汪春明 ,張洋 ,王姝葦 ,施鵬斐 ,吳迪 ,常利民 ,楊波 ,尹峰
[中檢科(北京)測(cè)試技術(shù)有限公司,北京 100123; 2.中國檢驗(yàn)檢疫科學(xué)研究院綜合檢測(cè)中心,北京 100123]
茄子起源于亞洲,是我國一種重要的茄果類蔬菜。我國是茄子的第一大生產(chǎn)國,擁有極豐富的地方品種[1]。茄子的營養(yǎng)價(jià)值高,食用方式多樣,深受廣大消費(fèi)者的歡迎[2],其質(zhì)量和安全問題也備受關(guān)注。我國GB 2763—2019 《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中農(nóng)藥最大殘留限量》[3]中對(duì)果蔬中農(nóng)藥殘留限量做了詳細(xì)規(guī)定,以保障消費(fèi)者的食品安全。曹哲峰[4]等對(duì)包含茄子在內(nèi)的91個(gè)茄果類蔬菜樣品中農(nóng)藥的殘留情況進(jìn)行檢測(cè),結(jié)果表明茄果類蔬菜總體農(nóng)藥殘留超標(biāo)情況比較嚴(yán)重。做好農(nóng)藥殘留監(jiān)控工作是保護(hù)人民生命安全、提高農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量和品牌效應(yīng)、增強(qiáng)農(nóng)產(chǎn)品市場(chǎng)競(jìng)爭(zhēng)力的強(qiáng)有力保障[5]。
能力驗(yàn)證是利用實(shí)驗(yàn)室間比對(duì),按照預(yù)先制定的準(zhǔn)則來評(píng)價(jià)參加者的能力[6-8],是實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量保證的重要手段,有助于實(shí)驗(yàn)室評(píng)價(jià)和證明其測(cè)量數(shù)據(jù)可靠性,發(fā)現(xiàn)自身存在的問題,改進(jìn)實(shí)驗(yàn)室的技術(shù)能力和管理水平。英國分析實(shí)驗(yàn)?zāi)芰︱?yàn)證公司(Food Analysis Performance Assessment Scheme,F(xiàn)APAS),是目前國際食品領(lǐng)域中權(quán)威的能力驗(yàn)證提供者,提供全球食品領(lǐng)域中最大、最全面的分析化學(xué)水平測(cè)試評(píng)估計(jì)劃[9]。參加FAPAS能力驗(yàn)證并得到有效滿意的結(jié)果,是判斷實(shí)驗(yàn)室驗(yàn)證或校準(zhǔn)該項(xiàng)目能力的標(biāo)準(zhǔn),也是中國合格評(píng)定國家認(rèn)可委員會(huì)(CNAS)判斷實(shí)驗(yàn)室能力的重要技術(shù)依據(jù)[10]。實(shí)驗(yàn)室作為參加能力驗(yàn)證的主體,需基于自身需求和外部對(duì)能力驗(yàn)證的要求,在綜合考慮內(nèi)部質(zhì)控水平、人員能力、設(shè)備狀況、風(fēng)險(xiǎn)、運(yùn)行成本等因素的基礎(chǔ)上,合理策劃并積極尋求適當(dāng)?shù)哪芰︱?yàn)證計(jì)劃?;谧陨硇枨螅緦?shí)驗(yàn)室參加FAPAS 19302茄子中農(nóng)藥殘留篩查能力驗(yàn)證。結(jié)合FAPAS 19302能力驗(yàn)證結(jié)果,對(duì)本次能力驗(yàn)證過程中的準(zhǔn)備工作、樣品前處理的選擇與優(yōu)化、定量結(jié)果的分析討論、分析檢測(cè)過程中遇到的問題及解決的思路進(jìn)行總結(jié),為食品檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室農(nóng)藥殘留的檢測(cè)提供參考。
液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀:EXionLC-QTRAP 5500型,美國AB SCIEX公司。
氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀:Agilent 7890-7000型,美國安捷倫科技有限公司。
