吳基任，潘 望，譚高好，潘永波，魏 靜，李 備

（1.海南省食品檢驗(yàn)檢測(cè)中心，海南?？?570314；2.國(guó)家市場(chǎng)監(jiān)管重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室(熱帶果蔬質(zhì)量與安全)，海南海口 570314）

黃曲霉毒素B1是二氫呋喃氧雜奈臨酮的衍生物，即含有一個(gè)雙呋喃環(huán)和一個(gè)氧雜萘臨酮（香豆素）。黃曲霉毒素B1具有致癌、致突變、致畸性及肝毒性，對(duì)人體健康有極大的危害，1993 年黃曲霉毒素被世界衛(wèi)生組織（WHO）癌癥研究總署（LARC）劃定為Ⅰ類(lèi)致癌物[1-2]?？紤]到黃曲霉毒素B1對(duì)人類(lèi)健康的危害性，各個(gè)國(guó)際組織逐步確立法律法規(guī)限定其最大攝入量。1993 年聯(lián)合國(guó)糧農(nóng)組織和世界衛(wèi)生組織規(guī)定食品中黃曲霉毒素限量為30 μg/kg[3]，2002 年歐盟規(guī)定供人食用的食品及食品原料中黃曲霉毒素B1限量為2 μg/kg[4]，食品法典委員會(huì)規(guī)定了花生中黃曲霉毒素總限量為15 μg/kg[5]。我國(guó)新修訂的《國(guó)家食品安全標(biāo)準(zhǔn) 食品中真菌毒素限量》（GB 2761—2017）也對(duì)各類(lèi)食品中的黃曲霉毒素B1限量進(jìn)行了規(guī)定，其中花生及其制品的限量為20 μg/kg[6]。黃曲霉毒素B1廣泛存在于油料，如花生、大豆、玉米等，而花生和玉米中黃曲霉毒素污染最為嚴(yán)重。在我國(guó)每年生產(chǎn)的花生中，有47.3%用于榨油，花生中的黃曲霉毒素隨著榨油過(guò)程進(jìn)入花生油中。有研究發(fā)現(xiàn)人工挑除霉變的花生，可以將花生中的黃曲霉毒素B1降低到一定程度，如果仔細(xì)挑選，能夠?qū)⒒ㄉ悬S曲霉毒素污染濃度降低約97%，從而降低花生油中黃曲霉毒素。

鑒于海南省花生油榨油小作坊眾多，土榨花生油消費(fèi)特點(diǎn)明顯，了解當(dāng)前海南省小作坊土榨花生油情況，展開(kāi)小作坊土榨花生油中黃曲霉毒素B1含量的調(diào)查分析，以期較為全面掌握海南省小作坊土榨花生油安全水平及黃曲霉毒素B1污染狀況，從而為相關(guān)部門(mén)提供風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估、預(yù)警以及決策，為人們食用花生油提供安全保障。

1 材料與方法

1.1 樣品采集

結(jié)合海南省榨油小作坊分布及土榨花生油消費(fèi)特點(diǎn)，在海南省19 市縣隨機(jī)抽樣檢驗(yàn)。200 個(gè)榨油小作坊各抽取土榨花生油樣品1 批，共計(jì)200 批。分批采集封裝后常溫保存，每份樣品均做好詳細(xì)采樣記錄和調(diào)查問(wèn)卷。抽樣時(shí)間為2021 年3 月—2021年4 月，有4 個(gè)市縣沒(méi)有抽到樣品，實(shí)際抽樣市縣為15 個(gè)。

1.2 儀器與試劑

LC-30 超高效液相（日本島津），QTRAP 5500三重四極桿液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀（美國(guó)AB SCIEX 公司）；Multi Reax 全能型振蕩器（德國(guó)Heidolph 公司）；Centrifuge 5804 高速離心機(jī)（德國(guó)Eppendorf 公司）；SCIENTZ-950E 超聲波提取器（寧波新芝生物科技公司）；AutovapS60 氮吹儀（美國(guó)ATR）；XS-205 電子分析天平（瑞士Mettler-Toledo）；Milli-Q 超純水制備系統(tǒng)（美國(guó)MILLI-PORE）；陶瓷均質(zhì)子（美國(guó)安捷倫公司）；ACE Ultra Core Super C18色譜柱（2.1 mm×100 mm,2.5 μm,英國(guó)ACE 公司）；0.22 μm尼龍微孔濾膜（上海安譜科學(xué)儀器有限公司）。

