李凌木，唐海，郭葉，韓開(kāi)林**

（1.內(nèi)蒙古科技大學(xué)包頭醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院，內(nèi)蒙古 包頭014060；2.天士力控股集團(tuán)有限公司研究院化學(xué)藥品開(kāi)發(fā)中心，天津300410）

1 組蛋白賴(lài)氨酸甲基轉(zhuǎn)移酶

1.1 組蛋白賴(lài)氨酸甲基轉(zhuǎn)移酶介紹

組蛋白甲基化轉(zhuǎn)移酶（histone methyltransferase，HMT）的基因改變誘導(dǎo)了人類(lèi)腫瘤疾病的發(fā)生，組蛋白賴(lài)氨酸甲基轉(zhuǎn)移酶（enhancer of zeste homolog 2，EZH2）作為HMT重要成員，與胚胎外層發(fā)育蛋白（embryonic ectoderm development，EED）、ZESTE12同源物1抑制因子2蛋白（suppressor of zeste 12，SUZ12）、人AE結(jié)合蛋白2（AE binding protein 2，AEBP2）和視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤相關(guān)蛋白46/48（retinoblastoma associated protein 46/48，RbAp46/48）構(gòu)成了起始復(fù)合物——多梳蛋白復(fù)合體2（PRC2）的催化亞單位[1-3]，主要催化組蛋白H3上27位點(diǎn)賴(lài)氨酸（lysine 27 in histone H3，H3K27）甲基化，從而導(dǎo)致基因沉默[4]，其在控制參與調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖分化方面扮演重要的角色（見(jiàn)圖1）。最新研究表明EZH2還與抑癌基因和上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化（epithelial-mesenchymal transition，EMT）相關(guān)基因如p16INK4a和上皮細(xì)胞鈣黏蛋白基因的抑制有關(guān)[5]。據(jù)報(bào)道，EZH2的突變或過(guò)表達(dá)已在多種腫瘤中被發(fā)現(xiàn)，例如，在淋巴瘤中的功能獲得性突變和過(guò)度表達(dá)。同時(shí)，在乳腺癌[6]、膀胱癌[7]、卵巢癌[8]、肝癌[9]、前列腺癌[10]、小細(xì)胞肺癌（SCLC）、黑色素瘤[11]、膠質(zhì)母細(xì)胞瘤和兒童膠質(zhì)瘤[12]等實(shí)體瘤中EZH2表達(dá)明顯高于癌旁組織且與疾病進(jìn)展和不良預(yù)后相關(guān)。相反在骨髓增生異常綜合征（MDS）、MDS/骨髓增殖性疾病（MPN）、骨髓纖維化、急性髓細(xì)胞白血病（AML）和急性T-淋巴細(xì)胞白血?。═-ALL）中的EZH2功能喪失[13-16]。鑒于其在腫瘤發(fā)生和進(jìn)展中的作用，EZH2已成為潛在的抗腫瘤治療靶點(diǎn)[1,17]。

圖1 起始復(fù)合物——多梳蛋白復(fù)合體2核心成分Figure 1 Core components of initiation complexpolycomb protein complex 2

1.2 組蛋白賴(lài)氨酸甲基轉(zhuǎn)移酶致癌機(jī)制

在正常干細(xì)胞中，EZH2通過(guò)抑制譜系指定因子[18-20]來(lái)抑制分化，與非腫瘤細(xì)胞系相比，其在腫瘤干細(xì)胞（CSC）群體中表達(dá)水平更高，且必不可少[21]。EZH2和PRC2在發(fā)育過(guò)程中的功能可能不是促進(jìn)生長(zhǎng)或分化本身，而是抑制轉(zhuǎn)錄過(guò)程[22]。因此，抑制EZH2功能具有高度的細(xì)胞特異性。鑒于EZH2作為轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子的作用，人們一直致力于尋找其驅(qū)動(dòng)轉(zhuǎn)化的下游目標(biāo)。研究證明EZH2位于細(xì)胞周期調(diào)控的視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤——核因子E2（E2 factor，E2F）通路的下游，同時(shí)也參與視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤增殖基因表達(dá)和E2F驅(qū)動(dòng)的增殖過(guò)程[23]。

