王仕平，鄧杰華，謝婷，黃炳泉，周云峰

1.宜春市食品藥品檢驗(yàn)所，江西 宜春 336000；2.宜春市人民醫(yī)院，江西 宜春 336000

隨著社會(huì)快速發(fā)展，生活壓力逐漸增大，陽痿、早泄等性功能障礙男科疾病已成為威脅男性健康的頻發(fā)疾病。該病呈年輕化趨勢發(fā)展，發(fā)病率為32%～80%，患病人數(shù)逐年增長［1-2］。中成藥類及保健品具有改善男性性功能障礙的效果，功效較為溫和，不良反應(yīng)較少，受到廣大男性患者的青睞。但一些不法商家為了追求利益最大化，會(huì)私自在中成藥或保健品中添加非標(biāo)明成分5 型磷酸二酯酶（PDE5）抑制劑［3-4］，增強(qiáng)補(bǔ)腎壯陽效果，達(dá)到暢銷目的。PDE5 抑制劑及其制劑壯陽補(bǔ)腎效果顯著，但不良反應(yīng)居多，需按醫(yī)囑服用，患者在不知情的情況下服用，易產(chǎn)生安全風(fēng)險(xiǎn)［5］?；诖?，本研究擬調(diào)查市售壯陽類中成藥及保健食品的質(zhì)量狀況，采用超高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法建立PDE5抑制劑定性分析方法，對(duì)市售壯陽類中成藥及保健食品進(jìn)行非法添加物快速篩查，對(duì)其安全風(fēng)險(xiǎn)、質(zhì)量水平及現(xiàn)狀進(jìn)行分析，為壯陽類中成藥及保健食品非法添加物檢驗(yàn)檢測方法的建立及打擊非法行為提供實(shí)驗(yàn)參考和思路。

1 材料與方法

1.1 儀器與試藥

Waters Acquity UPLC H-class/xevo TQD 液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀（美國Waters 公司）；TLE 204E 萬分之一電子天平（梅特勒-托利多儀器有限公司）；MS205DU 十萬之一電子天平（梅特勒-托利多儀器有限公司）。

補(bǔ)腎樣品（市售37 批，保健食品32 批，中成藥5 批）；那紅地那非（批號(hào)：520039-201902，純度：98.5%）、紅地那非（批號(hào)：520047-201802，純度：99.9%）、伐地那非（批號(hào)：510169-202001，純度：99.7%）、枸櫞酸羥基豪莫西地那非（批號(hào)：510032-201301，純度：98.8%）、西地那非（批號(hào)：510068-201401，純度：99.9%）、豪莫西地那非（批號(hào)：520046-201401，純度：99.6%）、氨基他達(dá)拉非（批號(hào)：520042-202002，純度：99.5%）、他達(dá)拉非（批號(hào)：510170-202001，純度：99.7%）、硫代艾地那非（批號(hào)：520048-201401，純度：99.5%）、偽伐地那非（批號(hào)：520041-201401，純度：99.0%）、那莫西地那非（批號(hào)：520040-201401，純度：99.5%）均購于中國食品藥品檢定研究院；甲醇、乙腈購于默克股份兩合公司（德國）；乙酸、乙酸銨：賽默飛世爾科技（中國）有限公司；水為摩爾一級(jí)水。

1.2 儀器參數(shù)

1.2.1 色譜條件 色譜柱：Waters ACQUITY UPLC CSH C18（1.7 μm,2.1 mm）×100 mm）；流速：0.4 mL/min；柱溫：30 ℃；進(jìn)樣量：5 μL；流動(dòng)相：A 甲醇，B 乙腈，C 含0.1%乙酸的0.02 mol/L 乙酸銨溶液，梯度洗脫（0～0.8 min、11.0%A、9.0%B，0.8 min～1.30 min、38.5%A、31.5%B，1.30 min～3.00 min、38.5%A、31.5%B，3.00 min～3.50 min、53.9%A、44.1%B，3.50 min～5.00 min、53.9%A、44.1%B，5.00 min～5.10 min、11.0%A、9.0%B，5.10 min～7.50 min、11.0%A、9.0%B）。

