劉 寧 張柏林 張麗娟 朱 敏 郝美林 宋培勇 姚 欣 許潤芳

(遵義師范學院生物與農業(yè)科技學院，赤水河流域特色動物資源保護與利用重點實驗室，遵義 523006)

我國不但是禽蛋生產大國，也是禽蛋及其制品的消費大國。雞蛋營養(yǎng)成分豐富，且營養(yǎng)素組成平衡，具有較高的生物學價值，是人們膳食的重要組成部分[1]。蛋品質是影響消費者購買雞蛋的重要因素。近年來，隨著人們消費觀念的轉變，消費者更傾向于購買蛋白濃厚、蛋黃顏色較深、個體較大、質量好的雞蛋[2]。研究表明，蛋品質受蛋雞健康水平、飼糧營養(yǎng)及飼養(yǎng)環(huán)境等多種因素的影響[3]。并且，蛋品質與輸卵管的形態(tài)變化有關[4]。因而生產上通常采用營養(yǎng)調控的措施來改善蛋品質及維護蛋雞機體健康[5]。

綠茶富含茶多酚(tea polyphenol，TP)，約占茶葉干重的30%。TP是一種天然的活性抗氧化物質，可以清除許多系統(tǒng)產生的活性氧自由基，保護細胞免受損害[6]，維護動物機體健康。研究發(fā)現，在蛋雞飼糧中添加綠茶提取物可提高產蛋后期產蛋量、飼料效率和改善蛋品質[7]。并且，飼糧添加TP有利于改善機體的抗氧化狀態(tài)[8]。因而，通過飼糧添加TP來維護機體健康和改良蛋品質也受到越來越多研究者的關注。但是，有關TP對蛋品質影響的結果卻不盡相同。盧垚[9]選用48周齡羅曼粉蛋雞作為研究對象，在其飼糧中添加0、150、200、250、300和350 mg/kg的TP，結果顯示，飼糧添加TP對蛋雞生長性能及蛋品質均沒有顯著影響。Ding等[10]研究表明，飼糧添加400 mg/kg的TP能夠顯著增加雞蛋的蛋白高度和哈夫單位。而汪小紅[11]研究表明，飼糧添加400 mg/kg的TP對雞蛋的蛋白高度、哈夫單位沒有顯著影響。但到目前為止，有關TP對綠殼蛋雞蛋品質及輸卵管健康的影響鮮有報道。因此，本試驗選用180日齡長順綠殼蛋雞為研究對象，在其飼糧中添加不同水平的TP，探討其對長順綠殼蛋雞生產性能、蛋品質、血漿抗氧化指標及輸卵管形態(tài)的影響，為TP在蛋雞實際生產中的應用提供理論依據。

1 材料與方法

1.1 試驗設計及飼養(yǎng)管理

長順綠殼蛋雞由遵義市稼林合作社永杰綠色養(yǎng)殖場提供。選擇180日齡健康狀況良好的長順綠殼蛋雞240只，隨機分為3個組，每組10個重復，每個重復8只雞。對照組飼喂基礎飼糧，試驗組分別在基礎飼糧的基礎上額外添加200和400 mg/kg的TP(純度≥95%)。TP添加量參照何柳青[1]。預試期1周，正試期8周。

所有雞只進行半開放式立體3層籠養(yǎng)，每天早、中、晚各喂料1次，整個試驗期雞只飼喂粉料，自由采食和飲水。飼糧參照我國《雞飼養(yǎng)標準》(NY/T 33—2004)配制，基礎飼糧組成及營養(yǎng)水平見表1。

表1 基礎飼糧組成及營養(yǎng)水平(風干基礎)Table 1 Composition and nutrient levels of the basal diet (air-dry basis) %

續(xù)表1項目Items含量Content磷酸氫鈣CaHPO41.40石粉Limestone8.60氯化膽堿Cholinechloride0.10植酸酶Phytase0.02食鹽NaCl0.30預混料Premix1)1.00合計Total100.00營養(yǎng)水平Nutrientlevels2)代謝能ME/(MJ/kg)11.47粗蛋白質CP16.63賴氨酸Lysine0.78蛋氨酸+半胱氨酸Methionine+cystine0.68鈣Ca3.50有效磷AP0.34

