汪春明 ，張洋 ，王姝葦 ，施鵬斐 ，吳迪 ，常利民 ，楊波 ，尹峰

[中檢科（北京）測(cè)試技術(shù)有限公司，北京 100123； 2.中國檢驗(yàn)檢疫科學(xué)研究院綜合檢測(cè)中心，北京 100123]

茄子起源于亞洲，是我國一種重要的茄果類蔬菜。我國是茄子的第一大生產(chǎn)國，擁有極豐富的地方品種［1］。茄子的營養(yǎng)價(jià)值高，食用方式多樣，深受廣大消費(fèi)者的歡迎［2］，其質(zhì)量和安全問題也備受關(guān)注。我國GB 2763—2019 《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中農(nóng)藥最大殘留限量》［3］中對(duì)果蔬中農(nóng)藥殘留限量做了詳細(xì)規(guī)定，以保障消費(fèi)者的食品安全。曹哲峰［4］等對(duì)包含茄子在內(nèi)的91個(gè)茄果類蔬菜樣品中農(nóng)藥的殘留情況進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果表明茄果類蔬菜總體農(nóng)藥殘留超標(biāo)情況比較嚴(yán)重。做好農(nóng)藥殘留監(jiān)控工作是保護(hù)人民生命安全、提高農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量和品牌效應(yīng)、增強(qiáng)農(nóng)產(chǎn)品市場(chǎng)競(jìng)爭(zhēng)力的強(qiáng)有力保障［5］。

能力驗(yàn)證是利用實(shí)驗(yàn)室間比對(duì)，按照預(yù)先制定的準(zhǔn)則來評(píng)價(jià)參加者的能力［6-8］，是實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量保證的重要手段，有助于實(shí)驗(yàn)室評(píng)價(jià)和證明其測(cè)量數(shù)據(jù)可靠性，發(fā)現(xiàn)自身存在的問題，改進(jìn)實(shí)驗(yàn)室的技術(shù)能力和管理水平。英國分析實(shí)驗(yàn)?zāi)芰︱?yàn)證公司(Food Analysis Performance Assessment Scheme，F(xiàn)APAS)，是目前國際食品領(lǐng)域中權(quán)威的能力驗(yàn)證提供者，提供全球食品領(lǐng)域中最大、最全面的分析化學(xué)水平測(cè)試評(píng)估計(jì)劃［9］。參加FAPAS能力驗(yàn)證并得到有效滿意的結(jié)果，是判斷實(shí)驗(yàn)室驗(yàn)證或校準(zhǔn)該項(xiàng)目能力的標(biāo)準(zhǔn)，也是中國合格評(píng)定國家認(rèn)可委員會(huì)（CNAS）判斷實(shí)驗(yàn)室能力的重要技術(shù)依據(jù)［10］。實(shí)驗(yàn)室作為參加能力驗(yàn)證的主體，需基于自身需求和外部對(duì)能力驗(yàn)證的要求，在綜合考慮內(nèi)部質(zhì)控水平、人員能力、設(shè)備狀況、風(fēng)險(xiǎn)、運(yùn)行成本等因素的基礎(chǔ)上，合理策劃并積極尋求適當(dāng)?shù)哪芰︱?yàn)證計(jì)劃?；谧陨硇枨螅緦?shí)驗(yàn)室參加FAPAS 19302茄子中農(nóng)藥殘留篩查能力驗(yàn)證。結(jié)合FAPAS 19302能力驗(yàn)證結(jié)果，對(duì)本次能力驗(yàn)證過程中的準(zhǔn)備工作、樣品前處理的選擇與優(yōu)化、定量結(jié)果的分析討論、分析檢測(cè)過程中遇到的問題及解決的思路進(jìn)行總結(jié)，為食品檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室農(nóng)藥殘留的檢測(cè)提供參考。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 主要儀器與試劑

液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀：EXionLC-QTRAP 5500型，美國AB SCIEX公司。

氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀：Agilent 7890-7000型，美國安捷倫科技有限公司。

分 析 天 平：XS105型，d=0.1 mg；PL303型，d=0.001 g，瑞士梅特勒-托利多集團(tuán)。

旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀：N1000型，日本東京理化器械株式會(huì)社。

渦旋混勻器：VORTEX GENIE 2，美國Scientific Industries公司。

振蕩器：SR-2DS型，日本TAITEC公司。

超純水系統(tǒng)：Milli-Q型，美國密理博公司。

氮吹儀：EVA50A型，中國普立泰科公司。

能力驗(yàn)證樣品：FAPAS英國總部提供的茄子測(cè)試樣品。

乙腈、甲酸、正己烷、丙酮、乙酸乙酯：色譜純，美國費(fèi)希爾公司。

氯化鈉：分析純，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。

分散固相萃取凈化管：Cleanert MAS-Q型，15 mL（300 mg C18、300 mg PSA、900 mg MgSO4），天津博納艾杰爾科技有限公司。

氮?dú)猓后w積分?jǐn)?shù)為99.999%，北京東方醫(yī)用氣體有限公司。

氦氣：體積分?jǐn)?shù)為99.999%，霸州市安興氣體有限公司。

霜霉威（質(zhì)量分?jǐn)?shù)為97.1%）、嘧菌酯（質(zhì)量分?jǐn)?shù)為98.7%）、溴氰菊酯（質(zhì)量分?jǐn)?shù)為99.7%）、二苯胺（質(zhì)量分?jǐn)?shù)為99.56%）、特丁硫磷亞砜（質(zhì)量分?jǐn)?shù)為96.3%）：英國政府化學(xué)家實(shí)驗(yàn)室。

克百威（1 000 μg／mL）、胺菊酯（質(zhì)量分?jǐn)?shù)為99.5%）：北京曼哈格生物科技有限公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 溶液配制

胺菊酯、二苯胺和溴氰菊酯混合標(biāo)準(zhǔn)中間溶液：以丙酮為溶劑，配制成胺菊酯、二苯胺和溴氰菊酯質(zhì)量濃度均為10 μg／mL和1.0 μg／mL的兩種混合標(biāo)準(zhǔn)中間溶液。

嘧菌酯、克百威、霜霉威和特丁硫磷亞砜混合標(biāo)準(zhǔn)中間溶液：以乙腈為溶劑，配制成嘧菌酯、克百威、霜霉威和特丁硫磷亞砜質(zhì)量濃度均為10 μg／mL和1.0 μg／mL兩種混合標(biāo)準(zhǔn)中間溶液。

選擇S／N＜3，且不含目標(biāo)農(nóng)藥的樣品作為空白，按照1.2.2節(jié)進(jìn)行前處理制得空白樣品基質(zhì)溶液。

LC-MS／MS用系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液：分別移取1.0 μg／mL嘧菌酯、克百威、霜霉威和特丁硫磷亞砜混合標(biāo)準(zhǔn)中間溶液 10、20、50、100、200、300、400、500 μL于8只10 mL容量瓶，用乙腈定容至標(biāo)線；將8份2 mL空白基質(zhì)溶液氮?dú)獯蹈桑謩e加入1 mL上述工作溶液復(fù)溶，即得到嘧菌酯、克百威、霜霉威和特丁硫磷亞砜質(zhì)量濃度均分別為1、2、5、10、20、30、40、50 ng／mL 系列基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。

GC-MS／MS用系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液：分別移取1.0 μg／mL胺菊酯、二苯胺和溴氰菊酯混合標(biāo)準(zhǔn)中間溶液 50、100、200、500 μL 和 10 μg／mL 的混合標(biāo)準(zhǔn)中間溶液 100、150、200、300 μL 于 8 只 10 mL容量瓶中，由丙酮-正己烷（體積比為1∶1，下同）定容至標(biāo)線；將8份10 mL空白基質(zhì)溶液氮?dú)獯蹈?，分別加入1 mL上述工作溶液復(fù)溶，即得到胺菊酯、二苯胺和溴氰菊酯質(zhì)量濃度均分別為5、10、20、50、100、150、200、300 ng／mL 系列基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。

