劉宜仲,黃守民,王瑛琨,張 煜,劉藝慶,杜飛嫦

深圳市寶安區(qū)中心血站，廣東深圳 518101

乙型肝炎病毒(HBV)簡稱乙肝病毒，為直徑22～42 nm的球狀顆粒，屬環(huán)狀雙鏈DNA病毒，主要通過血液傳播(輸血和血液制品)，是引起病毒性肝炎的主要病原體之一，可引起全身各系統(tǒng)的一系列不適癥狀，甚至可能發(fā)展為肝硬化、肝癌[1]。我國是HBV高流行地區(qū)，據(jù)中國疾病預防控制中心數(shù)據(jù)估計我國人群乙型肝炎表面抗原(HBsAg)流行率為5%～6%[2]。目前，血站基本使用2遍酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)試劑檢測HBsAg，1遍核酸試劑檢測HBV DNA。2019年4月12日中國輸血協(xié)會頒布團體標準《血液篩查反應性獻血者歸隊指南T/CSBT 002-2019》[3]，其HBV反應性獻血者的歸隊策略只適用于HBV血清學檢測單試劑反應性、核酸檢測(NAT)無反應性的獻血者，HBV DNA或核酸聯(lián)合檢測[HBV DNA、丙型肝炎病毒(HCV) RNA、人類免疫缺陷病毒(HIV) RNA]反應性的獻血者會被永久屏蔽，但是在血站實際工作中有很多HBV血清學檢測無反應性、HBV DNA或核酸聯(lián)合檢測反應性的獻血標本有待開展確認及隨訪歸隊試驗驗證其是否為NAT假反應性。本文對單項NAT反應性標本進行確認，為單項NAT反應性無償獻血人群歸隊的可能性分析提供數(shù)據(jù)支持。

1 材料與方法

1.1材料來源 2017年1月至2020年6月無償獻血標本共126 455份；2018年6月至2019年11月單項NAT反應性即HBsAg無反應性、核酸聯(lián)合檢測(HBV DNA/HCV RNA/HIV RNA)反應性標本210份。

1.2儀器與試劑 全自動加樣儀(愛康Xantus) 、全自動酶聯(lián)免疫分析儀(HAMILTON FAME24/20)、全自動核酸檢測分析儀(Grifols Panther)、全自動核酸檢測分析儀(Grifols Tigris)。ELISA試劑：HBsAg檢測試劑盒(萬泰、索靈)；HBV血清學4項標志物試劑：乙型肝炎表面抗體(HBsAb)、乙型肝炎E抗原(HBeAg)、乙型肝炎E抗體(HBeAb)、乙型肝炎核心抗體(HBcAb)檢測試劑盒，均為萬泰檢測試劑。HBsAg確認試驗試劑：HBsAg確認試劑盒(珠海麗珠)。NAT試劑：Procleix Ultrio Plus Assay核酸聯(lián)合檢測試劑盒及其核酸鑒別試劑盒，Procleix Ultrio Elite Assay核酸聯(lián)合檢測試劑盒及其核酸鑒別試劑盒。以上試劑盒均經(jīng)中國食品藥品檢定研究院檢驗合格并在有效期內(nèi)，實驗操作均嚴格執(zhí)行說明書要求。

1.3方法 對無償獻血標本用ELISA檢測HBsAg，核酸使用轉(zhuǎn)錄介導擴增技術(TMA)對標本進行HBV DNA、HCV RNA、HIV RNA 3個項目聯(lián)合檢測，對HBsAg無反應性、單項NAT反應性的部分血液標本進行HBV血清學4項標志物(HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb)及核酸鑒別檢測；對核酸鑒別無反應性的標本再進行HBsAg確認試驗。

1.4統(tǒng)計學處理 采用SPSS20.0進行數(shù)據(jù)處理及統(tǒng)計分析，計數(shù)資料以頻數(shù)或百分率表示，組間比較采用χ2檢驗，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結 果

2.1HBV篩查結果情況 2017-2020年無償獻血單項NAT平均反應率為0.43%，具體每年無償獻血核酸聯(lián)合檢測反應性標本情況見表1。

表1 每年無償獻血核酸聯(lián)合檢測反應性標本情況[n(%)]

2.2HBV血清學檢測及核酸鑒別結果 對538份單項NAT反應性標本中210份標本(2018年6月至2019年11月)進行HBV血清學4項標志物檢測，71.90%的標本HBsAb反應性，其中僅HBsAb反應性的標本占5.24%；有92.86%的標本HBcAb反應性。在這210份標本中，有75.24%(158/210)核酸鑒別為無反應性，HBV DNA反應率為24.29%(51/210)，HCV RNA反應率為0.48%(1/210)，見表2。