1.2 試驗儀器

電子天平(FA-1004，上海精密科學儀器有限公司)；紫外可見分光光度計(UV-759，上海精密科學儀器有限公司)；低溫高速離心機(2-16KL，美國Sigma公司)；掌式離心機(LX 400，海門市其林貝爾儀器制造有限公司)；漩渦混勻器(QL-901，海門市其林貝爾儀器制造有限公司)；游標卡尺(IP54，南京蘇測計量儀器有限公司)；羅氏比色扇(EA-01，北京天域飛翔儀器設備有限公司)；蛋白高度測定儀(EA-Q1，北京天祥飛域科技有限公司)；智能型分光測試儀(YS3010，深圳市三恩馳科技有限公司)。

1.3 血液樣品采集

試驗結束前1天，所有雞只進行12 h禁飼處理，自由飲水。于試驗結束當天08：00每個組選擇10只雞(每個重復1只雞)進行翅下靜脈采血，至盛有肝素鈉包被的離心管中，然后在3 000 r/min條件下離心10 min，收集上清并分裝，置于-20 ℃保存待測。

1.4 測定指標與方法

1.4.1 生產性能

試驗期間每天按重復記錄產蛋總數、總蛋重、采食量和飼料消耗量，以重復為單位計算產蛋率、平均蛋重、平均日采食量和料蛋比，計算公式如下：

產蛋率=100×每個重復試驗期產蛋總數/(每個重復雞只數×試驗天數)；平均蛋重=每個重復試驗期總蛋重/產蛋數；平均日采食量=每個重復試驗期采食量/試驗天數；料蛋比=每個重復試驗期飼料消耗量/總蛋重。

1.4.2 蛋品質

以重復為單位在第4和8周末收集雞蛋，每個重復收集10枚雞蛋，于收集后48 h內測定蛋品質，具體測定指標如下。

蛋黃顏色：將蛋黃分離在培養(yǎng)皿中，用羅氏比色扇進行對比評分，每個蛋黃均由3位不同的評分者進行評分，計算平均值作為蛋黃顏色值。

蛋白指數和蛋黃指數：用分析天平分別稱量雞蛋的總重(g)、蛋黃重(g)和蛋白重(g)。按下列公式進行計算。

蛋黃指數(%)=(蛋黃重/蛋總重)×100；蛋白指數(%)=(蛋白重/蛋總重)×100。

蛋殼厚度：將雞蛋的鈍端、中部、銳端的蛋殼剔除內殼膜后，用游標卡尺分別測定3次，取其平均值。

蛋殼顏色：用分光測色儀在雞蛋的銳端、中間和鈍端分別進行測定其亮度(L*)、紅度(a*)及黃度(b*)值，然后計算各部位的平均值。

蛋形指數：用游標卡尺分別測量蛋的縱徑(mm)和橫徑(mm)。按下列公式進行計算。

蛋形指數=縱徑/橫徑。

哈夫單位：將雞蛋打碎后放于蛋白高度測定儀上，避開系帶，取蛋黃邊緣與濃蛋白邊緣的3點，3個點之間形成正三角形，測量其濃蛋白高度，然后取平均值。按下列公式進行計算。

哈夫單位=100×log(H-1.7×W0.37+7.57)。

式中：H代表蛋白高度(mm)；W代表蛋重(g)。

1.4.3 血漿抗氧化指標

采用試劑盒測定血漿谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)活性和葡萄糖(GLU)、丙二醛(MDA)含量以及總抗氧化能力(T-AOC)，操作規(guī)程按照試劑盒說明書進行，所用試劑盒購自南京建成生物工程研究所。

1.4.4 輸卵管形態(tài)

在試驗結束當天，雞只血液采集后立即宰殺，打開腹腔，采集2 cm左右的輸卵管膨大部，置于4%甲醛溶液中進行固定保存。切取1 cm左右固定好的組織放入包埋盒中，流水沖洗24 h。然后依次通過梯度酒精溶液及二甲苯溶液，最后置于60 ℃石蠟中進行包埋。制作石蠟切片，并進行蘇木精-伊紅溶液染色。采集輸卵管膨大部圖片，用Image Pro plus 6.0軟件測量輸卵管膨大部絨毛高度(μm)和絨毛寬度(μm)。

