王 燕，孫明麗

(1.鄭州工業(yè)應(yīng)用技術(shù)學(xué)院醫(yī)學(xué)院，河南 鄭州 451150；2.新鄭市人民醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科，河南 新鄭 451100；3.鄭州市中心醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科，河南 鄭州 450000)

腔隙性腦梗死(LI)是由腦深部穿動(dòng)脈閉塞引起的腦梗死，起病的早期癥狀不典型。有資料顯示，約20%LI患者發(fā)病后可能出現(xiàn)病情進(jìn)行性加重即進(jìn)展性LI，重者出現(xiàn)多區(qū)域缺血灶、癡呆，甚至死亡[1-2]。因此，在LI發(fā)病早期評(píng)估病情及預(yù)后能夠?yàn)榕R床制定診療方案提供依據(jù)。微小RNA(miR)是一類(lèi)長(zhǎng)度18～25 nt的非編碼RNA，在心腦血管疾病中發(fā)揮多樣的生物學(xué)作用，其中miR-155在腦組織及心肌組織缺血缺氧過(guò)程中起到加重組織損傷的作用[3-4]。王興萍等[5]的研究證實(shí)，急性腦梗死發(fā)病過(guò)程中miR-155表達(dá)增加且靶向抑制血管新生基因缺氧誘導(dǎo)因子-1α(HIF-1α)的表達(dá)。目前，miR-155在LI發(fā)病中的作用尚不清楚。因此，本研究將以LI患者為對(duì)象，探究外周血miR-155表達(dá)水平的變化及其與血管新生因子的關(guān)系、對(duì)病情進(jìn)展的預(yù)測(cè)價(jià)值。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇2018年6月至2020年12月在新鄭市人民醫(yī)院診斷為L(zhǎng)I的患者作為L(zhǎng)I組。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)符合LI的診斷標(biāo)準(zhǔn)[6]；(2)均采用簡(jiǎn)易智力狀態(tài)檢查量表(MMSE)評(píng)價(jià)認(rèn)知功能；(3)留取外周血標(biāo)本及血清標(biāo)本；(4)取得知情同意。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)有心肌梗死、腦出血、腦創(chuàng)傷等病史；(2)有精神疾病病史；(3)藥物或酒精依賴(lài)；(4)合并惡性腫瘤、自身免疫性疾病、急慢性感染。另選取同期體檢的健康志愿者作為對(duì)照組。LI組共78例，其中男45例，女33例；年齡46～68歲，平均(58.93±10.72)歲。對(duì)照組共90例，其中男56例，女34例；年齡45～65歲，平均(57.61±9.39)歲。兩組研究對(duì)象一般資料比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。本研究經(jīng)過(guò)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審批通過(guò)。

1.2方法

1.2.1外周血miR-155的檢測(cè) 在LI組患者入院后，在血常規(guī)采血管內(nèi)采集LI組及對(duì)照組研究對(duì)象外周血3～5 mL，采用RNA提取試劑盒提取外周血中的RNA，采用cDNA第一鏈合成試劑盒將RNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA，采用熒光定量PCR試劑盒對(duì)cDNA中的miR-155及U6進(jìn)行擴(kuò)增檢測(cè)，根據(jù)擴(kuò)增曲線(xiàn)，以U6為內(nèi)參計(jì)算miR-155的表達(dá)水平。

1.2.2血清HIF-1α、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)的檢測(cè) 在LI組患者入院后，在生化采血管內(nèi)采集LI組及對(duì)照組研究對(duì)象外周血3～5 mL，離心分離血清后采用酶聯(lián)免疫吸附法試劑盒(上海酶聯(lián)公司)檢測(cè)HIF-1α、VEGF的水平。

1.2.3認(rèn)知功能的評(píng)估 采用MMSE量表評(píng)價(jià)LI組患者入院時(shí)的認(rèn)知功能，得分大于27分為認(rèn)知功能正常，>20～27分為輕度認(rèn)知功能障礙，>10～20分為中度認(rèn)知功能障礙，0～10分為重度認(rèn)知功能障礙。