甲醇、乙腈、甲酸，色譜純，德國(guó)默克公司；黃曲霉毒素B1標(biāo)準(zhǔn)品（25 μg/mL）；花生油質(zhì)控樣品，批號(hào):MRM-AO-04010，新加坡Pribolab 公司；提取鹽包（4 g MgSO4、1 g NaCl、1 g 檸檬酸鈉、0.5 g三水合檸檬酸二鈉）、凈化鹽包（150 mg C18、900 mg MgSO4），美國(guó)安捷倫公司）；超高比表面積單壁碳納米管（純度＞95%，直徑1～2 nm，長(zhǎng)度5～30 μm，比表面積＞1 075 m2/g），南京納米先鋒公司；超純水：超純水制備系統(tǒng)制備。

1.3 檢測(cè)方法

土榨花生油中黃曲霉毒素B1含量的測(cè)定方法根據(jù)《QuEChERS-超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定花生及土榨花生油中9 種真菌毒素》[7]。準(zhǔn)確稱(chēng)取2.0 g 油樣于50 mL 的離心管中，加入10 mL 含1%甲酸甲醇溶液，2 粒陶瓷均質(zhì)子，加入提取鹽包（4 g MgSO4、1 g NaCl、1 g 檸檬酸鈉、0.5 g 三水合檸檬酸二鈉），以2 500 r/min 渦旋混勻2 min，置于超聲波清洗器超聲提取5 min 后，再10 000 r/min 離心3 min，移取上清液至預(yù)先加入凈化鹽包（150 mg C18、900 mg MgSO4）15 mL 離心管中,對(duì)于顏色較深的試樣15 mL 離心管中預(yù)先加入凈化鹽包（150 mg C18、900 mg MgSO4）及10 mg超高比表面積單壁碳納米管，以500 r/min 渦旋混勻1 min，再10 000 r/min 離心3 min，準(zhǔn)確吸取5 mL 上清液于10 mL 試管中，在40 ℃水浴下氮?dú)獯抵两桑尤? mL 含0.1%甲酸的水-乙腈溶液（20 ∶80，V∶V）復(fù)溶，過(guò)0.22 μm尼龍微孔濾膜,上UPLC-MS/MS 測(cè)定。

1.4 評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)與方法

依據(jù)《國(guó)家食品安全標(biāo)準(zhǔn) 食品中真菌毒素限量》（GB 2761—2017）中花生及其制品的限值（≤20 μg/kg）及《QuEChERS-超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定花生及土榨花生油中9 種真菌毒素》的黃曲霉毒素B1定量限（0.23 μg/kg）對(duì)花生油進(jìn)行評(píng)價(jià)。

采用Excel 2016 和SPSS 19.0 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)軟件處理分析實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。主要包括描述性分析，各個(gè)地區(qū)檢出率之間的比較采用卡方檢驗(yàn)，以（p＜0.05）為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

1.5 質(zhì)量控制

所有檢出的樣品，均按照《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中黃曲霉毒素B 族和G 族的測(cè)定》（GB 5009.22—2016）第一法同位素稀釋液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法[8]進(jìn)行復(fù)測(cè)確認(rèn)，同時(shí)采用有證質(zhì)控樣隨樣測(cè)定，以保證結(jié)果的準(zhǔn)確性。

1.6 暴露評(píng)估

采用簡(jiǎn)單點(diǎn)評(píng)估法計(jì)算居民食用油黃曲霉毒素B1的膳食暴露量，食用油中黃曲霉毒素B1暴露量（ng/kg bw/d）=食用油人日均消費(fèi)量×食用油中黃曲霉毒素B1平均含量（μg/kg）/標(biāo)準(zhǔn)成人體重（60 kg）[9-10]。

2 結(jié)果與分析

2.1 樣品中黃曲霉毒素B1 的含量分析

本次調(diào)查采集的土榨花生油200 批樣品經(jīng)檢測(cè)，85 批樣品檢出AFB1（≥0.23 ug/kg），檢出率為42.5%，低于2016 年福建省的71.4%及2017 年廣西省的78.08 %[11-12]。含量范圍為0.25～22.03 μg/kg，中位數(shù)1.47 μg/kg，平均含量為1.22 μg/kg。按現(xiàn)行的《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中真菌毒素限量》（GB 2761—2017）中花生油的黃曲霉毒素B1限量規(guī)定（≤20 μg/kg），所調(diào)查的樣品中有1 批超過(guò)國(guó)家限量標(biāo)準(zhǔn)，不合格率為0.5%。檢測(cè)結(jié)果在15～20 μg/kg，接近國(guó)家限量標(biāo)準(zhǔn)的樣品有1 批，而這個(gè)污染水平可能會(huì)被企業(yè)所忽視。200 批樣品檢測(cè)結(jié)果值分布水平見(jiàn)圖1。

