林文君，呂書影，曲保全，王英，崔增慧，陳磊，楊頂權(quán)

[1.北京中醫(yī)藥大學(xué)，北京 100029；2.中日友好醫(yī)院 皮膚病與性病科，北京 100029；3.貝殼派創(chuàng)新科技（深圳）有限公司，廣東 深圳 518101]

脂溢性皮炎是皮膚科常見(jiàn)的、以頭面部為主要好發(fā)部位的一種多發(fā)性慢性炎癥性疾病[1]，常見(jiàn)于青壯年或乳兒期。累及頭皮的典型癥狀為紅斑基礎(chǔ)上覆有油膩性鱗屑，同時(shí)伴有瘙癢和頭皮異味，嚴(yán)重時(shí)伴有糜爛、滲出、毛囊炎、脫發(fā)等癥狀，給患者的形象、生活和心理造成一定影響[2]。糠秕馬拉色菌在脂溢性皮炎發(fā)生過(guò)程中起重要作用。本研究進(jìn)行體外抑菌實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)研究，并通過(guò)臨床觀察探討鈣基抗菌多肽復(fù)合物凝膠對(duì)頭皮脂溢性皮炎的治療效果，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 菌株與菌液制備

糠秕馬拉色菌ATCC44344 購(gòu)自上海保藏生物技術(shù)中心。用接種鉤挑取適量菌液，加于無(wú)菌生理鹽水中攪拌成懸液，不斷調(diào)整菌液使用濃度，直至達(dá)到5×105CFU/ml[3]。

1.2 試劑與藥物

鈣基抗菌多肽復(fù)合物凝膠[海得寶凱普斯泰冷敷凝膠，貝殼派創(chuàng)新科技（深圳）有限公司，魯濟(jì)械備20190008 號(hào)，25 g/瓶]，2%酮康唑洗液（采樂(lè)洗液，西安楊森制藥公司，國(guó)藥準(zhǔn)字：H20000588，50 ml/瓶）。

1.3 試管藥基法

①制備1 L 沙氏培養(yǎng)基，并滅菌備用。融化培養(yǎng)基，保持恒溫，使其一直處于融化狀態(tài)。②制備藥樣培養(yǎng)基，設(shè)為陽(yáng)性對(duì)照組。將不同規(guī)格的藥樣（鈣基抗菌多肽復(fù)合物凝膠分別為2.0 mg、1.6 mg、1.2 mg、0.8 mg、0.4 mg；2%酮康唑洗液分別為2.0 μg、1.6 μg、1.2 μg、0.8 μg、0.4 μg）分別與1 ml 沙氏培養(yǎng)基均勻融合，得到10 組不同濃度的藥樣培養(yǎng)基：鈣基抗菌多肽復(fù)合物凝膠類培養(yǎng)基終濃度為0.5 mg/ml、0.4 mg/ml、0.3 mg/ml、0.2 mg/ml、0.1 mg/ml；2%酮康唑洗液類培養(yǎng)基終濃度為0.5 μg/ml、0.4 μg/ml、0.3 μg/ml、0.2 μg/ml、0.1 μg/ml。對(duì)以上10 個(gè)藥樣培養(yǎng)基分開儲(chǔ)存，每個(gè)試管4 ml，并標(biāo)記。③制備普通培養(yǎng)基，設(shè)為陰性對(duì)照組。取5 個(gè)培養(yǎng)基加入等體積的蒸餾水，將其做成普通50%培養(yǎng)基。④加菌培養(yǎng)。取等容量（50 μl）糠秕馬拉色菌菌液加入藥樣培養(yǎng)基與普通培養(yǎng)基試管中，放置于真菌培養(yǎng)箱內(nèi)，32℃條件下培養(yǎng)，2 d 觀察1 次，連續(xù)觀察10 d。⑤結(jié)果判定。培養(yǎng)結(jié)束，若在陽(yáng)性對(duì)照組試管中未觀察到移種過(guò)后糠秕馬拉色菌的生長(zhǎng)，則說(shuō)明藥物對(duì)該菌種存在抑制作用；若陽(yáng)性對(duì)照組與陰性對(duì)照組比較，糠秕馬拉色菌的生長(zhǎng)情況相似，則說(shuō)明藥物對(duì)該菌種無(wú)抑制作用。根據(jù)兩藥各自5 管中3 管以上菌種的生長(zhǎng)情況來(lái)判斷抑菌情況。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3 次，取3 次結(jié)果的平均值[4]。實(shí)驗(yàn)部分過(guò)程見(jiàn)圖1、2。