1.2.2 樣品制備

（1）樣品粉碎。按照 GB 2763［3］的相關(guān)規(guī)定抽取有代表性的空白樣品，用高速勻漿機(jī)粉碎后裝入自封袋中備用。能力驗(yàn)證樣品為FAPAS英國總部提供的茄子測(cè)試樣品，冷凍（藏）包裝，樣品編號(hào)19032，運(yùn)輸?shù)竭_(dá)實(shí)驗(yàn)室時(shí)，包裝完好，樣品已解凍（FAPAS作業(yè)指導(dǎo)書表示不影響檢測(cè)）。

（2）提取。稱取粉碎后的樣品5.00 g（精確至0.01 g）于50 mL具塞離心管，加入20 mL酸化乙腈（乙酸體積分?jǐn)?shù)為 0.5%），2.0 g NaCl，振蕩 20 min，以5 000 r／min轉(zhuǎn)速離心3 min，上清液轉(zhuǎn)入雞心瓶中，樣品再次用20 mL酸化乙腈按上述步驟提取，合并兩次上清液，于40 ℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮至近干，用乙腈定容至50 mL容量瓶中。

（3）濃縮、換相。LC-MS／MS：取2 mL提取液到接收管中，用40 ℃氮?dú)鉂饪s至近干，用1 mL乙腈-水（3∶7）復(fù)溶，渦旋30 s，超聲20 s，過0.2 μm尼龍膜，裝瓶，待LC-MS／MS測(cè)定。

GC-MS／MS：取10 mL提取液到接收管中，用40 ℃氮?dú)鉂饪s至近干，用1 mL丙酮-正己烷（1∶1）復(fù)溶，渦旋 30 s，超聲 20 s，裝入 2 mL 離心管中于 12 000 r／min 離心 3 min，裝瓶，待 GC-MS／MS測(cè)定。

1.2.3 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜條件

(1)液相色譜條件。色譜柱：ACQUITY UPLC BEH C18柱（100 mm×2.1 mm，1.7 μm，美國沃特世公司）；柱溫：40 ℃；進(jìn)樣體積：3.0 μL；流動(dòng)相：A為0.1%甲酸溶液，B為乙腈，流量為0.3 mL／min；梯度洗脫程序：0～1.0 min為10%B，1.0～2.8 min為10%～90%B，2.8～4.8 min 為 90%B，4.8～5.3 min 為90%～10%B，5.3～6.8 min為10%B。

(2)質(zhì)譜條件。電噴霧正離子模式（ESI+）；多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）；氣簾氣：氮?dú)?，壓力?.207 MPa；碰撞氣：氮?dú)猓瑝毫镸edium；電噴霧電壓：5 500 V；離子源溫度：500 ℃；噴霧器壓力：0.345 MPa；輔助加熱器壓力：0.345 MPa；駐留時(shí)：間60 ms；入口電壓：10 V；各化合物監(jiān)測(cè)離子對(duì)、碰撞能量見表1。

表1 種農(nóng)藥監(jiān)測(cè)離子對(duì)及碰撞能量

1.2.4 氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜條件

（1）氣相色譜條件。色譜柱：HP-5MS UI色譜柱（30 m×0.25 mm，0.25 μm，美國安捷倫科技有限公司）；進(jìn)樣口溫度：280 ℃；進(jìn)樣體積：1.0 μL ；載氣：氦氣；質(zhì)譜傳輸線溫度：280 ℃；程序升溫：60 ℃，保持1 min，以40 ℃／min升至170 ℃，再以10 ℃／min升至310 ℃，保持6 min。

