胡鵬飛，解玉蘭，耿婉如，馬奎影，邵立群，于 淼，陳少青，王 羽，趙 明

（1.內(nèi)蒙古民族大學(xué)附屬醫(yī)院心內(nèi)科，內(nèi)蒙古 通遼 028007；2.內(nèi)蒙古民族大學(xué)，內(nèi)蒙古 通遼 028043；3.內(nèi)蒙古民族大學(xué)醫(yī)學(xué)院，內(nèi)蒙古 通遼 028043）

獲得性擴(kuò)張型心肌病（dilated cardiomyopathy，DCM）是心血管疾病中常見(jiàn)的疾病，其中最常見(jiàn)的是免疫性DCM（Immune dilated cardiomyopathy，IDCM）.研究發(fā)現(xiàn)病毒性心肌炎（viralmyoearditis，VMC）可演變?yōu)镮DCM［1］.蒙藥SD-3作為傳統(tǒng)蒙藥，可以調(diào)節(jié)三根、七素平衡，起到鎮(zhèn)靜、安神等作用，筆者臨床研究中發(fā)現(xiàn)其有減少房早、室早發(fā)生率同時(shí)改善心率變異性，抗心律失常具有一定效果［2］.而蒙藥SD-3對(duì)IDCM并發(fā)心律失常作用尚未見(jiàn)報(bào)道，本研究目的是明確蒙藥SD-3對(duì)IDCM并發(fā)心律失常作用及可能的機(jī)制.

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物為30只Balb/c雄性小鼠（13～15 g），購(gòu)買(mǎi)于吉林大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院動(dòng)物中心，許可證號(hào)：scxk（吉）2011-0004；CVB3（Nancy株）由吉林大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院微生物教研室贈(zèng)送，病毒原液效價(jià)為10-5TCID50/L.CX40抗體、CX43抗體、內(nèi)參抗體β-actin購(gòu)于Abcam公司.

1.2 免疫性擴(kuò)張型心肌病動(dòng)物模型構(gòu)建及給藥

小鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)后，隨機(jī)分成對(duì)照組（每組10只），IDCM組（每組10只），蒙藥SD-3組（每組10只）.IDCM組、蒙藥SD-3組腹腔內(nèi)注射0.1 mL10-5TCID50CVB3，以后每4周腹腔內(nèi)重復(fù)接種0.1 mL 10-5TCID50CVB3，對(duì)照組腹腔注射不含病毒的培養(yǎng)液，共3個(gè)月模型制備成功后，蒙藥SD-3組給予蒙藥SD-3（15 mg·kg-1），灌胃處理，一日一次；對(duì)照組和IDCM組小鼠則分別灌胃給予0.9% NaCl 0.2 mL，給藥4周.

1.3 心電圖檢查及病理取材、切片制作

給藥4周后，行心電圖檢測(cè)后高濃度CO2處死動(dòng)物，4%多聚合甲醛（500 mL）經(jīng)腔靜脈灌流心臟，固定心臟，包埋，切片后，進(jìn)行病理檢測(cè).

1.4 免疫印跡檢測(cè)相關(guān)蛋白的表達(dá)

免疫印跡實(shí)驗(yàn)檢測(cè)心肌組織中縫隙連接蛋白的表達(dá)情況.

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

應(yīng)用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS17.0對(duì)相關(guān)的數(shù)據(jù)進(jìn)行方差分析檢驗(yàn)判斷均數(shù)差異的顯著性，統(tǒng)計(jì)的數(shù)據(jù)用（±s）表示.

2 結(jié)果

2.1 小鼠的一般情況

對(duì)照組小鼠活動(dòng)自如無(wú)死亡；IDCM組小鼠在實(shí)驗(yàn)開(kāi)始第2周，出現(xiàn)明顯的活動(dòng)減少、精神不佳、毛蜷縮無(wú)光澤、進(jìn)食量減少，無(wú)死亡；蒙藥SD-3組小鼠一般狀態(tài)不如對(duì)照組小鼠，但強(qiáng)于IDCM組小鼠.