分 析 天 平:XS105型,d=0.1 mg;PL303型,d=0.001 g,瑞士梅特勒-托利多集團(tuán)。
旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀:N1000型,日本東京理化器械株式會(huì)社。
渦旋混勻器:VORTEX GENIE 2,美國Scientific Industries公司。
振蕩器:SR-2DS型,日本TAITEC公司。
超純水系統(tǒng):Milli-Q型,美國密理博公司。
氮吹儀:EVA50A型,中國普立泰科公司。
能力驗(yàn)證樣品:FAPAS英國總部提供的茄子測(cè)試樣品。
乙腈、甲酸、正己烷、丙酮、乙酸乙酯:色譜純,美國費(fèi)希爾公司。
氯化鈉:分析純,國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。
分散固相萃取凈化管:Cleanert MAS-Q型,15 mL(300 mg C18、300 mg PSA、900 mg MgSO4),天津博納艾杰爾科技有限公司。
氮?dú)猓后w積分?jǐn)?shù)為99.999%,北京東方醫(yī)用氣體有限公司。
氦氣:體積分?jǐn)?shù)為99.999%,霸州市安興氣體有限公司。
霜霉威(質(zhì)量分?jǐn)?shù)為97.1%)、嘧菌酯(質(zhì)量分?jǐn)?shù)為98.7%)、溴氰菊酯(質(zhì)量分?jǐn)?shù)為99.7%)、二苯胺(質(zhì)量分?jǐn)?shù)為99.56%)、特丁硫磷亞砜(質(zhì)量分?jǐn)?shù)為96.3%):英國政府化學(xué)家實(shí)驗(yàn)室。
克百威(1 000 μg/mL)、胺菊酯(質(zhì)量分?jǐn)?shù)為99.5%):北京曼哈格生物科技有限公司。
1.2.1 溶液配制
胺菊酯、二苯胺和溴氰菊酯混合標(biāo)準(zhǔn)中間溶液:以丙酮為溶劑,配制成胺菊酯、二苯胺和溴氰菊酯質(zhì)量濃度均為10 μg/mL和1.0 μg/mL的兩種混合標(biāo)準(zhǔn)中間溶液。
嘧菌酯、克百威、霜霉威和特丁硫磷亞砜混合標(biāo)準(zhǔn)中間溶液:以乙腈為溶劑,配制成嘧菌酯、克百威、霜霉威和特丁硫磷亞砜質(zhì)量濃度均為10 μg/mL和1.0 μg/mL兩種混合標(biāo)準(zhǔn)中間溶液。
選擇S/N<3,且不含目標(biāo)農(nóng)藥的樣品作為空白,按照1.2.2節(jié)進(jìn)行前處理制得空白樣品基質(zhì)溶液。
LC-MS/MS用系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液:分別移取1.0 μg/mL嘧菌酯、克百威、霜霉威和特丁硫磷亞砜混合標(biāo)準(zhǔn)中間溶液 10、20、50、100、200、300、400、500 μL于8只10 mL容量瓶,用乙腈定容至標(biāo)線;將8份2 mL空白基質(zhì)溶液氮?dú)獯蹈桑謩e加入1 mL上述工作溶液復(fù)溶,即得到嘧菌酯、克百威、霜霉威和特丁硫磷亞砜質(zhì)量濃度均分別為1、2、5、10、20、30、40、50 ng/mL 系列基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。
GC-MS/MS用系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液:分別移取1.0 μg/mL胺菊酯、二苯胺和溴氰菊酯混合標(biāo)準(zhǔn)中間溶液 50、100、200、500 μL 和 10 μg/mL 的混合標(biāo)準(zhǔn)中間溶液 100、150、200、300 μL 于 8 只 10 mL容量瓶中,由丙酮-正己烷(體積比為1∶1,下同)定容至標(biāo)線;將8份10 mL空白基質(zhì)溶液氮?dú)獯蹈?,分別加入1 mL上述工作溶液復(fù)溶,即得到胺菊酯、二苯胺和溴氰菊酯質(zhì)量濃度均分別為5、10、20、50、100、150、200、300 ng/mL 系列基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。
1.2.2 樣品制備