1.5 數據處理

數據采用SPSS 25.0軟件進行單因素方差分析(one-way ANOVA)，若差異顯著則采用Duncan氏法進行多重比較。試驗數據以“平均值±標準差”表示。P<0.05為差異顯著，0.05

2 結 果

2.1 飼糧添加TP對長順綠殼蛋雞生產性能的影響

如表2所示，與對照組相比，飼糧添加200和400 mg/kg的TP均顯著降低了1～4周蛋雞的平均蛋重和平均日采食量(P<0.05)，但對料蛋比沒有顯著影響(P>0.05)。并且，與對照組相比，飼糧添加400 mg/kg的TP顯著降低了5～8周蛋雞的平均日采食量(P<0.05)，有降低料蛋比的趨勢(P=0.057)，但對平均蛋重沒有顯著影響(P>0.05)。然而，與對照組相比，飼糧添加200 mg/kg的TP對5～8周蛋雞的平均蛋重、平均日采食量和料蛋比均沒有顯著影響(P>0.05)。與對照組相比，飼糧添加200和400 mg/kg的TP對1～8周蛋雞的平均蛋重、平均日采食量及料蛋比均沒有顯著影響(P>0.05)。飼糧添加200和400 mg/kg的TP對1～4周、5～8周和1～8周蛋雞的產蛋率均沒有顯著影響(P>0.05)。

表2 飼糧添加TP對長順綠殼蛋雞生產性能的影響Table 2 Effects of dietary TP on performance of Changshun green-shell laying hens

2.2 飼糧添加TP對長順綠殼蛋雞蛋品質的影響

如表3所示，與對照組相比，飼糧添加400 mg/kg的TP顯著提高了第4和8周雞蛋的哈夫單位和蛋黃顏色(P<0.05)，但對蛋黃指數、蛋殼顏色(a*、b*和L*值)、蛋白指數和蛋形指數沒有顯著影響(P>0.05)。此外，飼糧添加400 mg/kg的TP顯著增加了第8周雞蛋的蛋殼厚度(P<0.05)。然而，與對照組相比，飼糧添加200 mg/kg的TP顯著提高了第4和8周雞蛋的哈夫單位(P<0.05)，但對第4和8周雞蛋的其他蛋品質指標沒有顯著影響(P>0.05)。

表3 飼糧添加TP對長順綠殼蛋雞蛋品質的影響Table 3 Effects of dietary TP on egg quality of Changshun green-shell laying hens

2.3 飼糧添加TP對長順綠殼蛋雞血漿抗氧化指標的影響

如表4所示，與對照組相比，飼糧添加200 mg/kg的TP對蛋雞血漿MDA和GLU含量均沒有顯著影響(P>0.05)。然而，飼糧添加400 mg/kg的TP顯著降低了蛋雞血漿MDA含量(P<0.05)，但對血漿GLU含量沒有顯著影響(P>0.05)。與對照組相比，飼糧添加200和400 mg/kg的TP均顯著提高了血漿GSH-Px和SOD活性(P<0.05)，顯著增加了血漿T-AOC(P<0.05)。并且，與飼糧添加200 mg/kg的TP相比，飼糧添加400 mg/kg的TP顯著增加了血漿GSH-Px活性(P<0.05)。

表4 飼糧添加TP對長順綠殼蛋雞血漿抗氧化指標的影響Table 4 Effects of dietary TP on plasma antioxidant parameters of Changshun green-shell laying hens

2.4 飼糧添加TP對長順綠殼蛋雞輸卵管形態(tài)的影響

如圖1所示，對照組輸卵管膨大部皺襞出現了大量的管狀腺體萎縮，腺體內可見較多的散在空泡，表面纖毛較稀疏，僅見少量的分泌顆粒。200 mg/kg TP組輸卵管膨大部皺襞較對照組稍有改善，有部分的管狀腺體萎縮，腺體內有少量的散在空泡，僅見少量的分泌顆粒。400 mg/kg TP組未見腺體萎縮，可見大量的分泌顆粒。

如圖2所示，與對照組相比，飼糧添加200 mg/kg的TP對蛋雞輸卵管膨大部絨毛高度和絨毛寬度均沒有顯著影響(P>0.05)。然而，與對照組相比，飼糧添加400 mg/kg的TP顯著增加了蛋雞輸卵管膨大部絨毛高度和絨毛寬度(P<0.05)。200 mg/kg TP組與400 mg/kg TP組蛋雞輸卵管膨大部絨毛高度和絨毛寬度均沒有顯著差異(P>0.05)。