2.2 病理學(xué)改變

通過(guò)HE染色結(jié)果可知，對(duì)照組小鼠的心臟心肌組織整齊，無(wú)心肌壞死病理改變；IDCM組小鼠心肌排列紊亂，間質(zhì)出現(xiàn)水腫，心肌間隔變寬，并出現(xiàn)淋巴細(xì)胞聚集等現(xiàn)象，給予蒙藥SD-3后上面現(xiàn)象有所改善.通過(guò)Masson染色結(jié)果可知，與對(duì)照組相比，IDCM組小鼠心肌纖維化明顯，而給予蒙藥SD-3后，心肌纖維化明顯受到抑制，見(jiàn)圖1、圖2.

圖1 各組小鼠心肌HE染色（×200）Fig.1 HE staining of mouse myocardial muscle in each group(×200)

圖2 各組小鼠心肌masson染色（×200）Fig.2 Masson staining of mouse myocardial muscle in each group(×200)

2.3 各組小鼠心肌組織CX40、CX43表達(dá)變化

較對(duì)照組小鼠心肌組織中蛋白CX40（1900±280）、CX43（545±57），IDCM組小鼠心肌組織CX40（733±89）、CX43（323±46）表達(dá)減少；與IDCM組小鼠相比，蒙藥SD-3組小鼠CX40（1869±341）、CX43（538±72）表達(dá)明顯增加（P＜0.05），見(jiàn)圖3.

圖3 蒙藥蘇格木勒-3對(duì)小鼠心肌組織中CX40、CX43表達(dá)的影響Fig.3 Effect of Mongolian medicine Sugemule-3 decoction on CX40 and CX43 expression in mouse myocardium

2.4 各組小鼠心電圖變化

對(duì)照組小鼠未見(jiàn)明顯心律失常，IDCM組小鼠室早明顯增多，與IDCM組小鼠相比，蒙藥SD-3組小鼠室早明顯減少，見(jiàn)圖4.

圖4 各組小鼠心電圖變化Fig.4 Changes of mouse electrocardiograms in each group

3 討論

心肌病是由于多種原因?qū)е碌男募“l(fā)生炎癥性的改變，其中由于病毒感染繼發(fā)的免疫調(diào)節(jié)異常，即IDCM，在青少年中發(fā)病率呈逐年上漲的趨勢(shì).而目前IDCM的治病機(jī)制不明且尚未找到有效抵抗病毒的藥物.因此，探索IDCM的致病機(jī)制和尋找到有效的干預(yù)手段已成為國(guó)內(nèi)外研究的重點(diǎn)內(nèi)容.

心肌細(xì)胞之間通過(guò)閏盤(pán)連接，閏盤(pán)作為一個(gè)蛋白網(wǎng)，參與心肌電傳導(dǎo)等生理過(guò)程，當(dāng)發(fā)生心肌纖維化、心肌重構(gòu)等病理改變時(shí)，閏盤(pán)蛋白在上述病理改變后也會(huì)發(fā)生改變.閏盤(pán)中包括縫隙連接，其是由兩個(gè)六聚體在細(xì)胞間相互對(duì)接形成，負(fù)責(zé)心肌細(xì)胞之間電信號(hào)的傳導(dǎo)，心肌細(xì)胞縫隙連接蛋白由connex-in40、connexin43和connexin45構(gòu)成［3］.大量文獻(xiàn)報(bào)道，當(dāng)各種原因?qū)е耤onnexin蛋白表達(dá)減少，可誘發(fā)心律失常［4-5］.本研究團(tuán)隊(duì)也在前期實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，阿霉素心肌病并發(fā)心律失常大鼠的心肌中，通過(guò)電子顯微鏡檢測(cè)，可觀察大鼠心室肌的閏盤(pán)結(jié)構(gòu)被破壞，connexin40、connexin43及p-connexin43的表達(dá)明顯減低［6-7］，文獻(xiàn)報(bào)道，病毒性心肌炎小鼠心肌中CX 43和CX 45表達(dá)明顯減少［8］.筆者在臨床研究中發(fā)現(xiàn)蒙藥蘇格木勒-3湯有抗心律失常作用，但對(duì)IDCM心律失常作用及機(jī)制尚未清楚.本研究結(jié)果明確蒙藥SD-3可減少I(mǎi)DCM并發(fā)心律失常，其作用機(jī)制可能與降低IDCM心肌纖維水平，提高心肌組織中Cx40、Cx43表達(dá)相關(guān).