2 結(jié) 果

2.1LI組與對(duì)照組外周血miR-155表達(dá)水平比較 LI組患者外周血miR-155的表達(dá)水平[(1.23±0.30)]較對(duì)照組[(1.00±0.24)]明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=5.517，P<0.001)。

2.2LI組中不同認(rèn)知功能患者外周血miR-155表達(dá)水平比較 LI組中重度、中度認(rèn)知功能障礙患者的外周血miR-155表達(dá)水平高于認(rèn)知功能正?；颊?，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，輕度認(rèn)知功能障礙患者的外周血miR-155表達(dá)水平與認(rèn)知功能正?；颊弑容^，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表1。

表1 LI組中不同認(rèn)知功能患者外周血miR-155

2.3LI組中不同外周血miR-155表達(dá)水平患者血清HIF-1α、VEGF水平比較 LI組中外周血miR-155表達(dá)水平大于或等于中位數(shù)(1.21)患者的血清HIF-1α、VEGF水平低于miR-155表達(dá)水平小于中位數(shù)患者,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表2。

表2 LI組中不同外周血miR-155表達(dá)水平患者血清HIF-1α、VEGF水平比較

2.4LI組中不同病情進(jìn)展情況患者外周血miR-155表達(dá)水平比較 LI組中病情進(jìn)展患者的外周血miR-155表達(dá)水平[(1.38±0.22)]高于病情未進(jìn)展患者[(1.17±0.30)]，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=2.870，P=0.005)。

2.5外周血miR-155預(yù)測(cè)LI患者預(yù)后的ROC曲線(xiàn)分析 外周血miR-155預(yù)測(cè)LI患者預(yù)后的ROC曲線(xiàn)見(jiàn)圖1，曲線(xiàn)下面積為0.717，95%可信區(qū)間0.598～0.836，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.004)。

圖1 外周血miR-155預(yù)測(cè)LI患者預(yù)后的ROC曲線(xiàn)

3 討 論

LI主要由大腦前、中、后動(dòng)脈和椎基底動(dòng)脈深穿支梗死引起，梗死灶面積較小、直徑一般不超過(guò)1.5～2.0 cm，早期癥狀不典型、診斷難度大，隨著病情發(fā)展可出現(xiàn)進(jìn)展。因此，早期診斷LI、評(píng)估LI病情進(jìn)展的風(fēng)險(xiǎn)能夠?yàn)榕R床制定診療方案提供依據(jù)。頭顱磁共振是目前診斷LI并評(píng)估病情的有效手段[7-8]，但檢查耗時(shí)較長(zhǎng)、費(fèi)用較高，在無(wú)癥狀LI患者中推廣使用存在較多限制。血液指標(biāo)檢測(cè)具有取材方便、可重復(fù)性好的優(yōu)點(diǎn)，目前尚缺乏能夠準(zhǔn)確評(píng)估LI病情的血液標(biāo)志物。本研究將以miR-155為切入點(diǎn)，將外周血miR-155作為評(píng)估LI病情的標(biāo)志物，具體探究LI患者外周血miR-155表達(dá)的變化及臨床意義。

miR-155是一種在心腦血管系統(tǒng)中發(fā)揮多樣生物學(xué)作用的miR。XI等[9]和CHEN 等[3]的研究分別在心肌細(xì)胞缺氧復(fù)氧過(guò)程和心肌組織缺血再灌注過(guò)程中證實(shí)miR-155表達(dá)增加，抑制mIR-155能夠減輕心肌細(xì)胞及心肌組織的損害。ZHANG等[10]和SUOFU 等[11]的研究在腦組織缺血再灌注過(guò)程中檢測(cè)到miR-155表達(dá)增加，敲低或敲除miR-155可減輕缺血再灌注引起的腦損傷。除上述基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)研究外，王興萍等[5]、ZHANG等[10]的臨床研究均證實(shí)急性腦梗死患者外周血miR-155的表達(dá)水平增加，且miR-155可作為評(píng)估急性腦梗死病情的標(biāo)志物。本研究通過(guò)檢測(cè)LI患者外周血miR-155表達(dá)的變化可知：與對(duì)照組健康者比較，LI組患者外周血miR-155的表達(dá)明顯增加，表明miR-155的表達(dá)增加與LI的發(fā)病有關(guān)。

