徐剛，熊英，李健雄，施勇，周珺，龔甜

（江西省疾病預(yù)防控制中心，江西 南昌 330029）

冠狀病毒屬于巢狀病毒目、冠狀病毒科、冠狀病毒屬，因電鏡下病毒顆粒形似王冠而得名。 冠狀病毒是病毒界的一個大家族，能感染從哺乳動物到禽類等一大批脊椎動物。 根據(jù)國際病毒分類學(xué)委員會的最新規(guī)定，冠狀病毒分為4 組：α、β、γ 和δ，分別對應(yīng)1 組、2 組和3 組冠狀病毒和新假定的一個屬。 α 冠狀病毒組包括人冠狀病毒229E(HCoV-229E)、NL63(HCoV-NL63)以及一些動物冠狀病毒如豬傳染性胃腸炎病毒(TGEV)和犬冠狀病毒(CCoV) 等；β 冠狀病毒包括人冠狀病毒OC43(HCoV-OC43)、SARS、HKU1(HCoV-HKU1)、MERSCoV[1]以及2019年12月在武漢首次發(fā)現(xiàn)的新型冠狀病毒[2-4]（2019-nCoV），還包括鼠肝炎病毒(MHV)和牛冠狀病毒(BCoV)等動物冠狀病毒；γ 冠狀病毒組包括禽傳染性支氣管炎病毒(IBV)和火雞冠狀病毒(TCoV)等[5]。

冠狀病毒是一類具有包膜、 基因組為線性單股正鏈的RNA 病毒。 基因組全長約27～32kb，是目前已知RNA 病毒中基因組最大的病毒[6，7]。 冠狀病毒的感染一般引起輕微的感冒癥狀，但是人感染冠狀病毒可能會引起嚴(yán)重的疾病，嚴(yán)重急性呼吸綜合征可導(dǎo)致死亡。 所有新冠病毒患者均發(fā)展為新型冠狀病毒感染的肺炎(novel coronavirus pneumonia，NCP)[8]，其中約一半發(fā)生呼吸困難, 三分之一的患者被送入ICU 進(jìn)行治療與SARS-CoV 的10%致死率[9]和MERS-CoV 的37%致死率[10]相比,2019-nCoV 現(xiàn)在是冠狀病毒家族中的第三致命病毒[11]。

本研究探討2010-2018年江西省冠狀病毒感染情況, 為江西省內(nèi)冠狀病毒研究提供基線數(shù)據(jù)，發(fā)現(xiàn)冠狀病毒感染的流行特征。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來源 收集江西省兒童醫(yī)院和南昌市高新開發(fā)區(qū)醫(yī)院2010年至2018年有呼吸道感染癥狀的病例標(biāo)本。 標(biāo)本類型包括咽拭子，下呼吸道灌洗液等。 采樣后冷藏運(yùn)送到江西省疾病預(yù)防控制中心疾病檢驗(yàn)所實(shí)驗(yàn)室，-80℃冰箱保存。

1.2 冠狀病毒檢測與分型

1.2.1 核酸提取 樣本使用Qiagen Cador Pathogen 96 QIAcubeHAT kit 試劑，經(jīng)QIAxtractor 自動核酸純化工作站提取核酸。

1.2.2 冠狀病毒檢測與分型 核酸使用TAKARA公司PrimeScriptTM One Step RT-PCR kit Ver.2 試劑； 陽性的樣本使用TAKARA 公司One Step PrimeScriptTM RT-PCR kit(Perfect Real Time)試劑檢測分型，按說明書操作，引物,見表1。

表1 冠狀病毒引物序列

1.2.3 其他主要呼吸道病毒的檢測 HCoV 陽性樣本同時檢測人博卡病毒HBoV、人流感病毒Flu、人腺病毒HAdV、人副流感病毒PIV、人呼吸道合胞病毒RSV、 人偏肺病毒HMPV 和人鼻病毒HRV 7種呼吸道病毒感染情況。

1.3 數(shù)據(jù)整理與分析 收集標(biāo)本調(diào)查表信息和實(shí)驗(yàn)結(jié)果，使用EXCEL 和SPSS13.0 軟件分析數(shù)據(jù)。

2 結(jié)果

2.1 核酸檢測2010-2018年期間共收集有呼吸道感染癥狀病例3744 份咽拭子、支氣管肺泡灌洗液等標(biāo)本，檢出147 份HCoV 陽性，陽性率為3.93%，其中HKU1 陽性率1.12%（42/3744）；229E 陽性率0.61%（23/3744）；OC43 陽 性 率1.68%（63/3744）；NL63 陽 性 率0.91% （19/3744）。 HKU1、229E、OC43、NL63 陽性構(gòu)成比分別為28.57%、15.65%、42.86%、12.93%。 最高的OC43,其次是HKU1,229E和NL63 都較少，構(gòu)成比,見圖1。

圖1 冠狀病毒核酸檢測分型構(gòu)成比

2.2 HCoV 感染病例臨床資料分析 不同型別HCoV 病例具有相似的臨床特征，住院和發(fā)熱比例超過半數(shù)，超過85%出現(xiàn)咳嗽、超過33%有咳痰和流涕癥狀，部分出現(xiàn)咽喉痛和呼吸急促癥狀，極少數(shù)出現(xiàn)腹瀉癥狀，病例超過76%一周內(nèi)使用抗生素。

不同型別HCoV 病例呈現(xiàn)不同臨床特征，HKU1 和229E 陽性病例發(fā)熱多為高熱；229E 陽性病例發(fā)熱比例超過73%，使用抗生素比例和住院率均最高，癥狀最重；NL63 陽性病例發(fā)熱率、使用抗生素比例和住院率均最低，癥狀最輕；OC43 病例有近10%出現(xiàn)腹瀉癥狀,見表2。