除在組蛋白修飾和轉(zhuǎn)錄調(diào)控中的作用外，EZH2還可以甲基化非組蛋白底物。EZH2結(jié)合并甲基化信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)及轉(zhuǎn)錄活化因子3（signal transducers and activators of transcription，STAT3），從而提高膠質(zhì)母細(xì)胞瘤中CSC的致瘤性；在前列腺癌模型中，EZH2已經(jīng)被證明甲基化雄激素受體（AR）并調(diào)控AR向EZH2結(jié)合的位點(diǎn)富集[24-25]。綜上所述，EZH2除了具有H3K27組蛋白甲基轉(zhuǎn)移酶和轉(zhuǎn)錄抑制因子的作用外，還能夠甲基化非組蛋白底物如STAT3、鋅指轉(zhuǎn)錄因子（GATA binding protein 4，GATA4）、踝蛋白（Talin）和維甲酸相關(guān)孤兒受體α（retinoic acid related-orphan receptors α，RoRα），從而促進(jìn)轉(zhuǎn)錄沉默和轉(zhuǎn)錄激活；EZH2在轉(zhuǎn)錄激活中可以不依賴(lài)于PRC2，是AR相關(guān)復(fù)合體、核因子κB（nuclear factor kappa-B，NF-κB）、tcf/β-連 環(huán) 蛋白（tcf/β-catenin）、增殖細(xì)胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen，PCNA）、β-連環(huán)蛋白（β-catenin）、雌激素受體α（estrogen receptor，ERα）等轉(zhuǎn)錄因子的共同激活因子[26]。

2 組蛋白賴(lài)氨酸甲基轉(zhuǎn)移酶抑制劑

作為表觀遺傳領(lǐng)域熱門(mén)靶點(diǎn)，EZH2抑制劑已經(jīng)成為抗腫瘤藥物開(kāi)發(fā)的熱點(diǎn)之一。其通過(guò)抑制EZH2過(guò)表達(dá)及突變，達(dá)到抑制腫瘤發(fā)生和發(fā)展的目的。

2.1 組蛋白賴(lài)氨酸甲基轉(zhuǎn)移酶抑制劑分類(lèi)

根據(jù)作用機(jī)制不同，EZH2抑制劑主要分為：1）抑制甲基轉(zhuǎn)移酶的S-腺苷-l-高半胱氨酸水解酶（S-adenosyl-l-homocysteine hydrolase，SAH）水解的酶抑制劑；2）與PRC2復(fù)合物底物S-腺苷甲硫氨酸（S-adenosylmethionine，SAM）競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合的競(jìng)爭(zhēng)抑制劑；3）通過(guò)穩(wěn)定EZH2 α-螺旋結(jié)構(gòu)域破壞EZH2和EED蛋白相互作用的小核酸類(lèi)藥物，代表藥物有ION674。

晶體學(xué)研究表明，在PRC2復(fù)合物的SAM競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑結(jié)構(gòu)中，2-吡啶酮部分是酶抑制的關(guān)鍵，因?yàn)槠湔紦?jù)了酶結(jié)合口袋中共底物SAM（或副產(chǎn)物SAH）的部分位置，解釋了所有2-吡啶酮抑制劑表現(xiàn)出的SAM競(jìng)爭(zhēng)作用機(jī)制。2-吡啶酮彈頭連接到支撐子結(jié)構(gòu)，按支撐子結(jié)構(gòu)主要可分為2類(lèi)：1）簡(jiǎn)單的單環(huán)（雜環(huán)）芳香環(huán)如tazematostat（1）等，2）雙環(huán)雜芳環(huán)，如CPI-1205（2）、DS-3201（3）、SHR2554（4）、PF-06821497（5）、GSK-126（6）EL1（7）和DZNep（8）等。

2.2 組蛋白賴(lài)氨酸甲基轉(zhuǎn)移酶抑制劑的臨床研究

作為表觀遺傳領(lǐng)域新興的抗腫瘤藥物，目前已有1個(gè)藥物已上市，及多個(gè)EZH2抑制劑處于臨床研究階段，表1總結(jié)了目前已上市及進(jìn)入臨床試驗(yàn)階段的EZH2抑制劑。

