季紅進(jìn)，羅麗娟，張 明，阮 華，戚晶晶

(安道麥輝豐(江蘇)有限公司，江蘇 大豐 224100)

1 前言

36%咪銅·噻霉酮懸浮劑由咪鮮胺銅鹽和噻霉酮復(fù)配而成。咪鮮胺銅鹽是一種咪唑類殺菌劑，是咪鮮胺的金屬鹽衍生化合物。咪鮮胺銅鹽主要通過(guò)抑制麥角甾醇的生物合成來(lái)發(fā)揮藥效，具有內(nèi)吸傳導(dǎo)、預(yù)防保護(hù)、治療等多重作用[1-2]。噻霉酮是一類有機(jī)雜環(huán)類噻唑林酮?dú)⒕鷦?，以其高效、低毒等特點(diǎn)填補(bǔ)了國(guó)際、國(guó)內(nèi)在該領(lǐng)域的空白，對(duì)真菌、細(xì)菌類病害有抑制毒殺作用，廣泛用于防治黃瓜霜霉病、梨黑星病、蘋(píng)果瘡痂病等多種細(xì)菌及真菌性病害。兩者復(fù)配可有效防治小麥赤霉病、水稻稻瘟病等多種病害[3-6]。

同時(shí)分析咪鮮胺銅鹽、噻霉酮的高效液相色譜方法目前尚未見(jiàn)任何公開(kāi)報(bào)道。本文采用高效液相色譜法同時(shí)分析咪鮮胺銅鹽、噻霉酮含量，方法分析速度快，分離效果好，減少溶劑使用量，降低分析成本，準(zhǔn)確度和精密度均能達(dá)到定量分析的要求，可以作為企業(yè)生產(chǎn)過(guò)程質(zhì)量控制和質(zhì)檢機(jī)構(gòu)質(zhì)量檢測(cè)的參考方法。

2 試驗(yàn)部分

2.1 試劑和溶液 乙腈(色譜純)；超純水(電阻率18.2MΩ·cm，25℃)；咪鮮胺標(biāo)樣(99.7%)；噻霉酮標(biāo)樣(98.0%)；36%咪銅·噻霉酮懸浮劑。

2.2 儀器 高效液相色譜儀：Agilent 1 260，具有可變波長(zhǎng)紫外檢測(cè)器和自動(dòng)進(jìn)樣器；Millipore超純水制備系統(tǒng)；色譜柱：Agilent Zorbax RX -C8，250mm×4.6mm，粒徑5μm。

2.3 液相色譜操作條件 流動(dòng)相：ψ(乙腈：水)=70:30；流量：1.0mL/min；柱溫：25℃；檢測(cè)波長(zhǎng)：230nm；進(jìn)樣體積：3.0μL；運(yùn)行時(shí)間：10min；保留時(shí)間：噻霉酮約2.9min，咪鮮胺約7.2min。

36%咪銅·噻霉酮懸浮劑中咪鮮胺和噻霉酮高效液相色譜圖(圖1)。

圖1 36%咪銅·噻霉酮懸浮劑中咪鮮胺和噻霉酮高效液相色譜圖

2.4 測(cè)定步驟

2.4.1 標(biāo)樣溶液的配制 稱取咪鮮胺標(biāo)樣0.05g(精確至0.000 2g)，置于50mL容量瓶中，用乙腈溶解并稀釋至刻度，搖勻。

稱取噻霉酮標(biāo)樣0.1g(精確至0.000 2g)，置于50mL容量瓶中，用乙腈溶解并稀釋至刻度，搖勻。準(zhǔn)確移取上述溶液5.0mL至50mL容量瓶中，用乙腈溶解并稀釋至刻度，搖勻。

2.4.2 試樣溶液的配制 稱取0.17g的試樣(精確至0.000 2g)，置于50mL容量瓶中，用乙腈溶解并稀釋至刻度，搖勻。

2.4.3 測(cè)定 在上述操作條件下，待儀器基線穩(wěn)定后，連續(xù)注入數(shù)針標(biāo)樣溶液，直至相鄰2針標(biāo)樣溶液的響應(yīng)值相對(duì)變化<1.5%后，按照標(biāo)樣溶液、試樣溶液、試樣溶液、標(biāo)樣溶液的順序進(jìn)行測(cè)定。

2.4.4 計(jì)算 將測(cè)得的2針試樣溶液以及試樣前后2針標(biāo)樣溶液中咪鮮胺、噻霉酮峰面積分別進(jìn)行平均。試樣中咪鮮胺銅鹽、噻霉酮的質(zhì)量分?jǐn)?shù)X1，X2(%)，按式(1)、(2)計(jì)算：

(1)

式中：A1——試樣溶液中，咪鮮胺峰面積的平均值；

A2——標(biāo)樣溶液中，咪鮮胺峰面積的平均值；

m1——試樣的質(zhì)量，g；

m2——咪鮮胺標(biāo)樣的質(zhì)量，g；

P1——標(biāo)樣中咪鮮胺的含量，%；

1.0890——咪鮮胺換算成咪鮮胺銅鹽的系數(shù)。

(2)

式中：A4—試樣溶液中，噻霉酮峰面積的平均值；

A3—標(biāo)樣溶液中，噻霉酮峰面積的平均值；

m4—試樣的質(zhì)量，g；

m3—噻霉酮標(biāo)樣的質(zhì)量，g；

P2—標(biāo)樣中噻霉酮的含量，%;

