楊頌 楊建存

摘要：醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室是醫(yī)療資源體系的重要組成部分。基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室的建設(shè)和管理水平對(duì)醫(yī)療技術(shù)研究發(fā)展關(guān)系密切?；驍U(kuò)增技術(shù)在現(xiàn)代醫(yī)學(xué)診療中發(fā)揮出不容忽視的作用，在臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室建設(shè)中，必須符合實(shí)驗(yàn)室專業(yè)審核。通過嚴(yán)格驗(yàn)收基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室的建設(shè)管理指標(biāo)，病原微生物備案，對(duì)驗(yàn)收中的問題整改到位，確?；驍U(kuò)增實(shí)驗(yàn)室發(fā)揮出更充分的效能。

關(guān)鍵詞：基因擴(kuò)增;實(shí)驗(yàn)室建設(shè);質(zhì)量驗(yàn)收;問題;整改

【中圖分類號(hào)】R4 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A 【文章編號(hào)】1673-9026（2022）03--01

1引言

在國(guó)務(wù)院印發(fā)的《關(guān)于進(jìn)一步強(qiáng)化新型冠狀病毒核酸檢測(cè)醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室監(jiān)管通知》中，對(duì)基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室提出了新的要求。醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)和單位應(yīng)認(rèn)真落實(shí)法規(guī)要求，加強(qiáng)臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室建設(shè)和管理，保證臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室符合醫(yī)學(xué)相關(guān)質(zhì)量管理要求。

2基因擴(kuò)增技術(shù)概述

基因擴(kuò)增技術(shù)的原理是將基因中的DNA通過變性、退火、延伸等步驟實(shí)現(xiàn)循環(huán)，從而實(shí)現(xiàn)目標(biāo)基因特異性的多倍復(fù)制?；驍U(kuò)增技術(shù)具有諸多優(yōu)點(diǎn)，如特異性強(qiáng)、靈敏度高、操作簡(jiǎn)單等，這些優(yōu)點(diǎn)使其在醫(yī)學(xué)應(yīng)用越來越普遍。

3臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室籌建

依法登記準(zhǔn)入：根據(jù)國(guó)家法律法規(guī)要求，基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室在籌建前進(jìn)行登記準(zhǔn)入，由衛(wèi)生健康行政管理部門對(duì)實(shí)驗(yàn)室提交資料進(jìn)行技術(shù)審核，進(jìn)行備案。

硬件設(shè)施完備：根據(jù)實(shí)際情況，分為兩種，一種是在舊的實(shí)驗(yàn)樓基礎(chǔ)上進(jìn)行改造，另一種是重新建設(shè)實(shí)驗(yàn)樓。如果是舊樓改造，至少選三件房屋分別作為實(shí)驗(yàn)室的試劑存放區(qū)、標(biāo)本處理區(qū)、基因擴(kuò)增區(qū)。各個(gè)房間設(shè)置隔斷門并設(shè)置緩沖間。實(shí)驗(yàn)室設(shè)置通風(fēng)系統(tǒng)、空氣凈化系統(tǒng)、空調(diào)系統(tǒng)。

檢測(cè)系統(tǒng)性能完善：根據(jù)基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)實(shí)際需求確定檢測(cè)系統(tǒng)的精密度、線性范圍、生物參考區(qū)間驗(yàn)證、最低檢測(cè)限，制定檢測(cè)計(jì)劃，逐一開展檢測(cè)。

實(shí)驗(yàn)人員培訓(xùn)：根據(jù)基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室崗位需求，配備相應(yīng)的工作人員，實(shí)驗(yàn)室技術(shù)崗位須持證上崗，沒有基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn)的人員需參加專業(yè)培訓(xùn)，考核過關(guān)活得上崗證、并且經(jīng)過生物安全培訓(xùn)，考核合格后方能上崗。實(shí)驗(yàn)室制定人員培訓(xùn)計(jì)劃，定期培訓(xùn)提高提升實(shí)驗(yàn)人員崗位勝任力。

儀器設(shè)備檢定校準(zhǔn)：基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室的儀器設(shè)備根據(jù)廠家說明書進(jìn)行調(diào)試，根據(jù)精密度的要求進(jìn)行檢定校準(zhǔn)。干式恒溫裝置、低溫離心裝置精密度由符合資質(zhì)的計(jì)量機(jī)構(gòu)進(jìn)行檢定。生物安全柜由廠家出具質(zhì)量報(bào)告，或者由第三方專業(yè)檢測(cè)單位進(jìn)行檢測(cè)并出具評(píng)價(jià)報(bào)告。溫度檢測(cè)裝置、加樣裝置等小型檢測(cè)儀器根據(jù)精密度檢測(cè)要求定期進(jìn)行校準(zhǔn)。擴(kuò)增儀、提取儀等需要進(jìn)行性能驗(yàn)證，實(shí)驗(yàn)室的儀器設(shè)備建立檔案進(jìn)行全生命周期化管理。

手冊(cè)文件編寫：編制基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室日常管理制度、安全質(zhì)量管理規(guī)程，制定實(shí)驗(yàn)室設(shè)備性能驗(yàn)證程序。編制操作手冊(cè)，包含所有設(shè)備儀器的操作步驟、故障類型、注意事項(xiàng)、維護(hù)保養(yǎng)程序、標(biāo)本采集程序、項(xiàng)目檢測(cè)程序、所有文件按照實(shí)際情況進(jìn)行編寫、文件內(nèi)容簡(jiǎn)潔、統(tǒng)一，具有實(shí)用性。

