吳海嚴(yán)，張帆

(南京醫(yī)科大學(xué)附屬淮安第一醫(yī)院，1.燒傷整形科；2.腫瘤內(nèi)科，江蘇 淮安 223001)

皮膚鱗狀細(xì)胞癌(cutaneous squamous cell carcinoma，CSCC)是臨床第二常見(jiàn)的非黑色素皮膚腫瘤，發(fā)病率僅次于基底細(xì)胞癌，轉(zhuǎn)移率及病死率均較高[1]。目前，CSCC治療的主要方法為顯微外科手術(shù)及標(biāo)準(zhǔn)手術(shù)切除，亦可選擇放化療及進(jìn)一步淋巴結(jié)切除[2]。程序性死亡受體-1(programmed cell death protein 1，PD-1)是一種Ⅰ型跨膜糖蛋白，在活化的T細(xì)胞、B細(xì)胞、單核細(xì)胞等細(xì)胞中均有表達(dá)。程序性死亡配體-1(programmed cell death 1 ligand 1，PD-L1)可識(shí)別PD-1并與之結(jié)合，PD-1/PD-L1通路的激活可導(dǎo)致免疫抑制性腫瘤微環(huán)境形成，進(jìn)而使腫瘤細(xì)胞逃避免疫殺傷[3]。膜聯(lián)蛋白A2(annexin A2)是一類(lèi)廣泛存在于真核細(xì)胞的鈣磷脂結(jié)合蛋白。研究[4]認(rèn)為，Annexin A2與腫瘤大小、病情嚴(yán)重程度、是否轉(zhuǎn)移等密切相關(guān)。本文探討CSCC患者血清PD-L1、Annexin A2表達(dá)及其臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2016年6月至2020年6月于南京醫(yī)科大學(xué)附屬淮安第一醫(yī)院收治的81例CSCC患者為研究組，40例皮膚良性病變患者為對(duì)照組。研究組中，男性49例，女性32例；平均年齡(49.59±9.46)歲。對(duì)照組中，男性26例，女性14例；平均年齡(47.05±9.12)歲；銀屑病18例，帶狀皰疹9例，濕疹8例，紅皮病5例。本研究嚴(yán)格遵循赫爾辛基宣言。兩組患者性別、年齡等一般資料比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)經(jīng)組織活檢、全身皮膚檢查、MRI檢查，符合CSCC診斷標(biāo)準(zhǔn)者[5]；(2)年齡>18歲者；(3)患者及家屬充分知情同意，簽署知情同意書(shū)。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)臨床資料如一般資料、病歷資料缺失者；(2)入院前進(jìn)行抗腫瘤治療者；(3)合并全身其他惡性腫瘤者。

1.2 方法

1.2.1 臨床病歷收集 包括患者性別、年齡、是否存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤部位、大小及分化程度、預(yù)后等。

1.2.2 CSCC預(yù)后評(píng)估 參照Dougherty療效評(píng)估標(biāo)準(zhǔn)[6]進(jìn)行。完全反應(yīng)(CR)：患者病變消失，僅殘留色素沉著或色素減退，組織學(xué)檢查無(wú)異常發(fā)現(xiàn)；部分反應(yīng)(PR)：>50%腫瘤組織被殺死；無(wú)效(NR)：腫瘤組織縮小<50%或無(wú)改變。CR+PR視為預(yù)后有效。

1.2.3 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn) 采集患者治療前清晨空腹外周靜脈血，離心處理后進(jìn)行檢測(cè)檢測(cè)患者血清PD-L1(貨號(hào)：FNab06281，武漢菲恩生物科技有限公司)和Annexin A2(貨號(hào)：FNab00431，武漢菲恩生物科技有限公司)水平。PD-L1和Annexin A2標(biāo)準(zhǔn)品稀釋分別制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，100μL血清樣本添加到96孔板中，室溫孵育2 h，清洗液洗兩次，加入A試劑100 μL，37 ℃孵育60 min，再加入B試劑100 μL，37 ℃孵育30 min，然后加入底物溶液90 μL，37 ℃孵育25 min，最后每孔添加終止液50 μL，酶標(biāo)儀讀取450 nm處吸光度值，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線分別計(jì)算血清PD-L1和Annexin A2的濃度。