(1)樣品粉碎。按照 GB 2763[3]的相關(guān)規(guī)定抽取有代表性的空白樣品,用高速勻漿機(jī)粉碎后裝入自封袋中備用。能力驗(yàn)證樣品為FAPAS英國總部提供的茄子測(cè)試樣品,冷凍(藏)包裝,樣品編號(hào)19032,運(yùn)輸?shù)竭_(dá)實(shí)驗(yàn)室時(shí),包裝完好,樣品已解凍(FAPAS作業(yè)指導(dǎo)書表示不影響檢測(cè))。
(2)提取。稱取粉碎后的樣品5.00 g(精確至0.01 g)于50 mL具塞離心管,加入20 mL酸化乙腈(乙酸體積分?jǐn)?shù)為 0.5%),2.0 g NaCl,振蕩 20 min,以5 000 r/min轉(zhuǎn)速離心3 min,上清液轉(zhuǎn)入雞心瓶中,樣品再次用20 mL酸化乙腈按上述步驟提取,合并兩次上清液,于40 ℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮至近干,用乙腈定容至50 mL容量瓶中。
(3)濃縮、換相。LC-MS/MS:取2 mL提取液到接收管中,用40 ℃氮?dú)鉂饪s至近干,用1 mL乙腈-水(3∶7)復(fù)溶,渦旋30 s,超聲20 s,過0.2 μm尼龍膜,裝瓶,待LC-MS/MS測(cè)定。
GC-MS/MS:取10 mL提取液到接收管中,用40 ℃氮?dú)鉂饪s至近干,用1 mL丙酮-正己烷(1∶1)復(fù)溶,渦旋 30 s,超聲 20 s,裝入 2 mL 離心管中于 12 000 r/min 離心 3 min,裝瓶,待 GC-MS/MS測(cè)定。
1.2.3 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜條件
(1)液相色譜條件。色譜柱:ACQUITY UPLC BEH C18柱(100 mm×2.1 mm,1.7 μm,美國沃特世公司);柱溫:40 ℃;進(jìn)樣體積:3.0 μL;流動(dòng)相:A為0.1%甲酸溶液,B為乙腈,流量為0.3 mL/min;梯度洗脫程序:0~1.0 min為10%B,1.0~2.8 min為10%~90%B,2.8~4.8 min 為 90%B,4.8~5.3 min 為90%~10%B,5.3~6.8 min為10%B。
(2)質(zhì)譜條件。電噴霧正離子模式(ESI+);多反應(yīng)監(jiān)測(cè)(MRM);氣簾氣:氮?dú)?,壓力?.207 MPa;碰撞氣:氮?dú)猓瑝毫镸edium;電噴霧電壓:5 500 V;離子源溫度:500 ℃;噴霧器壓力:0.345 MPa;輔助加熱器壓力:0.345 MPa;駐留時(shí):間60 ms;入口電壓:10 V;各化合物監(jiān)測(cè)離子對(duì)、碰撞能量見表1。
表1 種農(nóng)藥監(jiān)測(cè)離子對(duì)及碰撞能量
1.2.4 氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜條件
(1)氣相色譜條件。色譜柱:HP-5MS UI色譜柱(30 m×0.25 mm,0.25 μm,美國安捷倫科技有限公司);進(jìn)樣口溫度:280 ℃;進(jìn)樣體積:1.0 μL ;載氣:氦氣;質(zhì)譜傳輸線溫度:280 ℃;程序升溫:60 ℃,保持1 min,以40 ℃/min升至170 ℃,再以10 ℃/min升至310 ℃,保持6 min。
(2)質(zhì)譜條件。離子源為電子轟擊源(EI+);多反應(yīng)監(jiān)測(cè)(MRM)模式;碰撞氣:氮?dú)?;離子源溫度:300 ℃;各化合物監(jiān)測(cè)離子對(duì)、碰撞能量見表2。
表2 種農(nóng)藥監(jiān)測(cè)離子對(duì)及碰撞能量
接收樣品時(shí)需首先對(duì)樣品狀態(tài)進(jìn)行確認(rèn),包括樣品的內(nèi)外包裝是否完好,運(yùn)輸時(shí)是否符合樣品的運(yùn)輸條件。根據(jù)作業(yè)指導(dǎo)書,確認(rèn)樣品標(biāo)簽與指導(dǎo)書編號(hào)是否相對(duì)應(yīng),樣品所需的儲(chǔ)存條件、此次能力驗(yàn)證的分析項(xiàng)及殘留標(biāo)示物或代謝物、推薦的檢測(cè)方法、最小取樣量、樣品復(fù)原的方法,以及上報(bào)時(shí)的結(jié)果表示、材料要求、上報(bào)方式與時(shí)間等。