表1 組蛋白賴(lài)氨酸甲基轉(zhuǎn)移酶抑制劑臨床研究進(jìn)展Table 1 Clinical research progress of EZH2 inhibitors

2.2.1 Tazemetostat Tazemetostat是Epizyme公司研發(fā)的一款Ⅰ類(lèi)EZH2抑制劑，用于治療濾泡性淋巴瘤和不適合完全切除的轉(zhuǎn)移性/局部晚期上皮樣肉瘤（epithelioid sarcoma，ES）患者[27]，已于2020年1月在美國(guó)上市。

體外研究顯示，tazemetostat抑制野生型EZH2抑制常數(shù)（Ki）為（2.5f0.5）nmol · L-1，對(duì) Y646F 突變型淋巴瘤細(xì)胞株 WSU-DLCL2 的 IC50為 32 nmol · L-1[28]。體內(nèi)研究顯示，tzemetostat在體內(nèi)能阻止腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)，并延長(zhǎng)異種原位移植模型的存活時(shí)間。將3種不同基因的人腫瘤細(xì)胞（D556、D425和ONS-76）植入小鼠小腦，D556組、D425組口服2周、ONS-76 組 口 服 4 周 tzemetostat（350 mg · kg-1），Kaplan-Meier曲線顯示，tzemetostat治療顯著提高了3種模型動(dòng)物中位存活時(shí)間，D556組從22.5 d增加到29 d（p= 0.04），ONS-76組從48 d增加到58.5 d（p= 0.000 8），D425組從20.5 d增加到27 d（p= 0.006）[29]。

Ⅰ期臨床研究中64例患者中的23例出現(xiàn)3級(jí)或更嚴(yán)重的不良事件（AE），6例出現(xiàn)3級(jí)或更嚴(yán)重的與治療相關(guān)的AE。AE造成12例患者（19%）發(fā)生藥物中斷，1例患者在最高劑量1 600 mg時(shí)產(chǎn)生4級(jí)血小板減少的劑量限制性毒性。并確定了tzemetostat的Ⅱ期臨床試驗(yàn)中800 mg（bid）口服的劑量，在這項(xiàng)研究中評(píng)估了tzemetostat的抗癌活性，該研究顯示38%的B細(xì)胞非霍奇金淋巴瘤患者和5%的實(shí)體瘤患者均表現(xiàn)出持久的客觀反應(yīng)[30]。

Ⅱ期臨床研究中tzemetostat在r/r濾泡性淋巴瘤（FL）或r/r彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤（DLBCL）患者中表現(xiàn)出高度的臨床活性和持久的反應(yīng)且具有良好的安全性。在EZH2突變的淋巴瘤和野生型EZH2中證實(shí)了tzemetostat的療效：39例EZH2基因突變激活的r/r FL患者客觀緩解率（ORR）為74%，完全應(yīng)答率（CR）為10%。在53例可評(píng)估的EZH2野生型患者中，ORR為34%，CR為6%[31]。在r/r DLBCL患者中，突變型和野生型亞組的ORR均為17%，并且在突變型自回歸模型（auto-regressive model，ARM）中可以看到更長(zhǎng)的應(yīng)答持續(xù)時(shí)間[32]。最近的一項(xiàng)更新數(shù)據(jù)顯示43例EZH2突變患者的ORR為77%[33]。

2.2.2 CPI-1205 CPI-1205是星座制藥公司研發(fā)的一款Ⅱ類(lèi)EZH2抑制劑，目前處于Ⅱ期臨床研究階段，通過(guò)親和閃爍法測(cè)定CPI-1205對(duì)野生型EZH2（WT）的 IC50為 2.2 nmol · L-1，對(duì)突變型 EZH2（641N MT）的 IC50為 3.1 nmol · L-1，海拉細(xì)胞系（HeLa）中 H3K27me3 的 IC50為 32 nmol · L-1[34]。給 荷瘤的雌性CB-17 SCID小鼠經(jīng)口給藥CPI-1205（160 mg ·kg-1，bid），連續(xù)25 d。2周內(nèi)小鼠腫瘤消退，到第25 d結(jié)束時(shí)，記錄到明顯的腫瘤生長(zhǎng)抑制且對(duì)重復(fù)給藥的耐受性良好，沒(méi)有明顯的體質(zhì)量減輕。最后1次給藥1 h后的血漿和腫瘤藥動(dòng)學(xué)分析顯示，CPI-1205在血漿和腫瘤組織中表現(xiàn)出較高濃度[34]。