1.3 觀察指標(biāo)

(1)血清PD-L1及 Annexin A2表達(dá)水平；(2)PD-L1及 Annexin A2在CSCC與皮膚良性病變鑒別診斷中的價(jià)值；(3)PD-L1及 Annexin A2表達(dá)水平與CSCC患者臨床病理特征及預(yù)后的相關(guān)性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 兩組患者血清PD-L1及Annexin A2表達(dá)水平比較

研究組患者血清PD-L1、Annexin A2表達(dá)水平高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表1。

表1 兩組患者血清PD-L1及Annexin A2表達(dá)比較

2.2 血清PD-L1及Annexin A2在CSCC中的診斷效能

ROC曲線分析顯示，血清PD-L1、Annexin A2診斷CSCC的敏感性分別為85.00%、92.50%，特異性分別為87.65%、58.02%。見(jiàn)表2及圖1。

表2 血清PD-L1、Annexin A2在CSCC中的診斷效能

2.3 不同臨床病理特征及預(yù)后CSCC患者血清PD-L1及Annexin A2水平比較

血清PD-L1、Annexin A2水平與CSCC患者性別、年齡、腫瘤部位差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，與CSCC患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、分化程度、腫瘤大小、預(yù)后差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表3。

表3 不同臨床病理特征及預(yù)后CSCC患者血清PD-L1及Annexin A2水平比較

2.4 血清PD-L1及Annexin A2水平與CSCC患者臨床病理特征及預(yù)后的相關(guān)性

相關(guān)分析顯示，CSCC患者血清PD-L1、Annexin A2水平與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、分化程度、腫瘤大小、預(yù)后呈正相關(guān)(P<0.05)。見(jiàn)表4。

表4 血清PD-L1及Annexin A2水平與CSCC患者臨床病理特征及預(yù)后情況的相關(guān)性

3 討論

CSCC是一種起源于表皮或附屬角質(zhì)形成細(xì)胞的惡性腫瘤，是我國(guó)發(fā)病率最高的非黑色素皮膚腫瘤，患者表現(xiàn)為局部皮膚呈菜花狀，甚至出現(xiàn)潰瘍及惡臭[7]。CSCC發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，與之相關(guān)的基因通路尚在不斷研究中。目前。治療CSCC的主要方法是手術(shù)，在徹底切除患者病灶的同時(shí)兼顧患者術(shù)后創(chuàng)面的修復(fù)，以期最大程度保證患者局部外觀及功能的保留和恢復(fù)，對(duì)于皮損數(shù)量較多、面積較大且發(fā)生于特殊部位如外陰而無(wú)法實(shí)施手術(shù)治療的患者，則予以藥物治療。