1.2.2 質(zhì)譜條件離子源 電噴霧離子源（ESI），正離子掃描模式；掃描方式：多反應(yīng)監(jiān)測（MRM）、子離子掃描（Daughter Scan）；毛細(xì)管電壓：3.00 kV；脫溶劑氣溫度600 ℃；脫溶劑氣流量：1 000 L/h；錐孔氣流量：50 L/h，其他參數(shù)見表1。

表1 多反應(yīng)監(jiān)測質(zhì)譜參數(shù)

1.3 溶液的制備

1.3.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液 標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液：精密稱取羥基豪莫西地那非、硫代艾地那非、伐地那非、豪莫西地那非、西地那非、紅地那非、那紅地那非、那莫西地那非、偽伐地那非、氨基他達(dá)拉非、他達(dá)拉非各約10 mg，置同一100 mL 量瓶中，用適量乙腈溶解并定容至刻度，搖勻，作為標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。

混合標(biāo)準(zhǔn)篩查溶液：精密量取上述混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液0.5 mL，置100 mL 量瓶中，加50%乙腈稀釋至刻度，搖勻，作為混合標(biāo)準(zhǔn)篩查溶液。

1.3.2 供試品溶液 供試品若為固體劑型，取一次服用量，研細(xì)，置50 mL 量瓶中，加乙腈約40 mL，超聲處理15 min，冷至室溫，用乙腈定容至刻度，搖勻，濾過；供試品若為液體制劑，取一次服用量，置50 mL 量瓶中，加乙腈約40 mL，振搖3 min，用乙腈定容至刻度，搖勻，濾過。精密量取續(xù)濾液0.5 mL，至100 mL 量瓶中，加50%乙腈稀釋至刻度，搖勻，濾過，濾液經(jīng)0.22 μm 微孔濾膜過濾，即得。

1.3.3 陰性樣品溶液 取不含有11 種目標(biāo)化合物的樣品，按供試品溶液制備項(xiàng)下操作，制成陰性樣品溶液。

1.3.4 陽性樣品溶液 取不含有11 種目標(biāo)化合物的樣品,加11 種目標(biāo)對(duì)照品適量，按供試品溶液制備項(xiàng)下操作,制成與混合標(biāo)準(zhǔn)篩查溶液濃度大致一致的陽性樣品溶液。

1.4 樣品測定

按上述色譜和質(zhì)譜條件分別對(duì)混合標(biāo)準(zhǔn)篩查溶液和樣品溶液進(jìn)行分析。分別吸取混合標(biāo)準(zhǔn)篩查溶液、供試品溶液、陰性樣品溶液和陽性樣品溶液各5 μL，注入液質(zhì)聯(lián)用儀，記錄離子對(duì)色譜圖和一級(jí)、二級(jí)質(zhì)譜圖。

2 結(jié)果

2.1 混合標(biāo)準(zhǔn)篩查溶液結(jié)果

對(duì)混合標(biāo)準(zhǔn)篩查溶液進(jìn)行LC-MS/MS 分析，得到11 種目標(biāo)化合物的離子對(duì)色譜圖（圖1），每種化合物的離子對(duì)色譜圖均具有較高響應(yīng)。需注意的是，有少量化合物的單個(gè)離子對(duì)出現(xiàn)兩個(gè)峰，這是因?yàn)榛旌蠘?biāo)準(zhǔn)篩查溶液具有結(jié)構(gòu)相似，分子量相近的物質(zhì)，易在相近的時(shí)間出峰。

圖1 對(duì)照品離子對(duì)色譜圖

2.2 檢測限

以信噪比為3∶1 時(shí)的對(duì)照品濃度作為儀器檢測限，羥基豪莫西地那非、硫代艾地那非、伐地那非、豪莫西地那非、西地那非、紅地那非、那紅地那非、那莫西地那非、偽伐地那非、氨基他達(dá)拉非、他達(dá)拉非的檢出限分別為0.47、0.52、0.30、0.90、0.17、0.22、0.11、0.15、0.27、0.23、0.10 ng/mL。