樣品確認(rèn)無誤后進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)。在配制標(biāo)準(zhǔn)溶液時(shí)應(yīng)雙人配制,一人配制,一人監(jiān)督。新配制的標(biāo)準(zhǔn)溶液可與現(xiàn)有的舊標(biāo)準(zhǔn)溶液在儀器上進(jìn)行對(duì)比,以保證標(biāo)準(zhǔn)品濃度的準(zhǔn)確性。選擇干凈無污染的實(shí)驗(yàn)器具,稱取1份考核樣品,按最低取樣量取樣進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。在前處理時(shí)可通過不同的提取、凈化、濃縮方法以及不同的實(shí)驗(yàn)人員進(jìn)行比對(duì),通過做試劑空白、基質(zhì)空白、添加定量限水平的標(biāo)準(zhǔn)品測(cè)定回收率等方法監(jiān)控實(shí)驗(yàn)的可行性。通過在不同類型的儀器上,以及在同一類型的不同儀器上進(jìn)行對(duì)比測(cè)定,保證儀器的穩(wěn)定性和精密度。通過不同的定量方式,如外標(biāo)法、內(nèi)標(biāo)法等,保證檢測(cè)數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性。實(shí)驗(yàn)過程中每一步都需有詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)記錄。
在確定實(shí)驗(yàn)方法和考核樣品中分析項(xiàng)目的濃度范圍后,進(jìn)行正式實(shí)驗(yàn)。正式實(shí)驗(yàn)需稱取4份考核樣品,其中3份為平行實(shí)驗(yàn),1份為樣品加標(biāo),加標(biāo)量應(yīng)為樣品中分析項(xiàng)目濃度的1~1.5倍;稱取3份空白樣品,其中1份為基質(zhì)空白,2份為空白加標(biāo),加標(biāo)量與樣品加標(biāo)的加標(biāo)量相同。如樣品量充足,可重復(fù)實(shí)驗(yàn)2~3次,以保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確。實(shí)驗(yàn)過程也需有完整的原始記錄。
整理所有的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù),確定上報(bào)的結(jié)果,并根據(jù)作業(yè)指導(dǎo)書的要求確認(rèn)結(jié)果的表示與計(jì)算方法、采用的單位以及有效數(shù)字的保留位數(shù)。做好相關(guān)的記錄,包括填寫測(cè)試結(jié)果質(zhì)量控制記錄、實(shí)驗(yàn)記錄和保存原始譜圖等。
數(shù)據(jù)上報(bào)后等待結(jié)果的反饋。若反饋結(jié)果為滿意,分析實(shí)驗(yàn)過程中的收獲與不足,為下一次能力驗(yàn)證提供經(jīng)驗(yàn)。若反饋結(jié)果為不合格,則需要通過翻看實(shí)驗(yàn)記錄、原始譜圖等進(jìn)行全流程的原因查找,分析實(shí)驗(yàn)過程中存在的問題,并填寫不符合工作記錄、糾正措施實(shí)施計(jì)劃及跟蹤報(bào)告和整改報(bào)告,為下一次能力驗(yàn)證提供參考。
2.2.1 檢測(cè)項(xiàng)目盲篩
(1)農(nóng)藥篩選。這次FAPAS測(cè)試樣品涉及到290種農(nóng)藥及其代謝物。本實(shí)驗(yàn)室現(xiàn)有標(biāo)準(zhǔn)品296種,但是并未完全覆蓋這次FAPAS樣品所涉及的290種農(nóng)藥及其代謝物,鑒于此,筆者只用自身現(xiàn)有的標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行篩選。
(2)樣品前處理方法。
