呂小林，張世錕，汪丁枝

（南昌大學第一附屬醫(yī)院檢驗科，江西 南昌 330006）

α-地中海貧血是由于α 珠蛋白基因缺陷而引起的α 珠蛋白肽鏈合成速率降低或幾乎不能合成,從而導致α 鏈與非α 鏈數(shù)量不平衡所造成的一類常見的單基因遺傳性、溶血性疾病[1]。 主要盛行于熱帶及亞熱帶,部分地區(qū)α 地中海貧血基因攜帶者高達80～90%，嚴重危害人類身心健康[2]。 目前有關α 珠蛋白基因缺陷研究[3]示至少發(fā)現(xiàn)103 種α 珠蛋白基因突變類型（35 種缺失型和68 種點突變型），其中臨床以缺失型為主，而由點突變引起的α地中海貧血較少見，在我國，α 珠蛋白基因缺失突變亦是引起α 地中海貧血的主要原因，且以--SEA/、-α4.2/、-α3.7/三種缺失突變最為常見[4]。 由于--SEA/、-α4.2/、-α3.7/三種突變α 珠蛋白基因缺失的片段長度不一，其影響的α 珠蛋白合成速率亦可能存在差異，因而不同α 缺失型地中海貧血患者其紅細胞各參數(shù)可能有差異，而目前相關的報道又較少，有必要對其進行研究，現(xiàn)分析我院204 例α 缺失型地中海貧血患者紅細胞各參數(shù)特點，以期對臨床診治提供依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般材料 選取2018年1月-2019年12月期間至我院做地中海貧血基因篩查患者，共1428例，其中男性694 例，女性734 例，年齡為3月～73歲，另設健康體檢者作為對照83 例，其年齡及性別與實驗組無差異。

1.2 儀器與試劑 核酸提取儀（smart，中山達安），PCR 儀（ABI2700），電泳儀（DYY8B，北京六一公司），恒溫雜交儀（YN-H16，深圳亞能生物技術公司），核酸/蛋白凝膠圖像分析管理系統(tǒng)（656-2000，珠海黑馬），全自動血細胞分析儀（XN2000,Sysmex公司），地中海貧血試劑購買于深圳亞能生物公司，血細胞分析儀配套試劑購買于Sysmex 公司，核酸提取試劑購買于中山達安公司。

1.3 方法 所有受試者均空腹采集肘靜脈EDTAK2 抗凝血2 -3ml，RBC、Hb、MCV、MCH、MCHC、RDW-CV 由全血動血細胞分析儀檢測，運用跨越斷點PCR 技術檢測α 缺失型地中海貧血（--SEA/、-α4.2/、-α3.7/），采用PCR-膜反向斑點雜交技術檢測α 地中海貧血點突變（αQS、αCS、αWS）及β 地中海貧血點突變(共17 種，CD41-42、CD71-72、CD17、-28、βE、IVS -II -654、IVS -I -1、IVS -I -5、CD43、CD31、CD27/28、-32、-29、CD30、CD14-15、CAP 和Int)。

1.4 統(tǒng)計方法 所有數(shù)據(jù)均采用SPSS19.0 進行統(tǒng)計分析，計量資料均值采用（±s）表示，不同組數(shù)據(jù)比較采用單因素方差分析，P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 1428 份樣本中共檢測出地中海貧血患者532例(占37.2%),其中α-地中海貧血209 例(占39.3%,α 缺失型地中海貧血204 例，α 點突變地中海貧血5 例)；β-地中海貧血309 例（占58.1%）；α/β-地中海貧血14 例（占2.6%）。 見表1。

表1 532 例地中海貧血患者基因分布特點

2.2 α 缺失型地中海貧血組紅細胞參數(shù)分析 實驗組RBC 為4.97*1012/L，略高于健康對照組（4.87*1012/L,但兩組數(shù)據(jù)無統(tǒng)計學意義（P=0.473）；Hb、MCV、MCH、MCHC明顯低于健康對照組，RDW-CV 結果明顯高于健康對照組，均具有統(tǒng)計學意義（P＜0.01），見表2。

表2 基因缺失地中海貧血組紅細胞指標分析

2.3 不同缺失型α-地中海貧血組紅細胞參數(shù)分析--SEA/組紅細胞數(shù)明顯高于其它各組；-α3.7/--SEA&-α4.2/--SEA組Hb 低于-α4.2/、-α3.7/組、--SEA/組；-α4.2/、-α3.7/組MCV、MCH 高于--SEA/、-α3.7/--SEA&-α4.2/--SEA組；-α3.7/--SEA&-α4.2/--SEA組MCHC 低于其它各組，差異有統(tǒng)計學意義；RDW-CV 各組間差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。 見表3。

