張燁琳 沈醒杭 姚冬莉

浙江省杭州市中醫(yī)院(310007)

人乳頭瘤病毒(HPV)與女性不孕癥有關(guān)[1]。持續(xù)高危HPV感染是發(fā)生宮頸癌的高危因素[2]。機體清除HPV感染細胞主要依靠T淋巴細胞亞群，并與其數(shù)量及功能有關(guān)[3]。有研究表明，高危型HPV感染會導(dǎo)致免疫功能異常，是引起女性不孕的危險因素[4]。國外有實施輔助生殖技術(shù)(ART)對妊娠結(jié)局影響的研究，但國內(nèi)少有HPV感染不孕患者采用ART對免疫功能的影響報道?；诖耍疚囊愿呶Ｐ虷PV感染不孕患者為觀察對象，探討其免疫功能狀態(tài)及采用ART的臨床結(jié)局。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2017年1月—2019年12月在本院診治的高危型HPV感染不孕患者97例(感染組)。納入標準：①有正常性生活沒有妊娠≥1年；②高危型HPV核酸檢查陽性；③有ART指征且接受治療。排除標準：①免疫系統(tǒng)、陰道炎癥、其他感染性疾病；②合并宮頸癌；③高血壓、糖尿病等慢性疾??；④近期使用過免疫制劑或抗菌藥物；⑤智力障礙、精神疾病等。同期HPV陰性不孕患者97例為對照組。患者均簽署知情同意書。本研究經(jīng)本院倫理委員會審批。

1.2 免疫功能指標檢測

采集兩組孕婦靜脈血抗凝，采用CytoFLEX流式細胞儀(美國貝克曼庫爾特公司)檢測CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+、自然殺傷細胞(NK)。

1.3 體外受精-胚胎移植(IVF-ET)

在月經(jīng)第19～21d 1.0～1.8mg注射用醋酸曲普瑞林(Ipsen Pharma Biotech)對垂體降調(diào)節(jié)，14d后150～300U重組促卵泡素β注射液(荷蘭歐加農(nóng))啟動。當有卵泡徑線≥18mm 2個卵泡，給予5000～10000U促性腺激素(鄭州博賽生物技術(shù)股份有限公司)，34～36h后取卵。取卵4～6h授精，在授精16～18h對授精觀察，2～6d對胚胎質(zhì)量評估并(選1～3個)胚胎移植。胚胎移植14d檢測血HCG，血絨毛膜促性腺激素(HCG)>25U/L，妊娠6～8周B超監(jiān)測，有妊娠囊為臨床妊娠，臨床妊娠12周前失去胚胎則早期自然流產(chǎn)。

1.4 統(tǒng)計學方法

2 結(jié)果

2.1 一般臨床資料

感染組年齡(31.3±6.1)歲(20～45歲)，不孕(4.5±1.4)年(1～7年)；體質(zhì)指數(shù)(BMI)(22.8±1.3)kg/m2(21～24kg/m2)；有孕產(chǎn)史82例(84.5%)。HPV16 39例、HPV18 31例、其他27例；合并解脲支原體(UU)感染33例，單一HPV感染64例。對照組年齡(31.7±5.0)歲(24～44歲)；不孕(4.7±1.4)年(2～8年)，BMI(22.5±1.6)kg/m2(20～25kg/m2)，有孕產(chǎn)史87例(89.7%)。兩組年齡、BMI及孕產(chǎn)史等比較無差異(P>0.05)。

2.2 免疫功能指標比較

感染組CD3+、CD4+、CD4+/CD8+、NK均低于對照組，CD8+高于對照組(均P<0.05)(表1)。

表1 兩組免疫功能指標比較

2.3 感染組不同HPV高危型感染免疫功能指標比較

感染組不同高危型HPV感染者CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+、NK比較均無差異(P>0.05)。單一感染HPV者 CD3+、CD4+、CD4+/CD8+、NK均高于合并UU感染者，CD8+低于合并UU感染者(P<0.05)。見表2。

表2 不同高危型HPV感染者免疫功能指標比較

2.4 高危型HPV感染不孕患者免疫功能與妊娠結(jié)局

輔助生殖后，高危型HPV感染不孕患者妊娠成功38例(39.2%)，妊娠成功孕婦CD3+、CD4+、CD4+/CD8+、NK均高于妊娠失敗者，CD8+低于妊娠失敗者(P<0.05)。見表3。

表3 高危型HPV感染不孕患者ART不同妊娠結(jié)局免疫功能指標比較

3 討論

HPV感染分為高危型及低危型HPV感染[6-7]。HPV持續(xù)感染會對宮頸上皮細胞造成破壞，使機體免疫應(yīng)答失去平衡。研究表明，機體的免疫功能在宮頸病變的發(fā)生以及發(fā)展中起到重要作用，高危型HPV感染會大幅增加患者由CIN發(fā)展為宮頸癌風險[8]。因此，機體的免疫功能變化在宮頸病變中的作用越來越受關(guān)注。

T淋巴細胞亞群在機體免疫調(diào)節(jié)中具有重要的維持作用，其中CD3+能夠識別特異性抗原，形成的信號傳遞到T細胞內(nèi)部[9]；CD4+能夠?qū)h類細胞因子分化，并且能夠和抗原提呈細胞進行結(jié)合作用，在免疫調(diào)節(jié)中具有較大作用[10]；CD8+能較強識別外來病毒的抗原，在感染機制中有較高檢測意義[11]；CD4+/CD8+能夠反映機體的免疫力，直觀反映感染程度，其比值下降提示T細胞免疫功能出現(xiàn)障礙，免疫系統(tǒng)發(fā)生紊亂[12]。NK細胞是殺傷靶細胞，對腫瘤細胞起到殺傷以及抑制作用，經(jīng)過淋巴因子作用后殺傷力更強[13-14]。本研究中，感染組CD3+、CD4+、CD4+/CD8+、NK均低于對照組，CD8+高于對照組，可見高危型HPV感染不孕患者的免疫功能出現(xiàn)紊亂，免疫平衡被破壞。

孫偉等[15]研究表明，高危型HPV感染以HPV16、HPV18、HPV52、HPV58感染為主。有研究表明，HPV16和HPV58感染對免疫微環(huán)境會造成影響[16]。本文高危型HPV感染以HPV16型、HPV18型為主，不同高危型HPV感染患者的CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+、NK未見差異，提示不同類型高危型HPV感染對患者免疫功能的影響未有差異。

泌尿系統(tǒng)感染最常見的致病微生物是支原體，其中以合并UU感染對不孕不育影響最大[17]。本研究高危型HPV感染患者合并UU感染占34.0%，單一高危高危型HPV感染患者CD3+、CD4+、CD4+/CD8+、NK高于合并UU感染，CD8+低于合并UU感染。表明合并UU感染患者機體免疫能力更低。由于免疫系統(tǒng)難以將體內(nèi)HPV自行清除，使得患者輔助生殖時易造成著床失敗，導(dǎo)致妊娠率降低。流產(chǎn)和免疫因素有關(guān)。本研究高危型HPV感染不孕患者輔助生殖的妊娠成功者CD3+、CD4+、CD4+/CD8+、NK均高于妊娠失敗患者，CD8+低于妊娠失敗患者，表明ART治療妊娠不良結(jié)局與患者免疫功能紊亂可能有關(guān)。

綜上所述，高危型HPV感染不孕患者存在免疫功能紊亂，且合并UU感染患者免疫功能更差，行ART后妊娠失敗與免疫功能紊亂有一定關(guān)系。但本文研究樣本量較少，仍有待大樣本檢驗研究結(jié)論。