2.3 樣品結(jié)果

分別對(duì)空白溶劑、陰性樣品、陽性樣品和供試品溶液進(jìn)行分析，結(jié)果表明，空白溶劑及陰性樣品未出現(xiàn)與對(duì)照品離子對(duì)保留時(shí)間一致的色譜峰，空白溶劑及陰性樣品中成分對(duì)測定無干擾，陽性樣品出現(xiàn)與11 種目標(biāo)化合物離子對(duì)保留時(shí)間一致的色譜峰，質(zhì)譜響應(yīng)良好。所抽取的37 批樣品有5 批中成藥，32 批保健食品，主要有片劑、丸劑、膠囊劑和合劑等劑型，5 批中成藥均未檢出西地那非，32 批保健食品中有31 批樣品中出現(xiàn)與西地那非離子對(duì)保留時(shí)間一致的色譜峰，為進(jìn)一步確認(rèn)，對(duì)西地那非對(duì)照品溶液和31 批供試品溶液進(jìn)行子離子掃描質(zhì)譜分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，西地那非對(duì)照品溶液和供試品溶液的一級(jí)質(zhì)譜準(zhǔn)分子離子峰均為475，對(duì)照品西地那非的主要碎片離子為377、311、283、100、58，樣品溶液均出現(xiàn)上述離子碎片，基本可以判定32 批保健食品中有31 批檢出西地那非，檢出率96.9%。

對(duì)被檢出西地那非的樣品進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)被檢出西地那非的樣品工藝粗制濫造，處方中多種成分混合不均勻，膠囊劑掰開及片劑、丸劑研細(xì)可明顯看到亮白色結(jié)晶。其使用說明書宣稱處方含有名貴的動(dòng)植物藥材，如瑪咖、淫羊藿、鹿鞭及虎鞭等，但通過顯微鑒別、化學(xué)鑒別、薄層色譜、液相色譜等技術(shù)手段發(fā)現(xiàn)，大多數(shù)樣品的主要成分為蔗糖、淀粉、糊精、食用色素及價(jià)格低廉的中藥材，質(zhì)量水平較低。

3 討論

3.1 風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估

中成藥及保健食品中禁止非法添加化學(xué)藥物。西地那非商品名為“萬艾可”，是一種PDE5 抑制劑，法定處方藥，主治男性勃起性功能障礙，效果顯著［6］，但會(huì)出現(xiàn)頭痛、潮紅、消化不良、鼻塞及視覺異常等不良反應(yīng)［7］，嚴(yán)重副作用會(huì)導(dǎo)致陰莖異常勃起出現(xiàn)永久性損傷、單眼或雙眼突然視力喪失及突發(fā)聽力減退或聽力喪失等［8-10］。根據(jù)中國疾病預(yù)防控制中心的最新數(shù)據(jù)，我國高血壓患者人數(shù)已達(dá)2.45 億，平均每4 個(gè)成年人中就有1 人是高血壓患者，一般都要長期吃藥保持血壓穩(wěn)定。而西地那非具有擴(kuò)張血管的作用，可使血壓下降。高血壓患者治療期間在不知情的情況下服用該藥物，會(huì)導(dǎo)致血壓劇烈波動(dòng)，持續(xù)下降，如正在服用硝酸酯類藥物的患者誤服西地那非，患者的血壓可能會(huì)突然下降甚至危及生命［11］。因此，西地那非一旦脫離醫(yī)生指導(dǎo)而隨意服用，對(duì)服用者的健康和生命安全將造成嚴(yán)重威脅，37 批樣品中有31 批檢出西地那非，被檢出西地那非的樣品的使用說明書均未標(biāo)明含有西地那非成分，西地那非的擅自加入將會(huì)對(duì)使用者尤其是老年人帶來極大風(fēng)險(xiǎn)。