表2 冠狀病毒及分型的臨床資料

2.3 不同標(biāo)本類型檢測分析 上呼吸道標(biāo)本咽拭子與下呼吸道標(biāo)本支氣管灌洗液HCoV 核酸陽性率比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=0.031，P＞0.05），說明HCoV 可感染人的上呼吸道和下呼吸道，沒有明顯的傾向性。

表3 不同標(biāo)本類型冠狀病毒檢測情況

2.4 人群分布 男性HCoV 陽性率為4.55%（116/2552），女性HCoV 陽性率為2.60%（31/1192），男、女性HCoV 陽性率,差異有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=8.147,P＜0.05），男性高于女性。

將本研究所有病例標(biāo)本按年齡分成4 組。HCoV 陽性病例年齡分布在1月～6歲，年齡中位數(shù)1歲，陽性率在各年齡組, 差異有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=11.977，P＜0.05），陽性率最高是1 至3歲兒童（5.49%），陽性率最低是大于6歲人群（1.82%）。

表4 冠狀病毒核酸陽性病例年齡分布

2.5 時間分布 2010年-2018年HCoV 陽性率在2012年和2014年出現(xiàn)了兩次相對高峰，全年均流行趨勢,陽性率最高為12月（6.07%）。 見圖2、圖3。

圖2 冠狀病毒的年份分布

圖3 冠狀病毒的月份分布

2.6 地區(qū)分布 住院病例按現(xiàn)住住址城市分析，HCoV 陽性率最高的是吉安市（6.92%）；其次是南昌市（6.02%），而萍鄉(xiāng)市病例未檢出HCoV。

圖4 冠狀病毒的地區(qū)分布

2.7 混合感染情況HCoV 陽性標(biāo)本同時檢測其它7 種常見呼吸道感染病毒以監(jiān)測混合感染情況，119 份陽性標(biāo)本中混合感染74 例，混合感染率為2.34%,雙重感染47 份(39.5%)三重感染27 份(22.7%)。 混合感染分別為Flu5 份、RSV17 份、PIV14 份、AdV13 份、HMPV1 份、HBoV11 份和HRV17 份。 混合感染主要以RSV 和HRV 最多見。

3 討論

病毒是引起成人和兒童呼吸道感染的常見病原體，通常引起人體發(fā)熱、咳嗽等癥狀。 冠狀病毒是最大的RNA 病毒，HCoV-HKU1、229E、OC43 和NL63 會引起呼吸道感染，大多數(shù)癥狀較輕，但也可導(dǎo)致患者死亡[12]。

本研究采集、檢測了2010年-2018年3744 份咽拭子、 支氣管肺泡灌洗液等呼吸道標(biāo)本。 HCoV陽性率為3.93%，其中HKU1 陽性率1.12%，229E陽性率0.61%，OC43 陽性率1.68%，NL63 陽性率0.91%,發(fā)現(xiàn)陽性構(gòu)成比OC43 最高，NL63 最低，與其他研究結(jié)果相近[13，14]。

本研究發(fā)現(xiàn)不同型別HCoV 病例具有相似的臨床特征，多數(shù)出現(xiàn)發(fā)熱（低熱）和呼吸道癥狀，極少數(shù)出現(xiàn)腹瀉癥狀，超半數(shù)需住院治療和使用抗生素。 不同型別HCoV 病例呈現(xiàn)不同臨床特征，HKU1 和229E 陽性病例發(fā)熱多為高熱；229E 陽性病例病例發(fā)熱比例、 使用抗生素比例和住院率均最高，癥狀最重；NL63 陽性病例發(fā)熱率、使用抗生素比例和住院率均最低，癥狀最輕；OC43 病例有近10%出現(xiàn)腹瀉癥狀。 冠狀病毒感染病例需要關(guān)注，積極治療，以防癥狀加重。

本研究發(fā)現(xiàn)男性HCoV 陽性率高于女性，1 至3歲的兒童HCoV 陽性率最高，與其他研究結(jié)論[15,16]不同。學(xué)前兒童是冠狀病毒感染的高危人群，應(yīng)加強(qiáng)關(guān)注。

本研究發(fā)現(xiàn)HCoV 在不同年份流行一定波動,2012 和2014年出現(xiàn)兩次流行小高峰。 HCoV 全年均可檢出，但12月較高，與廣州市的研究表明HCoV 主要是在冬季和春季流行[17]略有不同。

本研究發(fā)現(xiàn)住院病例HCoV 陽性率最高來源于吉安市，其次是南昌市，而萍鄉(xiāng)市沒有檢測HCoV，可能與收集到萍鄉(xiāng)市標(biāo)本數(shù)較少有關(guān)，要全面掌握各設(shè)區(qū)市呼吸道病例的HCoV 病毒感染情況，尚需在當(dāng)?shù)亻_展監(jiān)測。

本研究也發(fā)現(xiàn)急性呼吸道感染病例HCoV 可混合感染其他呼吸道病毒，以RSV 和HRV 更常見，與相關(guān)研究表明[18]HCoV 混合感染率最高的是FluA、RSV 和HRV 的結(jié)果相類似。

綜上所述，本研究發(fā)現(xiàn)HCoV 陽性率最高是男性、 學(xué)前兒童。 OC43 陽性構(gòu)成比最高，HKU1 和229E 病例發(fā)熱多為高熱，229E 病例癥狀最重，NL63 病例癥狀最輕。由于冠狀病毒沒有疫苗應(yīng)用，我們需要關(guān)注冠狀病毒感染病例，重點(diǎn)關(guān)注男性、學(xué)前兒童，減輕冠狀病毒對人群的危害。