稱取3.00 g樣品(精確至0.01 g)于50 mL具塞離心管,加入20 mL乙腈,2.0 g NaCl,振蕩20 min,5 000 r/min轉(zhuǎn)速離心 3 min,上清液轉(zhuǎn)入雞心瓶中,樣品再次用20 mL乙腈按上述步驟提取,合并兩次上清液,將上清液于40 ℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮至近干,用乙腈定容至10 mL容量瓶中。
取2 mL提取液到接收管中,于40 ℃氮?dú)鉂饪s至近干,用1 mL乙腈-水(3∶7)復(fù)溶,渦旋30 s,超聲20 s,過0.2 μm尼龍膜裝瓶,待LC-MS/MS測(cè)定篩選。
取4 mL提取液到接收管中,于40 ℃氮?dú)鉂饪s至近干,用1 mL丙酮-正己烷(1∶1)復(fù)溶,渦旋30 s,超聲 20 s,以 12 000 r/min 轉(zhuǎn)速離心 3 min,裝瓶,待GC-MS/MS測(cè)定篩選。
(3)目標(biāo)農(nóng)藥確定。在1.2.3和1.2.4儀器工作條件下進(jìn)行測(cè)定,最終確定此次的目標(biāo)農(nóng)藥有7種,分別是霜霉威、克百威、特丁硫磷亞砜、嘧菌酯、溴氰菊酯、二苯胺、胺菊酯。
2.2.2 提取溶劑的優(yōu)化
農(nóng)殘檢測(cè)常用的提取溶劑有酸化乙腈[11-15]、乙腈[16-25]、乙酸乙酯[26]、正己烷[27-28]、丙酮[26]及其它不同比例混合提取液[29-31]。正己烷在提取非極性農(nóng)藥、基質(zhì)簡單樣品時(shí)提取效率較高,本實(shí)驗(yàn)為茄子中多種農(nóng)藥殘留篩查,故而排除正己烷。以空白茄子為基質(zhì),按0.1 mg/kg添加篩查出的7種混合標(biāo)準(zhǔn)溶液,比較酸化乙腈(含0.5%乙酸,體積分?jǐn)?shù))、乙腈、丙酮-正己烷(1∶1)、乙酸乙酯、丙酮5種提取溶劑對(duì)回收率的影響。
分別稱取15份各5.0 g茄子于50 mL具塞離心管,分別加入20 mL 5種不同的提取溶劑(酸化乙腈(含0.5%乙酸,體積分?jǐn)?shù))、乙腈、丙酮-正己烷(1∶1)、乙酸乙酯、丙酮,每種提取溶劑作3個(gè)平行樣,一共15份),分別加入2.0 g NaCl,振蕩20 min,以5 000 r/min離心3 min,上清液轉(zhuǎn)入雞心瓶中,樣品再次用20 mL乙腈按上述步驟提取,合并兩次上清液,將上清液于40 ℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮至近干,分別用對(duì)應(yīng)的5種提取溶劑定容至50 mL容量瓶。然后按1.2.2(3)進(jìn)行操作。
其中以丙酮作為提取溶劑,合并兩次上清液后不能旋蒸至干,筆者認(rèn)為足量的丙酮能使茄子中蛋白、脂質(zhì)類成分溶解出來,而這些成分又不易揮發(fā),干擾后期檢測(cè),故而舍棄丙酮作為提取溶劑。其余4種提取溶劑的回收率見圖1。
圖1 不同提取溶劑下目標(biāo)農(nóng)藥的回收率
由圖1可知,當(dāng)用正己烷-丙酮、乙酸乙酯作為提取溶劑時(shí),霜霉威的回收率只有5.4%和9.8%;當(dāng)用乙酸乙酯提取時(shí),溴氰菊酯的回收率為145%,回收率偏高;以乙腈和酸化乙腈作為提取溶劑時(shí),回收率都能滿足方法驗(yàn)證學(xué)要求。綜合考慮,選擇酸化乙腈作為提取溶劑。
2.2.3 基質(zhì)效應(yīng)
基體通常會(huì)對(duì)目標(biāo)物的分析產(chǎn)生較為明顯的干擾,并影響分析結(jié)果的準(zhǔn)確性,這些干擾或影響被稱為基質(zhì)效應(yīng)[32]?;|(zhì)效應(yīng)的強(qiáng)弱與被研究基體種類有關(guān),不同農(nóng)藥在不同基質(zhì)中,產(chǎn)生的基質(zhì)效應(yīng)不同;基質(zhì)效應(yīng)還與被分析物本身的結(jié)構(gòu)、濃度等理化性質(zhì)相關(guān);外部環(huán)境如分析過程中使用的緩沖溶液、試劑、前處理方法等也會(huì)對(duì)基質(zhì)效應(yīng)產(chǎn)生影響[33]。因此有必要對(duì)基質(zhì)效應(yīng)進(jìn)行評(píng)價(jià)。