3.2 現(xiàn)狀分析

隨著科技發(fā)展，藥品、食品的檢測檢驗(yàn)方法水平不斷提升，藥品、食品中的非法添加物可快速準(zhǔn)確檢出。但通過歷年抽檢調(diào)查發(fā)現(xiàn)，中成藥及保健食品中添加化學(xué)藥物現(xiàn)象屢禁不止，愈演愈烈，這次調(diào)查的27 家企業(yè)竟有22 家生產(chǎn)企業(yè)頂風(fēng)作案，違規(guī)添加西藥西地那非，且違規(guī)添加西地那非的均為保健食品。追其原因大致分為以下幾個(gè)方面：一、藥品監(jiān)管比較成熟，監(jiān)管力度較大，近幾年都有非法添加專項(xiàng)整治，非法添加情況較少，而保健食品處在監(jiān)管的空隙，監(jiān)管較為薄弱。二、保健品市場規(guī)模巨大，據(jù)前瞻產(chǎn)業(yè)研究院發(fā)布的《2021——2026年中國保健品行業(yè)市場前瞻與投資規(guī)劃分析報(bào)告》，2019 年中國保健品行業(yè)的市場規(guī)模達(dá)到3 965 億元，2020 年保健品行業(yè)的市場規(guī)模保守估計(jì)為4 092 億元，2026 年行業(yè)市場規(guī)模將會(huì)達(dá)到約5 178 億元，龐大的市場帶來巨大的利益。三、保健品行業(yè)準(zhǔn)入門檻較低，大量食品生產(chǎn)企業(yè)、跨界企業(yè)紛紛進(jìn)入保健品市場，各企業(yè)良莠不齊，許多企業(yè)根本不進(jìn)行產(chǎn)品研發(fā)，而是仿制已有保健品并進(jìn)行大量廣告宣傳，可迅速增加銷售并獲取巨額利潤。四、營銷手段高明，如補(bǔ)腎保健品大多數(shù)外包裝印制精美，中文說明較少，外文介紹較多，會(huì)讓患者產(chǎn)生是高檔進(jìn)口產(chǎn)品假象，同時(shí)使用說明書夸大其詞且附有大量淫穢圖片，更會(huì)讓患者產(chǎn)生購買欲望。五、制假、摻假成本較低，所使用的原材料價(jià)格低廉，制成產(chǎn)品后賣出，利潤一般能達(dá)到幾十倍甚至上百倍，摻入西藥后，產(chǎn)品效果更是顯著增強(qiáng)，達(dá)到暢銷目的。六、監(jiān)管處罰力度不夠，食品藥品安全領(lǐng)域行政執(zhí)法與刑事司法“兩法”銜接工作中面臨違法與犯罪界限不明、證據(jù)標(biāo)準(zhǔn)不統(tǒng)一的問題［12］，往往出現(xiàn)以罰代管、以罰代刑的現(xiàn)象，不少企業(yè)直接將此作為成本計(jì)算到產(chǎn)品中，在巨大的利益面前基本無視處罰。

3.3 小結(jié)

本研究建立的UPLC-MS/MS 法可對(duì)壯陽類中成藥及保健食品中11 種PDE5 抑制劑進(jìn)行快速篩查，專屬性較好。所抽取的37 批樣品中有31 批檢出西地那非成分，檢出率為83.8%。市售補(bǔ)腎類中成藥及保健食品中化學(xué)藥物的非法添加情況嚴(yán)重，安全風(fēng)險(xiǎn)較高，質(zhì)量水平較低，尤其是保健食品。廣大患者需謹(jǐn)慎使用補(bǔ)腎產(chǎn)品，建議購買正規(guī)知名廠家產(chǎn)品，對(duì)于服后立馬見效的產(chǎn)品需警惕化學(xué)藥物的加入，同時(shí)相關(guān)執(zhí)法部門需加大、加重對(duì)非法添加行為的打擊力度，真正傷及不法商家根本，凈化市場環(huán)境，促進(jìn)中藥類等保健品行業(yè)健康穩(wěn)定發(fā)展，保證老百姓安全。