表3 不同缺失型α- 地中海貧血組紅細胞指標分析

3 討論

地中海貧血是由于珠蛋白基因突變或缺失所引起的珠蛋白肽鏈合成異常而導致的慢性溶血性疾病，是人類最常見的單基因遺傳病之一，全球流行病學研究示約2%人口（3.5 億）攜帶地中海貧血基因，預計每年約33.6 萬患兒出生[5]，該病好發(fā)于地中海沿岸、東南亞及非洲等地，在中國以廣東、廣西、云南、四川等地區(qū)主[6]，本研究分析了2018-2019年期間來我院做地中海貧血篩查的患者1428 例，共檢出532 陽性（37.2%），其中α 缺失型地中海貧血209 例（占14.6%），高于聶益軍[7]、黃曉紅[8]等研究，原因可能為本研究對象非完全盲選篩查者，大部分患者是源于針對性排查。 α 地中海貧血是由于16 號染色體（16p13.3）α 珠蛋白基因簇中α1、α2 珠蛋白基因出現(xiàn)缺失或點突變，引起α珠蛋白肽鏈合成減少或未分成，致使體內(nèi)形成過多的非α 類珠蛋白肽鏈四聚體（如Hb H），不穩(wěn)定Hb H 易降解沉積形成H 包涵體，影響紅細胞的穩(wěn)定性，從而導致慢性溶血性貧血。

研究顯示目前世界上至少發(fā)現(xiàn)了35 種缺失型和68 種突變型α 地中海貧血，在中國報道了57種α 地中海貧血基因突變（19 種片段缺失和38 種點突變），以--SEA/、-α4.2/、-α3.7/缺失突變和αQS、αCS、αWS點突變6 種突變?yōu)橹?，占人群總?shù)的98%[9]。 本研究中的209 例α-地中海貧血患者中共發(fā)現(xiàn)了7種突變方式，即5 種缺失型（--SEA/、-α4.2/、-α3.7/、-α3.7/--SEA、-α4.2/--SEA）和2 種點突變型（αQS、αCS），分別占97.6%和2.4%，缺失型突變明顯高于點突變，而缺失突變中又以--SEA/、-α3.7/兩種為主（分別占70.1%、22.5%），與謝嶼平[10]、Luo[11]等報道的構成比基本一致，由此可見江西省α 地中海貧血亦是以缺失型突變?yōu)橹?，?-SEA/明顯高于其它缺失型。 缺失型α-地中海貧血由于α 肽鏈合成障礙，導致Hb 結構異常及RBC 破壞過多而出現(xiàn)貧血，因而缺失型α-地中海貧血患者其RBC 各指標可能發(fā)生變化。 通過比對分析我們發(fā)現(xiàn)α 缺失型地中海貧血患者紅細胞RBC 數(shù)與健康對照相比無明顯差異性（P=0.473），而Hb、MCV、MCH、MCHC 明顯低于健康對照組（P＜0.01），RDW-CV 結果明顯高于健康對照組（P＜0.01）。

α 缺失型地中海貧血主要影響到Hb 合成，而Hb 又是紅細胞中主要內(nèi)容物，因而Hb、MCV、MCH、MCHC、RDW-CV 會出現(xiàn)明顯變化； 地中海貧血的紅細胞由于自身不穩(wěn)定而破壞過多，但同時地中海貧血屬于增生性貧血，患者紅系細胞增殖分裂能力正常，且具有一定的代償能力，所以α缺失型地中海貧血患者RBC 數(shù)可正常。 一旦超過了機體代償能力時，紅細胞數(shù)也會出現(xiàn)下降現(xiàn)象。α 珠蛋白基因缺失的片段長度不一樣，其影響的α肽鏈的合成速率可能存在差異，從而導致紅細胞的各參數(shù)亦可出現(xiàn)不同。

本研究中我們分析了不同缺失α 地中海貧血患者RBC 各參數(shù)特點，以α4.2/、-α3.7/兩組相比，--SEA/組MCV、MCH、MCHC 三參數(shù)明顯下降，且-α3.7/--SEA&-α4.2/--SEA組結果下降更為明顯，α 珠蛋白基因缺失長度不同，其對RBC 各參數(shù)影響程度亦不同，缺失片段越長其影響越大。