目前，CPI-1205正進(jìn)行2項(xiàng)臨床試驗(yàn)，其中1項(xiàng)2017年11月15日啟動(dòng)的Ⅰb/Ⅱ期臨床試驗(yàn)，旨在評(píng)估CPI-1205與苯扎魯胺或阿比特龍/強(qiáng)的松聯(lián)合治療轉(zhuǎn)移性去勢(shì)抵抗性前列腺癌（mCRPC）患者。Ⅰb期研究中納入了36例患者：20例服用CPI-1205+阿比特龍，16例服用CPI-1205+苯扎魯胺。數(shù)據(jù)顯示除2例患者無(wú)前列腺特異抗原（PSA）值外，剩余34例患者PSA值均下降50%以上，其中2例服用CPI-1205+阿比特龍和3例服用CPI-1205+恩扎魯胺患者PSA值下降超過(guò)80%；最常見(jiàn)的與治療相關(guān)的AE是疲倦、腹瀉和惡心，CPI-1205與苯扎魯胺聯(lián)合使用時(shí)出現(xiàn)與治療相關(guān)的3級(jí)不良反應(yīng)，包括乏力、惡心和谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）升高（1例出現(xiàn)3級(jí)不良反應(yīng)；占總受試者的6.3%），與阿比特龍聯(lián)合使用時(shí)出現(xiàn)與治療相關(guān)的3級(jí)不良反應(yīng)，包括乏力和ALT升高（1例，5%）；確定了Ⅱ期臨床試驗(yàn)中800 mg（tid）口服的劑量[35]。Ⅱ期臨床試驗(yàn)旨在評(píng)估CPI-1205與大鼠肉瘤病毒同源癌基因激酶（rat sarcoma viraloncogenehomolog，RAS）抑制劑聯(lián)合作為治療mCRPC患者的二線藥物的作用。另一項(xiàng)是2017年12月14日啟動(dòng)的Ⅰ/Ⅱ期試驗(yàn)，旨在評(píng)估CPI-1205 +伊匹單抗聯(lián)合治療晚期實(shí)體瘤患者（NCT03525795）[36]。

2.2.3 CPI-0209 CPI-0209是星座制藥公司研發(fā)的第2代Ⅱ類(lèi)EZH2抑制劑，旨在延長(zhǎng)保留時(shí)間，與第1代抑制劑相比，其不會(huì)產(chǎn)生自身誘導(dǎo)作用而使半衰期縮短。目前處于Ⅱ期臨床研究階段。體外針對(duì) EZH2（WT）的 IC50為 0.18 nmol · L-1；對(duì) HeLa細(xì)胞中 H3K27me3 的 IC50為 2.3 nmol · L-1；細(xì)胞色素P450 3A4酶（CYP3A4）上調(diào)水平降低50%，體外數(shù)據(jù)較CPI-1205均提高90%以上。在淋巴瘤異種移植模型中，經(jīng)口給藥CPI-0209（25 mg · kg-1，qd）使腫瘤體積縮小，并且在治療結(jié)束后表現(xiàn)出持久的客觀反應(yīng)。從第5 d至第19 d，腫瘤的體積約從250 mm3減少到0 mm3，而對(duì)照組的腫瘤體積從第5 d的250 mm3增加到第19 d的800 mm3和第29 d的1 750 mm3（治療結(jié)束）。在雄激素受體剪接變異體7（androgen receptor splice variant 7，AR-V7）+前列腺癌異種移植模型中，口服 CPI-0209（100 mg · kg-1，bid）顯示出高度活性[37]。2019年9月18日CPI-0209單藥及聯(lián)合治療晚期實(shí)體瘤的Ⅰ/Ⅱ期研究正式啟動(dòng)（NCT04104776），將患者分為2組，一組單獨(dú)使用CPI-0209，一組與伊立替康聯(lián)合使用，截至2021年4月該項(xiàng)研究仍在推進(jìn)中[38]。