根據(jù)目前miR-155的相關(guān)研究，miR-155具有加劇心肌組織及腦組織損傷的作用。在LI的發(fā)病過(guò)程中，腦組織缺血損害可引起認(rèn)知功能障礙[12-13]，本研究通過(guò)MMSE評(píng)分對(duì)患者的認(rèn)知功能進(jìn)行評(píng)價(jià)并分析其與miR-155表達(dá)的關(guān)系，結(jié)果顯示：與認(rèn)知功能正常的LI患者比較，存在中度及重度認(rèn)知功能障礙的LI患者外周血miR-155表達(dá)明顯增加，而存在輕度認(rèn)知功能障礙的LI患者外周血miR-155表達(dá)無(wú)明顯變化，表明LI發(fā)病過(guò)程中miR-155表達(dá)增加與認(rèn)知功能的減退有關(guān)，其可能機(jī)制是缺血缺氧腦組織中miR-155表達(dá)增加使組織損害加重，進(jìn)而引起認(rèn)知功能損害。

在腦組織缺血缺氧過(guò)程中，局部組織血管新生是重要的自身代償機(jī)制。HIF-1α是在缺氧條件下調(diào)控血管新生的重要分子，缺氧能夠刺激HIF-1α表達(dá)增加，進(jìn)而啟動(dòng)下游VEGF的表達(dá)并促進(jìn)新生血管形成，在缺血缺氧局部建立側(cè)支循環(huán)，能夠在一定程度上對(duì)組織的缺血缺氧損傷進(jìn)行代償[14-15]。王興萍等[5]和CHEN等[3]的臨床研究和基礎(chǔ)研究分別證實(shí)miR-155能夠靶向抑制HIF-1α，由此推測(cè)靶向抑制HIF-1α是miR-155參與腦組織及心肌組織缺血缺氧損害的相關(guān)機(jī)制。本研究通過(guò)分析LI患者血清中血管新生因子HIF-1α及VEGF的變化可知：隨著LI患者外周血miR-155表達(dá)增加，血清中HIF-1α及VEGF的水平降低，表明LI發(fā)病過(guò)程中miR-155表達(dá)增加可能對(duì)HIF-1α及VEGF具有抑制作用。

最后，本研究還對(duì)LI患者的病情進(jìn)展進(jìn)行了評(píng)估，通過(guò)比較入院時(shí)及入院后7 d時(shí)NIHSS評(píng)分的變化可知：共20例LI患者發(fā)生了病情進(jìn)展，病情進(jìn)展發(fā)生率為25.64%。進(jìn)一步分析病情進(jìn)展與miR-155表達(dá)的關(guān)系可知：病情進(jìn)展LI患者入院時(shí)miR-155的表達(dá)水平高于病情未進(jìn)展LI患者，且經(jīng)ROC曲線(xiàn)分析證實(shí)miR-155的表達(dá)水平對(duì)LI病情進(jìn)展具有預(yù)測(cè)價(jià)值。以上結(jié)果表明，miR-155高表達(dá)不僅與LI發(fā)病、認(rèn)知功能損害有關(guān)，也與病情進(jìn)展有關(guān)，可用于預(yù)測(cè)病情進(jìn)展。

綜上所述，LI患者外周血miR-155表達(dá)增加與血管新生因子HIF-1α及VEGF減少、病情進(jìn)展有關(guān)，檢測(cè)miR-155對(duì)病情進(jìn)展具有預(yù)測(cè)價(jià)值。未來(lái)，miR-155有望作為診斷及評(píng)估LI病情的標(biāo)志物。