7S管理：對(duì)基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室的各個(gè)區(qū)域設(shè)置對(duì)應(yīng)的顏色標(biāo)簽或者是按照分區(qū)一區(qū)二區(qū)三區(qū)編號(hào)粘貼，試劑存放區(qū)設(shè)置綠色標(biāo)簽、標(biāo)本處理區(qū)設(shè)置紅色標(biāo)簽、基因擴(kuò)增區(qū)設(shè)置橙色標(biāo)簽，可移動(dòng)的物品設(shè)置編碼并貼上標(biāo)簽，保證各個(gè)區(qū)域的物品存放有序，不能混用。對(duì)實(shí)驗(yàn)室各個(gè)區(qū)域安全進(jìn)行管理，確保所有設(shè)施歸類合理，安全可靠，降低實(shí)驗(yàn)室污染風(fēng)險(xiǎn)。實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行日常檢查并做好信息記錄。

4臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室驗(yàn)收

標(biāo)本檢測(cè)：對(duì)標(biāo)本進(jìn)行現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)。從接收標(biāo)本開始，到基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)的整個(gè)過程，了解基因擴(kuò)征實(shí)驗(yàn)整個(gè)過程具體情況，到最后得出實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)后的處理，實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性進(jìn)行檢測(cè)，考察基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室是否具備完整合格的實(shí)驗(yàn)?zāi)芰Α?/p>

文件檢查：對(duì)基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室的所有文件進(jìn)行檢查，對(duì)各項(xiàng)性能驗(yàn)證的數(shù)據(jù)進(jìn)行查看，考察整個(gè)實(shí)驗(yàn)檢測(cè)過程的科學(xué)性，考察SOP文件是否齊全，是否具有可操作性。

現(xiàn)場(chǎng)評(píng)價(jià)：檢查組對(duì)臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行檢查后，分析其中的問題，現(xiàn)場(chǎng)進(jìn)行點(diǎn)評(píng)，包括合格的地方和存在的不足，對(duì)存在的問題提出整改意見。

5臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室存在問題及整改意見

在臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室驗(yàn)收中，可能存在的問題包括：唯一性編號(hào)未能貫穿整個(gè)檢測(cè)流程，應(yīng)貫穿在上機(jī)檢測(cè)、結(jié)果記錄中;標(biāo)本的保存方式不當(dāng)，質(zhì)量控制數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)方法不完善，影響實(shí)驗(yàn)質(zhì)量;對(duì)單個(gè)擴(kuò)增曲線的觀察不夠細(xì)致，缺乏對(duì)異常擴(kuò)增曲線的分析，存在可疑結(jié)果，應(yīng)對(duì)結(jié)果進(jìn)行復(fù)檢;在處理樣本的環(huán)節(jié)，干式恒溫裝置未配置同等的蓋板，存在爆管的風(fēng)險(xiǎn)或?qū)е職馊苣z現(xiàn)象;基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)報(bào)告的內(nèi)容和格式不夠規(guī)范，未包含樣本的性狀;報(bào)告中的檢測(cè)方法不完善;檢測(cè)參數(shù)中需要包括檢測(cè)下限。

針對(duì)檢查過程中指出的問題以及檢查組提出的意見，實(shí)驗(yàn)室做出了以下整改措施：處理樣本的環(huán)節(jié)在干式恒溫裝置上加蓋泡沫蓋板，蓋板能夠覆蓋到整個(gè)干式恒溫裝置，即可以防止污染，同時(shí)有利于保溫，降低能耗;上機(jī)檢測(cè)時(shí)，現(xiàn)有儀器擴(kuò)增編號(hào)和標(biāo)本編號(hào)對(duì)應(yīng)起來，采用唯一編號(hào)減少誤差，便于原始數(shù)據(jù)追溯;對(duì)統(tǒng)一濃度的所有質(zhì)量控制品采用嚴(yán)格的保存流程，所有質(zhì)量控制品解凍后進(jìn)行充分混勻，然后分裝保存?zhèn)溆?制定質(zhì)量控制方案，每月質(zhì)量控制次數(shù)不少于20次，每季度調(diào)整質(zhì)量控制分析方法不少于1次;在分析基因擴(kuò)增曲線時(shí)，制定規(guī)范的操作流程，設(shè)置起點(diǎn)和終點(diǎn)，手動(dòng)調(diào)節(jié)基線，起點(diǎn)默認(rèn)為第2個(gè)或第3個(gè)循環(huán)，終點(diǎn)調(diào)整到最高濃度標(biāo)本擴(kuò)增曲線起跳前第3個(gè)或第4個(gè)循環(huán);對(duì)閾值線進(jìn)行調(diào)節(jié)，調(diào)整到陰性質(zhì)量控制線的最高點(diǎn)上方，向擴(kuò)增曲線剛進(jìn)入真正擴(kuò)增的位置靠攏;對(duì)室內(nèi)質(zhì)控品的來源信息進(jìn)行詳細(xì)記錄，如果是實(shí)驗(yàn)室自制質(zhì)控品，詳細(xì)記錄質(zhì)控品的制備方法、質(zhì)控品穩(wěn)定性、不同批次質(zhì)控品的差異評(píng)價(jià)方法和合格條件;在擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)時(shí)確保擴(kuò)增孔間溫度一致，升降溫速度和熒光背景符合實(shí)驗(yàn)方案和技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)的要求。

6結(jié)語

無論是感染性疾病檢測(cè)，還是病理學(xué)診斷、藥劑個(gè)性化治療、產(chǎn)前篩查、遺傳病診斷等，基因擴(kuò)增技術(shù)在臨床中的應(yīng)用日益普遍。為了更好地保證基因擴(kuò)增技術(shù)應(yīng)用效果，加強(qiáng)基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室建設(shè)和管理水平十分重要。針對(duì)臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室現(xiàn)場(chǎng)驗(yàn)收中的不足做好整改，提高臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室水平，為基因擴(kuò)增技術(shù)發(fā)揮更充分的效能提供可靠支持。

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