2.2.4 Valemetostat Valemetostat（DS-3201）是第一三共制藥公司研發(fā)的一款新型的Ⅱ類(lèi)EZH1/2雙重抑制劑，目前處于Ⅱ期臨床研究階段。它能同時(shí)抑制EZH1/2的酶活性，對(duì)多種非霍奇金淋巴瘤（NHL）細(xì)胞，如DLBCL、套細(xì)胞淋巴瘤和外周T細(xì)胞淋巴瘤（PTCL）均有抗增殖作用，細(xì)胞活性GI50小于100 nmol · L-1，此外，體外劑量遞增研究表明，在SMARCB1(SNF5)突變的惡性橫紋肌樣瘤（G-401）、ARID1A突變的卵巢透明細(xì)胞癌（TOV-21G）和BAP1突變的間皮瘤（NCI-H226）的細(xì)胞模型中，DS-3201均顯示出較高的抗增殖活性（IC50< 100 nmol · L-1）[39]。

Ⅰ期臨床數(shù)據(jù)顯示口服DS-3201b的ORR為53%（8/15），CR1例，部分緩解（PR）7例，200 mg（qd）和300 mg（qd）劑量時(shí)出現(xiàn)3例4級(jí)血小板計(jì)數(shù)下降，1例3級(jí)貧血和1例3級(jí)肺炎的嚴(yán)重AE。除血液毒性外，其他不良反應(yīng)還包括排便障礙、腹瀉、鼻咽炎、脫發(fā)、皮疹、食欲下降和皮膚干燥等[40]。2019年最新研究顯示，有13例患者接受了T細(xì)胞擴(kuò)增隊(duì)列的治療，其中7例成人T細(xì)胞白血病/淋巴瘤（ATLL）患者和6例PTCL患者都接受了200 mg的纈氨蝶呤治療。在登記到Ⅰ期和擴(kuò)展隊(duì)列的ATLL患者中，ORR為44 %，9例患者中有5例繼續(xù)治療超過(guò)12周[41]。2019年11月一項(xiàng)名為DS-3201治療復(fù)發(fā)或難治性ATLL的Ⅱ期臨床研究在美國(guó)和日本被批準(zhǔn)（NCT04102150）；2020年8月DS-3201和伊匹單抗聯(lián)合治療轉(zhuǎn)移性前列腺癌、尿道上皮細(xì)胞和腎細(xì)胞癌的Ⅰb期臨床試驗(yàn)在美國(guó)被批準(zhǔn)（NCT04388852），以上2項(xiàng)臨床試驗(yàn)截至2021年4月均處于患者招募中。

2.2.5 SHR2554 SHR2554是江蘇恒瑞醫(yī)藥股份有限公司開(kāi)發(fā)的一款口服Ⅱ類(lèi)EZH2抑制劑，適應(yīng)證主要為非霍奇金淋巴瘤、去勢(shì)難治性前列腺癌等，目前處于Ⅱ期臨床研究階段。體外研究顯示，SHR2554對(duì)彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞株（Pfeffier）IC50為 2 nmol · L-1；對(duì)突變 EZH2（A677G）的 IC50為6.4 nmol · L-1。2018年8月于北大腫瘤醫(yī)院?jiǎn)?dòng)了SHR2554治療復(fù)發(fā)/難治性淋巴瘤的Ⅰ期臨床試驗(yàn)（NCT03603951）；2018年11月，復(fù)旦腫瘤醫(yī)院?jiǎn)?dòng)SHR2554單獨(dú)/聯(lián)合SHR3680治療mCRPC的Ⅰ/Ⅱ期臨床試驗(yàn)（NCT03741712）；2020年5月復(fù)旦腫瘤醫(yī)院?jiǎn)?dòng)了治療轉(zhuǎn)移性乳腺癌的Ⅱ期臨床試驗(yàn)（NCT04355858）。2020年9月，解放軍總醫(yī)院?jiǎn)?dòng)了SHR2554聯(lián)合SHR1701治療晚期實(shí)體瘤和B細(xì)胞淋巴瘤的Ⅰ/Ⅱ期臨床試驗(yàn)（NCT04407741）。