分別繪制溶劑標(biāo)準(zhǔn)曲線和基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)曲線,用以評(píng)價(jià)方法的基質(zhì)效應(yīng),基質(zhì)效應(yīng)系數(shù)η=(基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率-溶劑標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率)/溶劑標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率。當(dāng)|η|<10%時(shí),表明無明顯的基質(zhì)效應(yīng);反之,則具有明顯的基質(zhì)增強(qiáng)或減弱效應(yīng)[34]。分別按1.2.3和1.2.4儀器條件測(cè)定1.2.1配制的系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液,得到的擬合線性方程見表3。
表3 線性方程與基質(zhì)效應(yīng)
由表3可知,胺菊酯、溴氰菊酯、克百威的基質(zhì)效應(yīng)系數(shù)分別為55.9%、59.9%、-34.5%,有明顯的基質(zhì)效應(yīng),因此采用基質(zhì)匹配線性方程對(duì)胺菊酯、溴氰菊酯、克百威進(jìn)行定量分析。
2.2.4 凈化方式
基于QuEChERS原則[35]的經(jīng)典樣品處理方法,已被廣泛應(yīng)用于農(nóng)藥多殘留、獸藥多殘留、生物毒素、非法添加及其它有毒有害污染物檢測(cè)。結(jié)合待研究基質(zhì)簡單的特點(diǎn),本研究對(duì)基于QuEChERS原則的樣品處理方法進(jìn)行考察,常用的凈化填料有硅膠鍵和碳十八(C18)、N-丙基乙二胺(PSA)、石墨化碳黑(GCB)、NaCl鹽析、無水MgSO4除水。其中C18去除脂肪和脂類等非極性干擾物;PSA主要用來凈化各種有機(jī)酸、金屬離子、色素以及一些糖類、酚類和脂肪酸;GCB去除色素、甾醇類非極性干擾物。GCB本身獨(dú)特的平面結(jié)構(gòu)可與色素發(fā)生不可逆吸附,與此同時(shí)GCB會(huì)對(duì)某些平面結(jié)構(gòu)的農(nóng)藥像嘧菌環(huán)胺、多菌靈、吡嗪酮、噻菌靈、百菌清和蠅毒磷造成25%左右的損失。由于茄子樣品色素含量較少,故排除GCB。
樣品按1.2.2(2)提取,取12 mL提取液至15 mL Cleanert MAS-Q凈化管中,振蕩5 min使凈化完全,以5 000 r/min離心 5 min,之后按1.2.2(3)進(jìn)行處理,然后按1.2.3、1.2.4測(cè)定,結(jié)果見表4。
Cleanert MAS-Q凈化管只含有300 mg PSA、300 mg C18和 900 mg MgSO4。MgSO4只除水分,對(duì)目標(biāo)化合物的影響不大,故再考察PSA和C18對(duì)7種目標(biāo)化合物的影響。分別用PSA和C18進(jìn)行凈化后測(cè)定,結(jié)果見表4。
表4 不同凈化方式和凈化填料對(duì)回收率的影響(n=3)
由表4可知,經(jīng)過QuEChERS填料凈化之后,霜霉威回收率為37.3%,二苯胺回收率為78.1%;在沒有基質(zhì)干擾的情況下,經(jīng)過PSA凈化的目標(biāo)化合物回收率為67.6%~94.9%;經(jīng)過C18凈化的回收率為31.9%~99.7%,其中霜霉威、溴氰菊酯、胺菊酯的回收分別為31.9%、41.1%和43.7%,無法滿足方法驗(yàn)證學(xué)要求。
樣品經(jīng)過凈化,影響了目標(biāo)化合物的回收,綜合以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果和茄子基質(zhì)較為簡單的特點(diǎn),故本實(shí)驗(yàn)采用直接提取、不凈化的方式。
按1.2.2、1.2.3和1.2.4節(jié)進(jìn)行樣品前處理和儀器測(cè)定,一共測(cè)定3次,每次3個(gè)平行,得到的數(shù)據(jù)見表5。