PD-L1屬于B7家族，與其他B7家族分子的不同之處在于PD-L1具備負(fù)向調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答的作用[8]。已有研究[9]證實(shí)，PD-1與PD-L1結(jié)合后，不僅可調(diào)控淋巴細(xì)胞功能，還可影響T細(xì)胞分化，抑制炎性介質(zhì)釋放，進(jìn)而促進(jìn)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞生成，借此發(fā)揮調(diào)控免疫應(yīng)答、建立免疫耐受等作用。Annexin A2廣泛表達(dá)于人體的內(nèi)皮細(xì)胞、單核/巨噬細(xì)胞、成骨細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞中，參與纖維蛋白溶解、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、細(xì)胞遷移等各種生理過(guò)程，且在腫瘤細(xì)胞呈高表達(dá)狀態(tài)[10]。邱禹杉等[11]研究認(rèn)為，Annexin A2可通過(guò)多種途徑影響腫瘤細(xì)胞的增殖、凋亡、轉(zhuǎn)移、侵襲、新血管生成等過(guò)程。本研究結(jié)果顯示，研究組患者血清PD-L1、Annexin A2表達(dá)水平高于對(duì)照組(P<0.05)，原因可能是血清PD-L1存在與細(xì)胞膜表面分子相似的生物學(xué)功能，可參與CSCC患者疾病的發(fā)生及發(fā)展，而皮膚良性病變患者的免疫反應(yīng)不如CSCC患者強(qiáng)烈；Annexin A2水平的上升則可能與相關(guān)指標(biāo)的異常表達(dá)，通過(guò)影響血管內(nèi)皮細(xì)胞而促使外周血中的Annexin A2水平上升有關(guān)。ROC曲線分析顯示，血清PD-L1、Annexin A2對(duì)CSCC的診斷敏感性分別為85.00%、92.50%，特異性分別為87.65%、58.02%，說(shuō)明早期進(jìn)行血清PD-L1、Annexin A2水平檢測(cè)對(duì)區(qū)分CSCC患者與皮膚良性病變患者有一定臨床價(jià)值。

相關(guān)分析顯示，CSCC患者血清PD-L1、Annexin A2與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、分化程度、腫瘤大小、預(yù)后情況水平呈正相關(guān)(P<0.05)，說(shuō)明血清PD-L1、Annexin A2對(duì)預(yù)測(cè)CSCC患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、分化程度、腫瘤大小及預(yù)后情況均有一定價(jià)值?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究[12]認(rèn)為，在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中常伴隨上皮細(xì)胞間質(zhì)化發(fā)生，而上皮細(xì)胞間質(zhì)化的加速對(duì)腫瘤的免疫逃避形成及惡性轉(zhuǎn)變有促進(jìn)作用。在本研究中，血清PD-L1與腫瘤大小存在正相關(guān)性的原因可能與PD-L1的過(guò)表達(dá)可促進(jìn)上皮細(xì)胞間質(zhì)化發(fā)生，進(jìn)而促進(jìn)腫瘤生成有關(guān)。PD-L1可用于預(yù)測(cè)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況，原因可能是PD-L1可通過(guò)抑制T淋巴細(xì)胞的增殖及存貨，誘導(dǎo)抗原特異性T細(xì)胞凋亡，進(jìn)而促使腫瘤細(xì)胞發(fā)生免疫逃逸，使腫瘤發(fā)生浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移。此外，血清Annexin A2水平與CSCC患者腫瘤大小正相關(guān)的原因可能是Annexin A2與CSCC患者機(jī)體內(nèi)細(xì)胞因子產(chǎn)生相互作用，可調(diào)節(jié)纖溶亢進(jìn)、組織重塑，對(duì)腫瘤細(xì)胞粘附有促進(jìn)作用，且高Annexin A2水平可促進(jìn)腫瘤新血管生成[13]。楊世權(quán)等[14]研究認(rèn)為，Annexin A2表達(dá)水平與組織病理分級(jí)存在相關(guān)性，中低分化的頭頸部鱗狀細(xì)胞癌患者的Annexin A2表達(dá)呈現(xiàn)抑制，借此推測(cè)Annexin A2可通過(guò)影響患者上皮組織的生長(zhǎng)重塑進(jìn)而影響腫瘤的發(fā)生、生長(zhǎng)及轉(zhuǎn)移。因此，高Annexin A2水平患者的預(yù)后受Annexin A2影響而不佳。

綜上所述，檢測(cè)CSCC患者的血清PD-L1、Annexin A2對(duì)患者疾病診斷有一定作用，且二者與CSCC的部分臨床病理特征及預(yù)后均存在相關(guān)性，可能對(duì)臨床預(yù)測(cè)患者預(yù)后結(jié)局有一定幫助。