2.2.6 PF-06821497 PF-06821497是輝瑞公司研發(fā)的一種有效的具有選擇性的EZH2Ⅱ類(lèi)抑制劑，目前處于Ⅰ期臨床研究階段。2018年4月17日該化合物在一項(xiàng)多中心的Ⅰ期研究（NCT03460977）中進(jìn)行評(píng)估，研究對(duì)象為去勢(shì)抵抗性前列腺癌（CRPC）患者（PF-06821497+苯扎魯胺）、小細(xì)胞肺癌患者（PF-06821497+順鉑或卡鉑+依托泊苷）和FL患者[42]。

體外研究發(fā)現(xiàn)PF-06821497對(duì)野生型和突變型Y641N-EZH2 的Ki均小于 0.1 nmol · L-1[43]，并具有較好的EZH2抑制活性、親脂配體效率（LIPE）、體外代謝穩(wěn)定性和通透性。其體外多層線性模型（hierarchical linear model，HLM）穩(wěn)定性為每毫克蛋白39μL · min-1，在體外人體肝細(xì)胞評(píng)估中穩(wěn)定性為每百萬(wàn)細(xì)胞12μL · min-1，晶型的熱力學(xué)溶解度為315 mg · L-1（在25℃的含0.5%羧甲基纖維素和0.1%聚山梨酯80的水中）。針對(duì)EZH2的野生型和Y641N突變體，miR-23a靶結(jié)合的半衰期分別為22和6 h。

體內(nèi)研究發(fā)現(xiàn)，給攜帶Karpas-422 DLBCL腫瘤異種移植瘤（包含Y641N EZH2突變）的小鼠口服 PF-06821497（bid），口服劑量為 100 mg · kg-1可顯著抑制腫瘤生長(zhǎng)或口服劑量為300 mg · kg-1時(shí)腫瘤消退，每日皮下注射100 mg · kg-1劑量時(shí)，效果更好，且對(duì)體質(zhì)量影響較小[43]。

2.2.7 HH-2853 HH-2853是上海海和藥業(yè)研發(fā)的一款口服Ⅱ類(lèi)EZH1/2雙重抑制劑，用于晚期實(shí)體瘤，D彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤，濾泡性淋巴瘤等患者的治療，目前處于Ⅰ期臨床研究階段。體外研究顯示，HH-2853在野生型EZH2和突變型EZH2 （Y641F）中IC50值均小于100 nmol · L-1。2020年3月獲美國(guó)FDA新藥臨床研究申請(qǐng)（investigational new drug，IND）默示許可，2020年8月其一項(xiàng)名為HH-2853安全性和臨床藥效的Ⅰ期臨床試驗(yàn)（NCT04390737）在我國(guó)獲批準(zhǔn)，旨在評(píng)估EZH1/2抑制劑HH-2853在Ⅰ期及劑量遞增中對(duì)復(fù)發(fā)/難治性非霍奇金淋巴瘤或晚期實(shí)體腫瘤患者的安全性、耐受性、藥動(dòng)學(xué)和臨床療效。確定最大耐受劑量（MTD）和推薦的Ⅱ期劑量（RP2D），截至2021年4月處于患者招募期[44]。