圖1 鈣基抗菌多肽復(fù)合物凝膠水溶液體外培養(yǎng)

1.4 一般臨床資料

選取2019年3月—2019年10月北京中日友好醫(yī)院皮膚病與性病科門診收治的典型頭皮脂溢性皮炎患者60 例。根據(jù)隨機(jī)雙盲實(shí)驗(yàn)規(guī)則，將納入的患者隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組，每組30 例。最終共完成50 例：實(shí)驗(yàn)期間，實(shí)驗(yàn)組3 例脫落，有效27 例；對(duì)照組7 例脫落，有效23 例。所有納入患者的性別、年齡、病程比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P?0.05），具有可比性。納入標(biāo)準(zhǔn)：①年齡5～70 歲；性別不限；②參照《中國(guó)臨床皮膚病學(xué)（第二版上冊(cè)）》[5]頭面部脂溢性皮炎的診斷標(biāo)準(zhǔn)（頭皮有片狀灰白色鱗屑，基底紅斑、瘙癢，油脂溢出明顯或有油膩性鱗屑性斑片），經(jīng)真菌鏡檢查結(jié)合臨床相關(guān)癥狀確診為頭皮脂溢性皮炎；③能按照要求使用鈣基抗菌多肽復(fù)合物凝膠或其基質(zhì)，并接受定期隨訪、簽訂知情同意書者；④3 個(gè)月內(nèi)沒(méi)有進(jìn)行過(guò)系統(tǒng)治療，1 個(gè)月內(nèi)未進(jìn)行過(guò)局部治療；⑤沒(méi)有嚴(yán)重的系統(tǒng)性疾病和精神疾病。排除標(biāo)準(zhǔn)：①對(duì)鈣制劑過(guò)敏者；②妊娠期婦女；③研究人員認(rèn)為不適合參加該臨床研究的其他情況。

圖2 鈣基抗菌多肽復(fù)合物凝膠水溶液紙片擴(kuò)散抑菌實(shí)驗(yàn)

1.5 治療方法

實(shí)驗(yàn)組使用鈣基抗菌多肽復(fù)合物凝膠，對(duì)照組使用鈣基抗菌多肽復(fù)合物凝膠的基質(zhì)（成分有水、甘油、羥乙基纖維素、薄荷醇，具有基礎(chǔ)保濕作用）。兩組患者外用相應(yīng)藥物涂抹于皮膚病變部位，治療4 周，3 次/d。觀察所有患者治療前和治療后的紅斑、脫屑、油脂和瘙癢情況，對(duì)各項(xiàng)指標(biāo)進(jìn)行評(píng)分，并記錄不良事件。選擇皮損最明顯處為靶區(qū)，采集治療前與治療4 周后的毛發(fā)鏡照片，進(jìn)行真菌直接免疫熒光檢測(cè)。根據(jù)靶區(qū)癥狀和真菌直接免疫熒光檢測(cè)結(jié)果，對(duì)整體的臨床療效進(jìn)行評(píng)估。

1.6 療效評(píng)價(jià)