由表5可知:(1)腈嘧菌酯(嘧菌酯)、克百威、霜霉威和特丁硫磷亞砜3次測(cè)定結(jié)果較為接近,且每次測(cè)定結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差小于5.2%,結(jié)果穩(wěn)定可靠。通過3次測(cè)定結(jié)果與3次測(cè)定結(jié)果的平均值對(duì)比發(fā)現(xiàn),第3次的測(cè)定結(jié)果更加接近3次測(cè)定結(jié)果的平均值,故選擇第3次作為上報(bào)數(shù)值。
表5 能力驗(yàn)證樣品測(cè)定結(jié)果
(2)胺菊酯、二苯胺和溴氰菊酯3次測(cè)定結(jié)果相差較大,且相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差在6.9%~29.5%之間。結(jié)合GC-MS/MS一批序列中同一樣品測(cè)定結(jié)果越來越低的異?,F(xiàn)象,決定不予上報(bào)。另外,讓人費(fèi)解的現(xiàn)象是兩臺(tái)GC-MS/MS多次運(yùn)行同一樣品,得到的結(jié)果都呈下降的趨勢(shì)。由此帶來兩個(gè)問題:(1)平行測(cè)定數(shù)據(jù)相差大,筆者分取15份5 mL空白樣品,分別加入50 μL 1.0 μg/mL混合標(biāo)準(zhǔn)溶液,在40 ℃下氮?dú)獯抵两?,分別由1 mL正己烷(3份)、丙酮(3份)、乙腈(3份)、正己烷-丙酮(1∶1)(3份)、乙酸乙酯(3份)復(fù)溶,用GC-MS/MS測(cè)定并計(jì)算回收率。由結(jié)果可知,不同復(fù)溶溶劑對(duì)平行測(cè)定數(shù)值的影響不大,其中乙腈復(fù)溶的回收率及平行性略好于其它復(fù)溶溶劑,乙腈歸為極性溶劑,對(duì)本次所用的非極性色譜柱不友好。(2)儀器測(cè)定數(shù)值下降,儀器粗略可分為進(jìn)樣系統(tǒng)、分離系統(tǒng)、質(zhì)譜部分。儀器自動(dòng)調(diào)諧,調(diào)諧參數(shù)顯示儀器正常;更換全新色譜柱,下降現(xiàn)象依然存在;清洗進(jìn)樣口,更換襯管,平行測(cè)定數(shù)據(jù)趨于穩(wěn)定。后期進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)、分析,認(rèn)為不管是每次的平行之間,還是這3次測(cè)定結(jié)果之間,測(cè)定結(jié)果相差較大的原因是“襯管”沒有達(dá)到質(zhì)量要求。
根據(jù)FAPAS公布的此次能力驗(yàn)證的結(jié)果顯示,樣品19032茄子中多種農(nóng)藥殘留篩查中,腈嘧菌酯(嘧菌酯)、克百威、霜霉威和特丁硫磷亞砜的通過率分別為98%、95%、85%和83%,筆者上報(bào)數(shù)值與FAPAS賦值基本接近,見表6,Z值在0.3~0.6之間,本次比對(duì)結(jié)果為“滿意”。
表6 FAPAS賦值、上報(bào)值及能力驗(yàn)證結(jié)果(Z值)
此次FAPAS能力驗(yàn)證的難點(diǎn)在于農(nóng)藥涵蓋的范圍廣、數(shù)量多,一般實(shí)驗(yàn)室難以具備如此數(shù)量的標(biāo)準(zhǔn)品儲(chǔ)備。好在FAPAS不強(qiáng)制性要求參試機(jī)構(gòu)把所有的農(nóng)藥項(xiàng)目都一一檢測(cè)出來,并準(zhǔn)確賦值。參試實(shí)驗(yàn)室只需檢測(cè)自身能力范圍內(nèi)、FAPAS供試樣品所含農(nóng)藥,且上報(bào)數(shù)值位于整體上報(bào)數(shù)值的合理范圍內(nèi),即可以通過此次能力驗(yàn)證。
茄子中的農(nóng)藥經(jīng)過0.5%乙酸乙腈提取,分取提取液后濃縮,換相,上機(jī)檢測(cè),結(jié)果的Z值在0.3~0.6之間,評(píng)價(jià)結(jié)果為“滿意”。
通過參加FAPAS茄子中多種農(nóng)藥殘留篩查能力驗(yàn)證所做的準(zhǔn)備工作、基本分析流程和關(guān)鍵操作方法技巧,分析檢測(cè)過程中遇到的問題及解決問題的思路,為其它實(shí)驗(yàn)室參加諸如FAPAS農(nóng)藥殘留能力驗(yàn)證工作提供經(jīng)驗(yàn)參考。