2.2.8 GSK-126 GSK-126是葛蘭素史克公司研發(fā)的一款Ⅱ類(lèi)EZH2抑制劑，在Ⅰ期臨床試驗(yàn)結(jié)束后停止，體外研究發(fā)現(xiàn)GSK-126抑制皮膚淋巴瘤（B-NHL）中H3K27的三甲基化，而與EZH2激活突變的存在與否無(wú)關(guān)[45]。像B-NHL細(xì)胞系一樣，GSK-126在AML和T細(xì)胞系中抑制H3K27me3的濃度比停止增殖和誘導(dǎo)凋亡所需的濃度低90%以上；4個(gè)EZH2GOFmuB-NHL細(xì)胞系中的3個(gè)（KARPAS-422、SU-DHL-6、WSU-DLCL2） 在 用GSK-126 處理后停止增殖，IC50為 2 ~ 10 nmol · L-1；低 濃 度 的 GSK-126（400 nmol · L-1） 不 僅 減 少 了DLBCL細(xì)胞系PFEIFFER中H3K27的甲基化，也導(dǎo)致了生長(zhǎng)停滯[46]。體內(nèi)研究發(fā)現(xiàn)，在負(fù)荷KARPAS-422和Pfeiffer異種移植的小鼠體內(nèi)，GSK126 經(jīng) 口 給 藥 150 mg · kg-1· d-1時(shí) 降 低 總 體H3K27me3水平，增加基因表達(dá)，從而引起顯著的腫瘤消退[47]。

Ⅰa期臨床研究的數(shù)據(jù)顯示，入組的41例患者（實(shí)體瘤21例，淋巴瘤20例）均發(fā)生至少1例AE。最常見(jiàn)的不良反應(yīng)是乏力（22/41，53.7%）和惡心（20/41，48.8%）。12例患者（32%）經(jīng)歷了嚴(yán)重的AE。服用3 000 mg GSK-126的7例患者中有2例出現(xiàn)了肝轉(zhuǎn)氨酶劑量限制性升高；因此2 400 mg被確定為MTD。使用劑量比例評(píng)估的藥代動(dòng)力學(xué)研究表明，GSK-126用量越大受試者出現(xiàn)限制性毒性的比例越大。然而，在第15 d，2 400 mg以下的所有劑量的谷值都低于體外蛋白質(zhì)結(jié)合調(diào)節(jié)的抑制三甲基化的IC50（H3K27me3）。在耐受劑量下不能實(shí)現(xiàn)生物有效暴露，抗癌活性極低。說(shuō)明GSK-126不是針對(duì)EZH2難治性/復(fù)發(fā)性實(shí)體和血液惡性腫瘤患者的可行藥物[48]。

2.2.9 ION674 ION674是蘇州瑞博生物技術(shù)股份有限公司從美國(guó)小核酸公司Ionis Pharmaceuticals,Inc引進(jìn)的一款小核酸類(lèi)EZH2抑制劑，用于淋巴瘤的治療，目前處于臨床前研究階段。體外研究顯示，此藥對(duì)EZH2基因敲除HeLa細(xì)胞系、純合子細(xì)胞（MZ-3776）的 IC50為 20 ~ 60 nmol · L-1、對(duì)人皮膚鱗癌細(xì)胞（A431）的IC50< 60 nmol · L-1、對(duì)人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞（SHSY）的 IC50< 500 nmol · L-1、對(duì)神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞Kelly的IC50< 80 nmol · L-1。在CD1小鼠中測(cè)試化合物耐受性良好，肝功能、腎功能指標(biāo)正常；組織質(zhì)量較空白組無(wú)明顯變化。2020年在美國(guó)獲批進(jìn)入Ⅰ期臨床研究階段。

2.2.10 EL1 EL1是諾華公司研發(fā)的一款Ⅱ類(lèi)EZH2的SAM競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑，目前處于臨床前研究階段。它通過(guò)直接與酶結(jié)合并與甲基供體SAM競(jìng)爭(zhēng)來(lái)抑制EZH2酶活性,該化合物對(duì)EZH2野生型和Y641F突變型均表現(xiàn)出濃度依賴(lài)性的抑制作用，IC50分別為（15f2）和（13f3）nmol · L-1。研究發(fā)現(xiàn)EL1處理的細(xì)胞顯示H3K27me2和H3K27me3特異性減少且EZH1和EZH2基因敲除對(duì)H3K27甲基化和增殖的影響相似，下調(diào)PRC2復(fù)合物（如EZH2、EED和SUZ12）的siRNA可破壞該復(fù)合物并阻斷腫瘤細(xì)胞的增殖，EL1在不破壞PRC2染色質(zhì)結(jié)合的情況下抑制EZH2的HMT活性可以阻止腫瘤細(xì)胞的增殖和集落形成。抑制EZH2可能誘導(dǎo)生長(zhǎng)停滯和向記憶B細(xì)胞分化。該研究首次證明了組蛋白H3K27me3的抑制可以在EZH2復(fù)合物與其靶基因不解離的情況下發(fā)生[49]。