1.6.1 癥狀評(píng)分參照《中藥新藥臨床研究指導(dǎo)原則》對(duì)患者皮損靶區(qū)的紅斑、鱗屑、油脂、瘙癢的癥狀進(jìn)行評(píng)分[6]。紅斑評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)：沒(méi)有癥狀的判定為0 分；有淡褐色紅斑的為輕度，判定為1 分；有淡紅色紅斑的為中度，判定為2 分；有鮮紅色紅斑為重度，判定為3 分。鱗屑評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)：沒(méi)有鱗屑記0 分；有散在鱗屑為輕度，記1 分；有較多且密集鱗屑但數(shù)量可計(jì)的為中度，記2 分；有非常密集且融合成片難以計(jì)數(shù)的鱗屑為重度，記3 分。油脂評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)：沒(méi)有油脂記0 分；頭發(fā)尚有飄逸感但有輕度油漬的為輕度，記1 分；頭發(fā)有明顯油光感為中度油漬記2 分；發(fā)根黏連固定成型的為重度油漬，記3 分。瘙癢評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)：沒(méi)有瘙癢記0 分；可以正常生活但有輕度瘙癢的記1 分；瘙癢對(duì)生活質(zhì)量造成一定的影響但尚可忍耐接受的為中度瘙癢，記2 分；瘙癢導(dǎo)致日常工作與生活極其困難且難以忍受的為重度瘙癢，記3 分。

1.6.2 臨床療效評(píng)價(jià)按照尼莫地平法，癥狀評(píng)分減少率=（治療前評(píng)分-治療后評(píng)分）/治療前評(píng)分×100%。根據(jù)《中醫(yī)病癥診斷療效標(biāo)準(zhǔn)（2017 版）》[7]制定臨床療效的判定方法：痊愈，癥狀評(píng)分減少≥95%；顯效，癥狀評(píng)分減少70%～<95%；有效，癥狀評(píng)分減少30%～<70%；無(wú)效，癥狀評(píng)分減少<30%。臨床總有效率=痊愈率+顯效率+有效率。

1.6.3 不良反應(yīng)用藥后，密切監(jiān)測(cè)并仔細(xì)詢問(wèn)患者用藥部位及全身是否出現(xiàn)皮損處的紅腫、脫發(fā)、局部刺癢、疼痛及灼熱感，甚至全身過(guò)敏反應(yīng)等，記錄并比較兩組不良事件的發(fā)生率。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

數(shù)據(jù)分析采用SPSS 17.0 統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，比較用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以例（%）表示，比較用χ2檢驗(yàn)；等級(jí)資料用等級(jí)表示，比較采用秩和檢驗(yàn)。P<0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 體外抑菌實(shí)驗(yàn)

遵循藥物的最低抑菌濃度（minimum inhibitory concentration,MIC）判定原則，即以肉眼觀察，藥物最低濃度管無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)；通過(guò)對(duì)兩種藥物的多濃度梯度抑菌實(shí)驗(yàn)得出兩者的MIC 結(jié)果：鈣基抗菌多肽復(fù)合物凝膠對(duì)糠秕馬拉色菌的MIC 是0.3 mg/ml，2%酮康唑洗液的MIC 為0.2 μg/ml。

2.2 兩組治療前后癥狀評(píng)分差值的比較

兩組患者治療前后各癥狀評(píng)分差值的比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見(jiàn)表1。治療4 周時(shí)，實(shí)驗(yàn)組鱗屑（見(jiàn)圖3A、B）、紅斑（見(jiàn)圖3C、D）、油脂（見(jiàn)圖3E、F）的改善直觀可視。

表1 兩組患者治療前后各癥狀評(píng)分差值的比較（±s>）

表1 兩組患者治療前后各癥狀評(píng)分差值的比較（±s>）

組別實(shí)驗(yàn)組對(duì)照組t 值P 值紅斑1.15±0.51 0.45±0.65 4.231 0.000鱗屑1.20±0.54 0.49±0.50 4.771 0.000油脂1.15±0.50 0.52±0.57 4.139 0.000瘙癢1.25±0.52 0.55±0.48 4.917 0.000

圖3 實(shí)驗(yàn)組各癥狀治療前后比較（毛發(fā)鏡×40）

2.3 兩組真菌抑制率比較

兩組患者治療前真菌鏡檢結(jié)果均顯示陽(yáng)性，治療4 周時(shí)，實(shí)驗(yàn)組的真菌鏡檢陰性率為66.67%（18 例），對(duì)照組的真菌鏡檢陰性率為17.19%（4 例），兩組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=12.239，P=0.000）。實(shí)驗(yàn)組患者真菌直接免疫熒光檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)圖4。