3 討 論

3.1 飼糧添加TP對長順綠殼蛋雞生產性能的影響

本研究發(fā)現，與對照組相比，飼糧添加400 mg/kg的TP顯著降低了1～4周長順綠殼蛋雞的平均日采食量和平均蛋重，顯著降低了5～8周長順綠殼蛋雞的平均日采食量，有降低料蛋比的趨勢。與此相似，汪小紅[11]以海蘭灰蛋雞進行研究發(fā)現，飼糧添加400 mg/kg的TP降低了1～4周蛋雞的平均蛋重和4～8周蛋雞的料蛋比。何俊金等[12]選用480羽65周齡羅曼粉殼蛋雞作為試驗對象，在飼糧中分別添加666、1 333和2 666 mg/kg的TP(含量為63.58%)，結果表明，飼糧添加高水平TP(1 333和2 666 mg/kg)均可降低蛋雞的生產性能，主要表現為平均蛋重的下降和料蛋比的增加。此外，研究表明，飼糧添加5%和10%綠茶粉則會顯著降低蛋雞的平均蛋重[13]。Xia等[14]選用20周齡仙居雞為研究對象，在飼糧中分別添加1%、2%和3%的綠茶粉(綠茶粉中TP含量為16.52%)，結果表明，飼糧添加2%綠茶粉對蛋雞平均蛋重和平均日采食沒有顯著影響，而飼糧添加3%綠茶粉顯著降低了蛋雞平均蛋重和平均日采食量。以上結果提示，飼糧添加高水平的TP對蛋雞生產性能產生了不利影響。這可能是由于添加高水平的TP降低了飼糧的適口性(TP具有苦澀味)，進而影響了采食量。并且生產性能與營養(yǎng)及能量水平具有顯著的相關性[15]，而采食量的降低可能造成了養(yǎng)分及能量攝入的不足，最終引起生產性能的下降。另外，TP中兒茶素抑制了腸道對脂肪的吸收和脂肪合酶活性，蛋黃脂質形成受阻[13,16]，進而影響蛋重。此外，綠茶提取物也可能通過降低血漿脂蛋白含量，增加肝臟脂蛋白酯酶活性而降低蛋重[17]。

數據柱標相同小寫字母表示差異不顯著(P>0.05)，不同小寫字母表示差異顯著(P<0.05)。Value columns with the same small letter mean no significant difference (P>0.05),while with different small letters mean significant difference (P<0.05).圖2 飼糧添加TP對長順綠殼蛋雞輸卵管膨大部絨毛高度和絨毛寬度的影響Fig.2 Effects of dietary TP on villus height and villus width in oviduct magnum of Changshun green-shell laying hens

E：單層柱狀上皮細胞 simple columnar epithelium；G：管狀腺細胞 tubular gland cell。圖1 飼糧添加TP對長順綠殼蛋雞輸卵管膨大部皺襞形態(tài)的影響Fig.1 Effects of dietary TP on magnum morphology of oviduct folds of Changshun green-shell laying hens

3.2 飼糧添加TP對長順綠殼蛋雞蛋品質的影響

哈夫單位是衡量雞蛋內在品質的重要指標。本試驗結果顯示，飼糧添加200和400 mg/kg的TP顯著提高了第4和8周雞蛋的哈夫單位和蛋黃顏色，但對蛋品質的其他指標沒有顯著影響。有研究報道，飼糧添加3%綠茶粉顯著增加了雞蛋的蛋黃顏色[14]。王人悅[18]研究表明，飼糧添加400 mg/kg的TP顯著增加了雞蛋的蛋黃顏色，這可能是由于TP促進了機體對色素類物質的吸收。Ding等[10]研究表明，飼糧添加400 mg/kg的TP顯著增加了雞蛋的哈夫單位和蛋白高度。Biswas等[19]研究同樣表明，飼糧添加0.3%綠茶粉能夠提高雞蛋的哈夫單位。以上結果提示，飼糧添加綠茶粉或TP有助于改善雞蛋的蛋白品質，這可能是由于飼糧添加綠茶粉或TP有助于蛋清中β-卵黏蛋白的形成[20]，而β-卵黏蛋白通過參與蛋白質和多糖復合物的形成而改善蛋白品質[21]。但何柳青[1]選用810只44周齡健康的綠殼蛋雞為試驗對象，結果發(fā)現，飼糧添加200和400 mg/kg的TP對雞蛋的哈夫單位和蛋黃顏色沒有影響，這可能是由于雞只日齡不同引起。