3 結(jié)果與討論

3.1 色譜條件的選擇 用乙腈作為溶劑溶解樣品，并選擇乙腈+水作為流動(dòng)相。選擇不同的流動(dòng)相比例及柱流速進(jìn)行試驗(yàn)，最終采用流動(dòng)相ψ(乙腈:水)=70:30，流量為1.0mL/min的試驗(yàn)條件，在該條件下，有效成分與雜質(zhì)能得到很好地分離，峰型對(duì)稱，峰純度高，基線平穩(wěn)，能在短時(shí)間得到滿意的分析結(jié)果，提高分析效率。

3.2 非分析物干擾 按照配方比例，將除噻霉酮以外的所有助劑混勻，作制劑空白，稱取170mg左右制劑空白，按照上述檢測(cè)方法進(jìn)行處理，并檢測(cè)，在2.9min(噻霉酮保留時(shí)間)處無(wú)響應(yīng)，證明非分析物對(duì)噻霉酮含量的測(cè)定無(wú)干擾。譜圖(圖2)。

圖2 36%咪銅·噻霉酮懸浮劑制劑空白譜圖(未加噻霉酮)

制劑空白，按照上述檢測(cè)方法進(jìn)行處理，并檢測(cè)，在7.2min(咪鮮胺保留時(shí)間)處無(wú)響應(yīng)，證明非分析物對(duì)咪鮮胺銅鹽含量的測(cè)定無(wú)干擾。譜圖(圖3)。

圖3 36%咪銅·噻霉酮懸浮劑制劑空白譜圖(未加咪鮮胺銅鹽)

3.3 特異性 將36%咪銅·噻霉酮懸浮劑樣品溶液用二極管陣列檢測(cè)器在190～400nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)進(jìn)行光譜純度的檢查，3.0min色譜峰的光譜純度為999.757，7.1min色譜峰的光譜純度為999.980。(圖4、圖5)

圖4 3.0min色譜峰(噻霉酮)的光譜純度

圖5 7.1min色譜峰(咪鮮胺)的光譜純度

3.4 分析方法的線性相關(guān)性試驗(yàn) 分別稱取35.7、45.4、49.4、58.0、67.3mg咪鮮胺標(biāo)樣，置于50mL容量瓶中，用乙腈溶解并稀釋至刻度，搖勻，在上述色譜操作條件下進(jìn)行分析。以標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度為橫坐標(biāo)(mg/L)，峰面積為縱坐標(biāo)，繪制校正曲線(表1)。測(cè)得咪鮮胺銅鹽的線性方程為y=5.528 8x+223.96，相關(guān)系數(shù)為0.999 7。結(jié)果表明咪鮮胺銅鹽在測(cè)試的質(zhì)量濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好(圖6)。

表1 咪鮮胺銅鹽的線性范圍測(cè)定結(jié)果

分別稱取70.5、87.3、103.0、115.3、131.8mg噻霉酮標(biāo)樣，置于50mL容量瓶中，用乙腈溶解并稀釋至刻度，搖勻。分別準(zhǔn)確移取上述溶液5.0mL至50mL容量瓶中，用乙腈溶解并稀釋至刻度，搖勻。在上述色譜操作條件下進(jìn)行分析。以標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度為橫坐標(biāo)(mg/L)，峰面積為縱坐標(biāo)，繪制校正曲線(表2)。測(cè)得噻霉酮的線性方程為y=48.56x+91.309，相關(guān)系數(shù)為0.999 6。結(jié)果表明噻霉酮在測(cè)試的質(zhì)量濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好(圖7)。

表2 噻霉酮的線性范圍測(cè)定結(jié)果

圖7 噻霉酮線性關(guān)系圖

3.5 分析方法的精密度試驗(yàn) 準(zhǔn)確稱取6份36%咪銅·噻霉酮懸浮劑試樣，置于50mL容量瓶中，用乙腈溶解并稀釋至刻度，搖勻，在上述色譜操作條件下進(jìn)行分析。測(cè)得咪鮮胺銅鹽的標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.13%，變異系數(shù)為0.44%，噻霉酮的標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.02%，變異系數(shù)為0.34%(表3)。

表3 分析方法的精密度試驗(yàn)結(jié)果

3.6 分析方法的準(zhǔn)確度試驗(yàn) 采用標(biāo)準(zhǔn)加入法，在制劑空白中加入一定量的咪鮮胺、噻霉酮標(biāo)準(zhǔn)品，按上述色譜條件進(jìn)行測(cè)定，回收率結(jié)果(表4)。結(jié)果表明：用該方法測(cè)定咪鮮胺銅鹽含量回收率在99.27%～99.64%之間，平均回收率為99.46%，噻霉酮含量回收率在99.85%～101.06%之間，平均回收率為100.54%。

表4 測(cè)定方法的準(zhǔn)確度

4 結(jié)論

本試驗(yàn)建立了高效液相色譜法同時(shí)檢測(cè)36%咪銅·噻霉酮懸浮劑中咪鮮胺銅鹽、噻霉酮的質(zhì)量分?jǐn)?shù)的分析方法。結(jié)果表明，咪鮮胺銅鹽、噻霉酮在測(cè)試濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，方法準(zhǔn)確度和精密度較高，具有操作簡(jiǎn)便、快速的特點(diǎn)，是產(chǎn)品質(zhì)量控制和應(yīng)用研究中較為理想的分析方法。