圖1 花生油樣品黃曲霉毒素B1 檢測(cè)結(jié)果散點(diǎn)圖

2.2 各市縣樣品中黃曲霉毒素B1 污染狀況分析

將花生油樣品黃曲霉毒素B1檢測(cè)結(jié)果按市縣分析，結(jié)果見(jiàn)表1。從表中可以看出黃曲霉毒素B1的檢出率比較高，有4 個(gè)市縣的黃曲霉毒素B1的檢出率大于50%，定安縣檢出不合格1 批，該縣的不合格率為3.85%。使用SPSS 對(duì)15 個(gè)市縣的土榨花生油樣品中黃曲霉毒素B1的監(jiān)測(cè)結(jié)果進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)各個(gè)地區(qū)的樣品中黃曲霉毒素B1的檢出率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=31.42，p＜0.05）。

表1 各市縣花生油樣品中AFB1 檢測(cè)結(jié)果

2.3 膳食暴露情況

結(jié)合海南統(tǒng)計(jì)年鑒（2020）的植物油人日均消費(fèi)量（21.22 g/d）[13]和本次黃曲霉毒素B1含量調(diào)查數(shù)據(jù)，代入暴露量水平計(jì)算公式，得出海南省居民食用土榨花生油中黃曲霉毒素B1的平均暴露水平為0.43 ng/kg bw/d。通過(guò)食用土榨花生油攝入黃曲霉毒素B1的量為25.89 ng/人，低于我國(guó)消費(fèi)人群花生油平均日膳食暴露量（50.16 ng/人）[14]。

3 結(jié)論與討論

本調(diào)查遵循樣本“覆蓋面廣、多點(diǎn)采樣”的原則，樣本覆蓋全省15 個(gè)市縣的200 家榨油小作坊，基本能夠代表人們購(gòu)買(mǎi)土榨花生油的主要渠道。對(duì)200 批樣品中黃曲霉毒素B1檢測(cè)分析結(jié)果表明，2021 年海南省小作坊花生油黃曲霉毒素B1超標(biāo)率為0.5%，檢出率為42.5%，經(jīng)簡(jiǎn)單風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估發(fā)現(xiàn)，海南省人群食用土榨花生油攝入黃曲霉毒素B1的量為25.89 ng/人，低于我國(guó)消費(fèi)人群花生油平均日膳食暴露量。調(diào)查中發(fā)現(xiàn)小作坊土榨花生油多是前店后廠模式生產(chǎn)，條件比較簡(jiǎn)陋，設(shè)施設(shè)備及加工工藝比較落后，產(chǎn)品過(guò)濾精煉不足，部分產(chǎn)品靜置后有深棕色絮狀沉淀物?；ㄉ椭悬S曲霉毒素B1含量的高低取決于花生原料的質(zhì)量及壓榨加工過(guò)程精煉處理效果。如果在花生種植收獲、存儲(chǔ)運(yùn)輸和壓榨加工過(guò)程中沒(méi)有做好防霉、精煉過(guò)濾等處理，容易造成終產(chǎn)品的黃曲霉毒素B1含量超標(biāo)。有研究發(fā)現(xiàn)人工挑除霉變的花生，可以將花生中的黃曲霉毒素B1降低到一定程度，如果仔細(xì)挑選，能夠?qū)⒒ㄉ悬S曲霉毒素污染濃度降低約97%，從而降低花生油中黃曲霉毒素B1?；ㄉ椭悬S曲霉毒素B1高于和接近國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)限值的小作坊可采取如下措施：①加強(qiáng)對(duì)標(biāo)準(zhǔn)法規(guī)的學(xué)習(xí)，提升食品安全和質(zhì)量保證意識(shí)；②加強(qiáng)防霉儲(chǔ)存知識(shí)學(xué)習(xí)，以做好壓榨加工及儲(chǔ)存過(guò)程的防霉處理；③加強(qiáng)環(huán)境溫濕度控制，加強(qiáng)剔除原料中的霉粒，必要時(shí)改善設(shè)施設(shè)備和改進(jìn)加工工藝。以進(jìn)一步提升海南小作坊土榨花生油質(zhì)量，保證人們食用花生油安全。

鑒于本次研究?jī)H針對(duì)2021 年海南省小作坊土榨花生油中的黃曲霉毒素B1進(jìn)行膳食暴露評(píng)估，而黃曲霉毒素B1存在于各種食用農(nóng)產(chǎn)品中，且食用植物油的種類(lèi)繁多。因此，本研究結(jié)果并不能完全代表該地區(qū)居民人體黃曲霉毒素素B1的總體攝入水平。