王鍍津,魏莉平

1.鄂東醫(yī)療集團(tuán)市中心醫(yī)院/湖北理工學(xué)院附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科，湖北黃石 435000；2.腎臟疾病發(fā)生與干預(yù)湖北省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，湖北黃石 435000；3.鄂東醫(yī)療集團(tuán)市婦幼保健院檢驗(yàn)科，湖北黃石 435000

珠蛋白生成障礙性貧血(簡(jiǎn)稱地貧)是由于珠蛋白基因缺陷或者點(diǎn)突變導(dǎo)致血紅蛋白的組分和含量發(fā)生改變從而導(dǎo)致不同程度溶血性貧血的一組遺傳性疾病[1]。地貧是一種常染色體隱性的單基因遺傳病。地貧分為α地貧、β地貧、δβ地貧、δ地貧，其中以β地貧和α地貧較為常見[2-3]。地貧根據(jù)臨床表型可分為輕型、中型、重型3種臨床表型。α地貧是由于16號(hào)染色體短臂末端α珠蛋白基因缺陷所致，β地貧為位于11p15.5 上的β珠蛋白基因序列發(fā)生插入、缺失及突變等所導(dǎo)致。地貧在我國廣東[4]、廣西[5]及四川地區(qū)的發(fā)病率高，具有明顯地域差異，但是隨著經(jīng)濟(jì)與社會(huì)的發(fā)展，人口流動(dòng)性的增加，不同地區(qū)疾病譜也發(fā)生重大變化[6]。地貧作為出生缺陷防控的重要組成部分，早發(fā)現(xiàn)、早干預(yù)手段也應(yīng)與時(shí)俱進(jìn)。血細(xì)胞分析參數(shù)與地貧患者或地貧基因攜帶者有極大的相關(guān)性，尤其是紅細(xì)胞計(jì)數(shù)(RBC)、紅細(xì)胞平均體積(MCV)、血紅蛋白濃度(HGB)、平均紅細(xì)胞血紅蛋白含量(MCH)、平均紅細(xì)胞血紅蛋白濃度(MCHC)、紅細(xì)胞分布寬度(RDW)等都可以為地貧的診斷提供依據(jù)。本研究以鄂東醫(yī)療集團(tuán)市中心醫(yī)院及市婦幼保健院地貧篩查患者為研究對(duì)象。詳細(xì)分析了本地區(qū)地貧基因型別及對(duì)應(yīng)的血細(xì)胞分析參數(shù)對(duì)地貧的輔助診斷效果，為本地區(qū)地貧出生缺陷防控工作提供了有效的參考數(shù)據(jù)。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取 2019 年1月至 2021 年1月在鄂東醫(yī)療集團(tuán)市中心醫(yī)院及市婦幼保健院出生的新生兒患者，經(jīng)過臨床醫(yī)師篩選出高度疑似地貧患者190例,全部進(jìn)行地貧基因及紅細(xì)胞相關(guān)參數(shù)檢測(cè)。

1.2儀器與試劑 珠海Hema 9600 PCR擴(kuò)增儀，亞能生物YN-H96型全自動(dòng)核酸分子雜交儀。深圳亞能地貧基因檢測(cè)試劑盒。希森美康醫(yī)用電子(上海)有限公司XN-9000全自動(dòng)血細(xì)胞儀及其配套試劑。

1.3地貧基因及紅細(xì)胞參數(shù)檢測(cè)

1.3.1紅細(xì)胞參數(shù)分析 使用乙二胺四乙酸(EDTA)抗凝管抽取患者2 mL外周靜脈血，XN-9000全自動(dòng)血細(xì)胞儀分析紅細(xì)胞各項(xiàng)參數(shù)。

1.3.2地貧基因檢測(cè) 使用EDTA 抗凝管抽取患者2 mL外周靜脈血，采用中山大學(xué)達(dá)安基因股份有限公司Smart-32 型自動(dòng)核酸提取儀磁珠法提取全部外周血基因組 DNA。按照深圳亞能地貧基因檢測(cè)試劑盒檢測(cè)說明書及實(shí)驗(yàn)室操作規(guī)程檢測(cè)3種缺失型α地貧(--SEA、-α3.7和-α4.2)、3種非缺失型α地貧(αCSα、αQSα和αWSα)及17種突變型β地貧(41-42M、654M、-28M、71-72M、17M、βEM、IVS-Ⅰ-1M、IVS-Ⅰ-5M、27/28M、43M、-29M、-30M、31M、-32M、14-15M、IntM和CAPM)基因。

2 結(jié) 果

2.1地貧基因檢測(cè)結(jié)果 本研究選取臨床高度懷疑地貧患者190例，經(jīng)過地貧檢測(cè)，檢出地貧基因攜帶者103例，占54.20%，其中攜帶α地貧基因59例，陽性率為57.30%，攜帶α地貧基因中--SEA/αα(東南亞型)及-α3.7/αα (右側(cè)α缺失)陽性率較高；攜帶β地貧基因42例，陽性率為40.80%，其中654M (C→T)、41-42M (-TTCT)陽性率較高。αβ復(fù)合地貧基因型1例為4.2雜合缺失并654M雜合突變；α缺失復(fù)合α突變1例，為3.7缺失復(fù)合CSM突變。所有檢測(cè)病例中未發(fā)現(xiàn)純合子。見表1。

