苁且?yàn)橹砂龅臄z食器官在高密度餌料中受到阻礙，也可能是因?yàn)轲D料密度過高導(dǎo)致其他環(huán)境因子改變，從而導(dǎo)致成活率和殼長下降。3.4×10個(gè)/mL的餌料濃度即可滿足前期稚蚌生長所需。

3.2 底質(zhì)對稚蚌成活和生長的影響

ISOM等研究發(fā)現(xiàn)，在養(yǎng)殖稚貝時(shí)，添加底泥可以提高其成活率；王如才等發(fā)現(xiàn)不同貝類對其生活底質(zhì)具有選擇性，主要可以分為三類：砂質(zhì)、泥砂質(zhì)和泥質(zhì)；HUA等設(shè)置了底泥組、細(xì)沙組、石灰石組以及無底質(zhì)組四種底質(zhì)對稚蚌生長和存活的影響，發(fā)現(xiàn)稚蚌在底泥中的成活率顯著高于其他組，無底質(zhì)組的稚蚌全部死亡，說明稚蚌生長是需要底質(zhì)的，底泥是其適宜底質(zhì)。馬學(xué)艷等在研究底質(zhì)對紫黑翼蚌稚蚌的影響中發(fā)現(xiàn)：普通黃泥和塘泥對紫黑翼蚌稚蚌的成活及生長均無顯著影響，據(jù)此推測不同蚌類對底質(zhì)有不同的選擇性，底質(zhì)的主要作用是為稚蚌提供優(yōu)良的生存環(huán)境，利于稚蚌的存活和生長。中期稚蚌底質(zhì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：黃泥組稚蚌殼長殼高顯著高于硬黃泥組，成活率差異不顯著，說明中期稚蚌在黃泥底質(zhì)中更利于其殼的生長。后期稚蚌底質(zhì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：稚蚌成活率、殼長和殼高四種底質(zhì)間差異不顯著，推測隨著稚蚌的不斷生長，適應(yīng)環(huán)境的能力增強(qiáng)，對底質(zhì)要求降低。后期稚蚌在硬黃泥底質(zhì)中殼長殼高生長最快，是否隨著橄欖蟶蚌的生長，更偏向生活在硬黃泥底質(zhì)中，有待進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證；同時(shí)鐵銹泥與其他底質(zhì)相比成活率和殼長沒有顯著差異，說明稚蚌是對鐵的需求不高，普通黃泥即可滿足稚蚌對鐵的需求。

4 結(jié)論

適合橄欖蟶蚌前期稚蚌生長的餌料種類是破壁微擬球藻，中期稚蚌以卵囊藻和未破壁微擬球藻的混合餌料組和破壁微擬球藻組的生長效果較好；且稚蚌前期按照3.4×10個(gè)/mL的餌料密度可以節(jié)省成本；中期稚蚌適宜的底質(zhì)為黃泥，硬黃泥、花園泥、鐵銹泥和黃泥四種底質(zhì)均適合后期稚蚌生長和存活。此次實(shí)驗(yàn)以期為后來學(xué)者研究橄欖蟶蚌提供一定的理論支持，彌補(bǔ)橄欖蟶蚌稚蚌養(yǎng)殖技術(shù)的空白，為橄欖蟶蚌的人工培育提供理論依據(jù)，并為橄欖蟶蚌的種質(zhì)資源恢復(fù)做出貢獻(xiàn)。