2.2.11 HM-97594 HM-97594是韓美（中國(guó)）有限公司研發(fā)的一款小分子EZH1/2雙重抑制劑，可用于治療實(shí)體瘤和血液瘤，目前處于臨床前研究階段。體外研究顯示，HM-9759對(duì)野生型EZH1的IC50為 2.8 nmol · L-1；對(duì)野生型 EZH2 的 IC50為 1.7 nmol · L-1；對(duì)突變型 EZH2（Y641F）的 IC50為 1.3 nmol · L-1。2019年12月，在美國(guó)佛羅里達(dá)州奧蘭多舉行的第61屆美國(guó)血液學(xué)會(huì)（American Society of Hematology，ASH）會(huì)議和博覽會(huì)上公布了體內(nèi)研究結(jié)果：在美國(guó)癌癥研究所（Institute of Cancer Researcch，ICR）小鼠模型中，給予重復(fù)劑量的HM-97594（50 mg · kg-1，qd），小鼠體質(zhì)量、血液參數(shù)以及異常臨床體征方面均無(wú)明顯變化。在攜帶有EZH2 GOF突變的KARPAS-422（sc）異種移植腫瘤的 NOD SCID 小鼠中，HM-97594（25 mg · kg-1，PO，qd）治療21 d后，腫瘤生長(zhǎng)受到明顯抑制，而體質(zhì)量沒(méi)有減輕。

2.2.12 DZNep DZNep是SAH水解酶的抑制劑，通過(guò)阻斷在DNA甲基化過(guò)程中起重要作用的酶S-腺囊肌細(xì)胞水解酶（Ahcy）間接抑制EZH2[50]。目前正處于臨床前研究階段，DZNep已被證明能促進(jìn)各種原發(fā)腫瘤細(xì)胞和癌細(xì)胞株的凋亡[51-56]。應(yīng)用DZNep介導(dǎo)的凋亡效應(yīng)在癌細(xì)胞中更為明顯，對(duì)正常細(xì)胞的影響較小，并通過(guò)抑制H3K27me3標(biāo)記[51,54,57]來(lái)促進(jìn)凋亡。

3 結(jié)語(yǔ)與展望

EZH2對(duì)癌癥有明顯的功能增強(qiáng)作用和直接抑制腫瘤細(xì)胞內(nèi)酶功能的能力，這使其成為了抗腫瘤治療的一個(gè)引人注目的靶點(diǎn)，EZH2通過(guò)功能的獲得、功能的喪失或過(guò)度表達(dá)從而導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生。全球首個(gè)EZH2抑制劑tzemetostat的上市及其良好的安全性和有效性，大大激發(fā)了人們對(duì)EZH2這一高度成熟靶點(diǎn)的研發(fā)熱情，本文總結(jié)了全球已上市和在研的11款EZH2抑制劑研究進(jìn)展。相對(duì)于在惡性血液腫瘤中表現(xiàn)出的高度活性，EZH2抑制劑僅僅對(duì)少數(shù)具有SWI/SNF成員基因突變或者BAP1突變的實(shí)體瘤表現(xiàn)出一定的效果，在大多實(shí)體瘤中EZH2以過(guò)表達(dá)的野生型形式存在，同樣具有H3K27me的催化活性。然而，目前尚不清楚過(guò)表達(dá)的野生型EZH2是否也是癌癥依賴(lài)基因。因此，深入探究腫瘤細(xì)胞對(duì)EZH2抑制劑不敏感的分子機(jī)制及耐藥機(jī)制是增強(qiáng)EZH2抑制劑在實(shí)體瘤中治療效果的關(guān)鍵，也對(duì)新一代EZH2的開(kāi)發(fā)具有指導(dǎo)意義。