3.3 飼糧添加TP對長順綠殼蛋雞血漿抗氧化指標的影響

GSH-Px和SOD是動物體內清除體內自由基的主要酶系統(tǒng)[18]，其活性增高可以有效抑制動物機體氧自由基的生成和脂質過氧化。MDA作為脂質過氧化的終產物之一，其含量可以作為脂質過氧化程度的檢測指標[22]。T-AOC是衡量機體抗氧化系統(tǒng)功能狀況的綜合性指標，可反映機體抗氧化酶系統(tǒng)和非酶系統(tǒng)對外來刺激的代償能力以及機體自由基代謝狀態(tài)的強弱[23]。研究證實，TP具有良好的抗氧化特性，能夠清除體內的游離自由基，阻止脂質抗氧化，改善體內抗氧化酶活性[24]。本研究發(fā)現，飼糧添加TP增加了血漿T-AOC，降低了血漿MDA含量，提高了血漿GSH-Px和SOD活性。有研究報道，TP可以誘導GSH-Px、SOD等抗氧化物酶的生成，并激活體內抗氧化物酶系統(tǒng)，從而提高機體的抗氧化能力[25]，這與本研究的結果一致。胡經緯等[26]研究證實，飼糧添加TP顯著增加了蛋雞血漿GSH-Px和SOD活性。李忠浩等[27]研究同樣發(fā)現，飼糧添加TP增加了蛋雞血漿GSH-Px和SOD活性，降低了血漿MDA含量。以上結果提示，飼糧添加TP可提高蛋雞抗氧化性能，主要原因如下：1)TP能夠清除體內超氧陰離子自由基及羥基自由基，減少脂質過氧化物含量，從而減輕體內脂質受活性氧自由基攻擊的損害[1]；2)TP能激活體內抗氧化酶及其轉錄系統(tǒng)，從而提高機體抗氧化能力；3)TP可再生和保護體內非特異性抗氧化物質維生素C和維生素E，能夠與金屬離子絡合，抑制以金屬離子介導或催化的相關脂蛋白氧化和氧化酶的表達，降低機體的氧化損傷[28-29]。

3.4 飼糧添加TP對長順綠殼蛋雞輸卵管形態(tài)的影響

輸卵管膨大部是蛋白合成和分泌的重要場所。因此，輸卵管膨大部的健康情況影響著雞蛋的蛋白品質。各種應激源、營養(yǎng)失衡和持續(xù)高產等因素都會對蛋雞輸卵管造成氧化損傷[30]。TP通常包含2個以上的羥基，可以提供活性氫并有效清除體內多余的活性氧自由基[31]，從而維護輸卵管健康。研究證實，TP具有抗氧化性及抗炎癥反應的特性，有利于蛋雞的健康[32-33]。并且，飼糧添加TP增加了輸卵管膨大部褶皺高度，有利于改善輸卵管膨大部形態(tài)[20]。本研究結果顯示，飼糧添加400 mg/kg的TP改善了蛋雞輸卵管膨大部黏膜形態(tài)，顯著增加了輸卵管膨大部絨毛高度和絨毛寬度，但飼糧添加200 mg/kg的TP對輸卵管膨大部黏膜形態(tài)無顯著影響。這提示TP對輸卵管膨大部形態(tài)的改善作用具有一定的劑量依賴性。本研究也發(fā)現，飼糧添加400 mg/kg的TP顯著改善了雞蛋的哈夫單位，說明輸卵管膨大部褶皺高度可能是影響蛋白形成的重要因素[4]。這也與TP對輸卵管膨大部形態(tài)的改善相一致，這可能與TP的抗氧化性有關。

4 結 論

飼糧添加TP降低了長順綠殼蛋雞的平均日采食量和平均蛋重，但改善了雞蛋的哈夫單位和蛋黃顏色，提高了蛋雞的抗氧化性能，有利于改善輸卵管膨大部的形態(tài)，其中以400 mg/kg添加水平較好。