表1 地貧基因陽性分布情況

2.2各種地貧基因攜帶者的紅細(xì)胞參數(shù)比較 為保證參考范圍及分析結(jié)果的一致性，本研究從103例地貧基因攜帶者中篩選出攜帶α地貧基因43例，攜帶β地貧基因25例，無地貧基因攜帶者22例，分別檢測(cè)RBC、紅細(xì)胞比容(HCT)、HGB、MCV、MCH、MCHC、紅細(xì)胞體積分布寬度-變異系數(shù)(RDW-CV)、網(wǎng)織紅細(xì)胞(RET)。α地貧基因攜帶者與無地貧基因攜帶者RBC、MCV、MCH、MCHC比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；β地貧基因攜帶者與無地貧基因攜帶者M(jìn)CV、MCH、MCHC、RDW-CV比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；α地貧基因攜帶者與β地貧基因攜帶者RBC、HCT、HGB、MCHC、RDW-CV、RET比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

表2 各種地貧基因攜帶者的紅細(xì)胞參數(shù)比較

項(xiàng)目nMCH(pg)MCHC(g/L)RDW-CV(%)RET(×106/L)α地貧基因攜帶者4326.45±0.53a325.10±1.52ac15.64±0.25c48.78±3.63cβ地貧基因攜帶者2527.41±1.02a331.00±2.14a20.15±0.73b67.17±7.26無地貧基因攜帶者2231.48±0.75338.00±2.1214.85±0.4252.96±6.06

3 討 論

地貧是出生缺陷防控的重點(diǎn)方向之一，只有充分了解本地區(qū)地貧發(fā)病率，才能更有針對(duì)性地做好預(yù)防措施，防止重度地貧患兒出生。地貧發(fā)病有明顯的地域特征，不同地區(qū)的基因突變頻率也存在很大差異，隨著經(jīng)濟(jì)社會(huì)的發(fā)展，人口大量流動(dòng)，各地區(qū)地貧疾病譜也發(fā)生改變。鄂東南地區(qū)地處鄂贛皖交界地區(qū)，地貧基因譜受周邊人口流動(dòng)影響很大。文獻(xiàn)[7-8]報(bào)道武漢主要以β地貧基因(69.23%)為主。江西省部分地市的基因型以α地貧基因?yàn)橹鳎渲笑恋刎氁驭力?--SEA基因型突變?yōu)橹?β地貧以IVS-Ⅱ-654、CD41-42雜合子基因型突變?yōu)橹?這跟鄂東南地區(qū)的地貧基因型較為接近[9]。

本研究選取了190例經(jīng)臨床醫(yī)師充分評(píng)估后高度疑似地貧患者進(jìn)行基因檢測(cè)，確診103例地貧基因攜帶者。其中攜帶α地貧基因基因59例，--SEA/αα(東南亞型)以及-α3.7/αα (右側(cè)α缺失) 陽性率較高。攜帶β地貧基因42例，其中654M(C→T)、41-42M(-TTCT)陽性率較高。攜帶αβ復(fù)合地貧基因型1例，為4.2雜合缺失并654M雜合突變，α缺失復(fù)合α突變1例，為3.7缺失復(fù)合CSM突變。

本研究結(jié)果顯示，α地貧基因攜帶者、β地貧基因攜帶者均可以通過MCV、MCH、MCHC與無地貧基因攜帶者相互區(qū)分。α地貧基因攜帶者及β地貧基因攜帶者紅細(xì)胞分析參數(shù)之間也存在不同，α地貧基因攜帶者與β地貧基因攜帶者RBC、HCT、HGB、MCHC、RDW-CV、RET比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，也就是以上紅細(xì)胞分析參數(shù)可以用來輔助診斷α地貧與β地貧。有研究報(bào)道紅細(xì)胞檢測(cè)參數(shù)對(duì)β地貧基因型之間也有鑒別作用[10-12],這說明要足夠重視對(duì)疑似地貧病例的血常規(guī)參數(shù)的分析，其對(duì)地貧及亞型診斷具有積極作用。本研究顯示，RET可以用來鑒別α地貧與β地貧。

地貧防治是一項(xiàng)長(zhǎng)期且艱巨的任務(wù)，疾病基因譜在不同區(qū)域、不同種族之間都處于動(dòng)態(tài)變化，因此，提高地貧的篩查技術(shù)具有重要意義。本研究為紅細(xì)胞檢測(cè)參數(shù)對(duì)地貧的診斷提供了新的思路。隨著檢測(cè)手段的不斷更新，遺傳疾病的檢測(cè)能力也在不斷提高，但是技術(shù)的更新離不開臨床經(jīng)驗(yàn)的積累，臨床醫(yī)師要足夠重視對(duì)傳統(tǒng)檢驗(yàn)項(xiàng)目的深入分析，這樣才能提高檢驗(yàn)項(xiàng)目輔助診斷疾病的能力。