邵明辰，王友令

（1.山東魯南牧工商有限公司，山東 滕州 277500；2.山東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院家禽研究所，山東 濟南 250100）

雞滑液囊支原體（MS）引起雞滑液囊炎，該病是雞的一種急性或慢性傳染病，以侵害關(guān)節(jié)的滑液囊膜及腱鞘為主，引起關(guān)節(jié)滲出性滑膜炎、腱鞘炎及跗關(guān)節(jié)和腳墊腫脹等[1]，此外還會造成生長發(fā)育遲緩、胴體降級、產(chǎn)蛋下降等，并且與呼吸道疾病有關(guān)，給養(yǎng)雞業(yè)造成巨大的經(jīng)濟損失。

蛋雞滑液囊支原體主要表現(xiàn)病雞進行性消瘦、瘸腿，死淘率增加,種雞和蛋雞感染導(dǎo)致產(chǎn)蛋下降，孵化率降低，并垂直傳染給仔雞，使仔雞發(fā)病。本次通過對某商品蛋雞養(yǎng)殖場的現(xiàn)場調(diào)查、臨床剖檢及實驗室PCR診斷，確診了一例商品蛋雞患有滑液囊支原體感染的病例，并制定了藥物治療、飼養(yǎng)管理、消毒隔離等措施，該雞群病情得到有效控制。2018年6月，山東德州平原某蛋雞場約10000只18周齡雞陸續(xù)出現(xiàn)消瘦、瘸腿、關(guān)節(jié)腫脹、腳墊腫脹和龍骨下化膿積液等癥狀，臨床死淘率增加，發(fā)病雞占總雞群的15%左右。通過雞群的臨床癥狀，剖檢變化并結(jié)合實驗室診斷進行了詳細(xì)的分析研究，最終確診為蛋雞滑液囊支原體感染，現(xiàn)將診斷結(jié)果匯報如下。

1 臨床癥狀及剖檢變化

發(fā)病雞表現(xiàn)采食下降、消瘦、精神沉郁、食欲降低，以及跗關(guān)節(jié)和趾關(guān)節(jié)腫脹（見圖1）、站立不穩(wěn)等。剖檢可見跗關(guān)節(jié)中有干酪樣炎性物質(zhì) （圖2），龍骨下有化膿性積液（圖3），爪墊有粘液性物質(zhì)（圖 4）。

圖1 跗關(guān)節(jié)和趾關(guān)節(jié)腫脹

圖2 跗關(guān)節(jié)中有干酪樣炎性物質(zhì)

圖3 龍骨下化膿性積液

圖4 爪墊有粘液性物質(zhì)

2 實驗室診斷

2.1 病原分離 參考文獻方法[2]將氣管棉拭子放裝有4.5ml改良的Frey液體培養(yǎng)基試管中，置于37℃溫箱培養(yǎng)。待培養(yǎng)基顏色變橘黃后用0.2μm的濾膜過濾，取0.5ml濾出的菌液按1：9的比例重新接種于新的液體培養(yǎng)基中，37℃溫箱培養(yǎng)2～3d；待液體培養(yǎng)基變橘黃后，劃線接種于固體培養(yǎng)基37℃溫箱培養(yǎng)3～7d；低倍顯微鏡下挑取單個克隆再次接種Frey液體培養(yǎng)基中，重復(fù)3次；將純化的第3代培養(yǎng)物用甘油保菌后凍存于-20℃冰箱備用。

2.2 分子鑒定 DNA提取試劑盒購自天根生化科技有限公司。Taq酶、pMD18-T Vector、限制性內(nèi)切酶及膠回收試劑盒均購自大連寶生物有限公司。引物根據(jù)文獻提供[3]：

P1：5＇-CCTACGGGAGGcAGCAGT-3＇；P2：5＇-AGGCAGTCGTGTCCCAAGGTC-3＇，預(yù)期擴增目的片段大小為l077bp。

3 結(jié)果

3.1 病原的觀察 低倍顯微鏡下挑取單個克隆接種Frey液體培養(yǎng)基中，重復(fù)3次純化后可在低倍顯微鏡下觀察到圓形且呈典型 “荷包蛋”樣菌落，見圖1。

圖1 低倍鏡下觀察禽滑液囊支原體菌落（10x）

3.2 分子鑒定 分離株分子鑒定結(jié)果顯示，擴增片段的大小約為 1000bp（見圖 2），與預(yù)期片段大小相符，表明片段擴增正確。對該擴增基因測序結(jié)果進行BLAST基因?qū)Ρ确治?，結(jié)果表明與GenBank上公布的MS參考株WVU1853有99%的同源性，證實該分離株為禽滑液囊支原體。

圖2 PCR擴增產(chǎn)物的電泳結(jié)果

3 小結(jié)

本試驗通過對山東平原某蛋雞場疑似禽滑液囊支原體感染的病雞進行支原體的分離鑒定及PCR診斷，證實該雞群感染禽滑液囊支原體。根據(jù)檢測結(jié)果制定以下防控措施。

3.1 加強飼養(yǎng)管理，嚴(yán)格衛(wèi)生消毒 滑液囊支原體廣泛存在于雞群中，前期不表現(xiàn)癥狀，不易被發(fā)現(xiàn)。該場發(fā)病后加強了消毒工作和飼養(yǎng)管理。選用有效消毒藥搞好環(huán)境衛(wèi)生的消毒，使雞群在良好的飼養(yǎng)條件下生長發(fā)育，降低了損失。

3.2 重視生物安全，控制種源選擇 滑液囊支原體可垂直傳播，因此雞場在引種過程中要控制種苗來源，避免從疫區(qū)引進種蛋和雛雞，并加強檢疫和防疫。建議實行自繁自養(yǎng)和全進全出制。確保病雞全部淘汰，要做到及時撲殺并無害化處理，防止疫病傳播。

3.3 治療 目前對于滑液囊支原體的控制，一直選用藥物治療與疫苗預(yù)防相結(jié)合的手段[4，5]。藥物治療雖能減少經(jīng)濟損失，但不能從根本上消除整個禽群內(nèi)的滑液囊支原體感染，臨床上一旦確診該病，多采用多次用藥的方法以達到抑制滑液囊支原體生長。對該場發(fā)病雞推薦泰樂菌素和恩諾沙星交替使用[6]，連續(xù)兩個療程，每個療程5d，并在飲水中適當(dāng)添加優(yōu)質(zhì)電解多維和葡萄糖，經(jīng)兩個療程治療后基本控制病情，未再造成嚴(yán)重?fù)p失。