圖4 實(shí)驗(yàn)組患者真菌直接免疫熒光檢測(cè)圖（×40）

2.4 兩組臨床療效比較

治療4 周時(shí)，實(shí)驗(yàn)組臨床治療有效率為85.18%，對(duì)照組臨床治療有效率為52.17%。兩組臨床治療有效率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）（見(jiàn)表2）。治療過(guò)程中兩組均無(wú)不良反應(yīng)。

表2 兩組臨床療效比較 例（%）

3 討論

脂溢性皮炎病因復(fù)雜，目前公認(rèn)的主要原因是皮脂分泌過(guò)多，糠秕馬拉色菌增殖過(guò)度，進(jìn)而誘發(fā)局部炎癥[8-9]。治療以抗真菌藥物為主?？诜屯庥弥苿┢鹦Э?，但停藥后復(fù)發(fā)率高，長(zhǎng)期使用有一定的副作用[2，10]。因此，尋找治療脂溢性皮炎安全、有效的方法成為近年來(lái)的研究熱點(diǎn)。

鈣基抗菌多肽復(fù)合物凝膠主要成分為凱普斯泰，由多種抗菌多肽和活性鈣通過(guò)核心包埋技術(shù)結(jié)合在一起。其中，抗菌多肽主要在生物體抵御外界侵襲時(shí)產(chǎn)生，在對(duì)抗多種病原微生物的侵入時(shí)顯示出良好的抗菌活性；不同抗菌譜抗菌多肽的組合方式使得凱普斯泰凝膠具備優(yōu)良的廣譜抗菌效果[11-16]?；钚遭}是由海洋貝類經(jīng)改性而成的天然鈣，其在收縮毛細(xì)血管、增強(qiáng)毛細(xì)血管壁致密性及降低毛細(xì)血管通透性等方面有著良好的臨床效果，能夠很好地保護(hù)細(xì)胞膜，抑制炎癥介質(zhì)釋放，減少滲出，具有良好的消腫、抗炎、抗過(guò)敏的作用[17-19]。這使凱普斯泰凝膠對(duì)濕疹類皮炎的紅斑、水腫和瘙癢具有良好的治療作用。另外，凱普斯泰凝膠產(chǎn)品使用的原材料均取自天然，無(wú)激素、抗生素或防腐劑，易于清洗，藥性溫和、無(wú)刺激性，不損傷幼嫩皮膚，適于孕婦、嬰幼兒和肌膚敏感人群長(zhǎng)期使用[20]。

真菌和細(xì)菌是濕疹和皮炎的重要致病因素[21-23]。本研究的體外抑菌實(shí)驗(yàn)顯示，鈣基抗菌多肽復(fù)合物凝膠對(duì)糠秕馬拉色菌具有抑制性，最小抑菌濃度為0.3 mg/ml，抑菌效果與2%酮康唑洗劑相似。此外，有研究[21]發(fā)現(xiàn)，鈣基抗菌多肽復(fù)合物凝膠也能夠抑制金黃色葡萄球菌、大腸桿菌和白色念珠菌的活性；根據(jù)本研究臨床研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，實(shí)驗(yàn)組真菌的抑制率優(yōu)于對(duì)照組，且實(shí)驗(yàn)組治療前后紅斑、鱗屑、油脂、瘙癢癥狀評(píng)分的差值較對(duì)照組大，證明實(shí)驗(yàn)組治療效果更佳。結(jié)合本研究?jī)煞N結(jié)果可以看出，鈣基抗菌多肽復(fù)合物凝膠具有良好的抑制糠秕馬拉色菌的作用，對(duì)頭皮脂溢性皮炎的主要癥狀有效，發(fā)揮抗炎抑菌作用。本研究過(guò)程中，兩組患者均無(wú)任何不良反應(yīng)，證明治療方法安全可靠。

綜上所述，鈣基抗菌多肽復(fù)合物凝膠是治療脂溢性皮炎安全有效的輔助方法之一，具有良好的抗炎抑菌效果，這也為其輔助治療其他常見(jiàn)的濕疹類皮炎提供了一定的理論支持。