表2 單項NAT反應性標本的HBV血清學4項標志物檢測及核酸鑒別試驗結果

2.3HBsAg確認試驗結果 核酸鑒別為無反應性的單項NAT反應性標本中，HBsAg確認試驗無反應性的比例占99.37%(157/158)。

3 討 論

本血站ELISA與NAT同時陽性的標本占0.36%，根據(jù)《血站技術操作規(guī)程(2019版)》[4]獻血者管理規(guī)定，獻血者捐獻血液的檢測結果中，乙肝、丙肝、艾滋病任意一項中血清學檢測和NAT同時呈反應性，則永久性屏蔽，此獻血人群不適宜歸隊，需做好解釋工作。而團體標準《血液篩查反應性獻血者歸隊指南T/CSBT002-2019》[3]規(guī)定可歸隊的是單試劑HBsAg反應性、NAT無反應性的獻血者，而實際工作中有一部分HBsAg無反應性、NAT反應性的標本，本血站2017-2020年這部分標本比例為0.43%，說明這部分獻血者人數(shù)不少。本研究的210份單項NAT反應性標本中，核酸鑒別有75.24%為無反應性且HBsAg乙肝確認試驗(99.37%)幾乎為無反應性，提示核酸聯(lián)合檢測存在假陽性的可能。因此，血站對單項NAT反應性的標本進行歸隊有現(xiàn)實的研究意義。陳錦艷等[5]認為，無償獻血假反應性會使獻血者產(chǎn)生一定的負面心理影響，對這一部分獻血者可增加專業(yè)的心理干預及開展確診試驗，將兩項結果反饋給獻血者可減少其心理負擔。鑒于單項NAT反應性標本中可能存在的假反應性結果，也應對這部分獻血者進行鑒別、確認及歸隊，可給予獻血者更多的解釋及安慰，減少其心理困擾，針對單項NAT反應性標本的歸隊研究體現(xiàn)了血站人文關懷和對獻血者權益的保護。

但單項NAT反應性標本中，也存在NAT漏檢或者患者可能處于HBV窗口期感染的情況，應謹慎歸隊。程衛(wèi)芳等[6]分析28例核酸聯(lián)合檢測或HBV DNA單反應性的獻血者歸隊，兩次隨訪NAT仍出現(xiàn)至少1次反應性者占75.00%，這部分獻血者經(jīng)分析均為HBV隱匿性感染，提示單項NAT反應性標本中能重歸獻血者隊伍者并不多。楊轉(zhuǎn)笑等[7]研究ELISA檢測無反應性而NAT反應性的標本，19例無門檻自愿歸隊模式獻血者有3例HBsAg轉(zhuǎn)陽，提示無門檻自愿歸隊模式獻血者存在窗口期感染風險；26例獻血10次以上歸隊模式獻血者中88.46%歸隊成功，提示獻血次數(shù)更多，歸隊成功率越高。本研究核酸聯(lián)合檢測無反應性的標本中有92.86%的標本HBcAb反應性，提示大部分核酸聯(lián)合檢測無反應性獻血者有或有過感染的風險，因此，為了保障用血安全，應謹慎歸隊及建立更嚴謹?shù)臍w隊模式做好歸隊把關。

單項NAT反應性的獻血者中有較高比例(71.90%)出現(xiàn)HBsAb反應性，HBsAb是保護性抗體，有研究認為，獻血者的歸隊評價指標可能需要附加HBsAb(定量)檢測[8]。HBsAb單反應性獻血者的HBV DNA反應性有可能是由于獻血者打了乙肝疫苗后，HBsAb中和HBV的免疫復合物在被免疫細胞吞噬前被檢測到[9]。本研究發(fā)現(xiàn)，HBV核酸聯(lián)合檢測反應性、HBcAb無反應性、HBsAb反應性的11份標本中，其核酸鑒別HBV DNA反應的標本僅占1份，提示HBV核酸聯(lián)合檢測反應性、HBcAb無反應性、HBsAb反應性的這部分獻血者NAT假反應性的可能性較大，其未感染過HBV，同時帶有保護性抗體HBsAb，這部分人群值得進行進一步的隨訪和歸隊確認。本研究中有1份標本HBsAg、HBeAb無反應性,HBsAb、HBeAg、HBcAb反應性,有研究認為，這種結果可能是高水平HBsAg導致鉤狀效應，使HBsAg出現(xiàn)假陰性,或可能是HBsAg水平低于檢測閾值導致[10]。也有研究報道，乙肝患者在治療過程中HBsAg水平處于一個波動狀態(tài),抗病毒治療可促進乙肝患者HBsAg轉(zhuǎn)為無反應性[11]。HBsAg無反應性,HBsAb、HBeAg、HBeAb及HBcAb反應性標本在臨床檢驗上非常少見，本研究有1份此類標本，但其核酸鑒別結果為HBV DNA反應性，這可能也是高水平HBsAg導致的血清學假陰性結果，或者是接種了乙肝疫苗產(chǎn)生了抗體。有血液中心把HBcAb納入血液篩查項目，把HBcAb檢測作為獻血者歸隊策略的一項重要的檢測方法[12]。日本在獻血者篩查中增加了HBsAb和HBcAb檢測，對高滴度HBsAb低滴度HBcAb的獻血者進行歸隊，而對低滴度HBsAb高滴度HBcAb的獻血者進行屏蔽[13]。對單項NAT反應性無償獻血人群歸隊的可能性研究中增加HBV血清學4項標志物檢測，可有助于更加了解獻血者情況，以及給獻血者結果回饋解釋提供更多的數(shù)據(jù)。

本文對單項NAT反應性標本進行HBV血清學4項標志物檢測及核酸鑒別試驗，并對核酸鑒別無反應性的標本進行HBsAg確認試驗，分析核酸聯(lián)合檢測存在假反應性的可能性，綜合分析單項NAT反應性無償獻血人群歸隊的可能性，對擴大獻血隊伍和對獻血者結果回饋解釋有一定意義。但為保障用血安全，應謹慎歸隊[14]。從血清學檢測、NAT及確認試驗結果初步探討獻血者的感染狀況，仍在流行病學調(diào)查方面存在不足。下一步可對獻血者增加流行病學及臨床癥狀調(diào)查，進行多次追蹤檢測，進一步補充完善信息，提供更加全面的數(shù)據(jù)進行分析；同時可補充HBV檢測的其他方法(如化學發(fā)光等)及增加獻血者獻血次數(shù)的歸隊門檻[7]等，以建立更科學嚴謹?shù)膯雾桸AT反應性獻血者歸隊策略。