（2）質(zhì)譜條件。離子源為電子轟擊源（EI+）；多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）模式；碰撞氣：氮?dú)?；離子源溫度：300 ℃；各化合物監(jiān)測(cè)離子對(duì)、碰撞能量見表2。

表2 種農(nóng)藥監(jiān)測(cè)離子對(duì)及碰撞能量

2 結(jié)果與討論

2.1 能力驗(yàn)證實(shí)施步驟

接收樣品時(shí)需首先對(duì)樣品狀態(tài)進(jìn)行確認(rèn)，包括樣品的內(nèi)外包裝是否完好，運(yùn)輸時(shí)是否符合樣品的運(yùn)輸條件。根據(jù)作業(yè)指導(dǎo)書，確認(rèn)樣品標(biāo)簽與指導(dǎo)書編號(hào)是否相對(duì)應(yīng)，樣品所需的儲(chǔ)存條件、此次能力驗(yàn)證的分析項(xiàng)及殘留標(biāo)示物或代謝物、推薦的檢測(cè)方法、最小取樣量、樣品復(fù)原的方法，以及上報(bào)時(shí)的結(jié)果表示、材料要求、上報(bào)方式與時(shí)間等。

樣品確認(rèn)無誤后進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)。在配制標(biāo)準(zhǔn)溶液時(shí)應(yīng)雙人配制，一人配制，一人監(jiān)督。新配制的標(biāo)準(zhǔn)溶液可與現(xiàn)有的舊標(biāo)準(zhǔn)溶液在儀器上進(jìn)行對(duì)比，以保證標(biāo)準(zhǔn)品濃度的準(zhǔn)確性。選擇干凈無污染的實(shí)驗(yàn)器具，稱取1份考核樣品，按最低取樣量取樣進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。在前處理時(shí)可通過不同的提取、凈化、濃縮方法以及不同的實(shí)驗(yàn)人員進(jìn)行比對(duì)，通過做試劑空白、基質(zhì)空白、添加定量限水平的標(biāo)準(zhǔn)品測(cè)定回收率等方法監(jiān)控實(shí)驗(yàn)的可行性。通過在不同類型的儀器上，以及在同一類型的不同儀器上進(jìn)行對(duì)比測(cè)定，保證儀器的穩(wěn)定性和精密度。通過不同的定量方式，如外標(biāo)法、內(nèi)標(biāo)法等，保證檢測(cè)數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性。實(shí)驗(yàn)過程中每一步都需有詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)記錄。

在確定實(shí)驗(yàn)方法和考核樣品中分析項(xiàng)目的濃度范圍后，進(jìn)行正式實(shí)驗(yàn)。正式實(shí)驗(yàn)需稱取4份考核樣品，其中3份為平行實(shí)驗(yàn)，1份為樣品加標(biāo)，加標(biāo)量應(yīng)為樣品中分析項(xiàng)目濃度的1～1.5倍；稱取3份空白樣品，其中1份為基質(zhì)空白，2份為空白加標(biāo)，加標(biāo)量與樣品加標(biāo)的加標(biāo)量相同。如樣品量充足，可重復(fù)實(shí)驗(yàn)2～3次，以保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確。實(shí)驗(yàn)過程也需有完整的原始記錄。

整理所有的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，確定上報(bào)的結(jié)果，并根據(jù)作業(yè)指導(dǎo)書的要求確認(rèn)結(jié)果的表示與計(jì)算方法、采用的單位以及有效數(shù)字的保留位數(shù)。做好相關(guān)的記錄，包括填寫測(cè)試結(jié)果質(zhì)量控制記錄、實(shí)驗(yàn)記錄和保存原始譜圖等。

數(shù)據(jù)上報(bào)后等待結(jié)果的反饋。若反饋結(jié)果為滿意，分析實(shí)驗(yàn)過程中的收獲與不足，為下一次能力驗(yàn)證提供經(jīng)驗(yàn)。若反饋結(jié)果為不合格，則需要通過翻看實(shí)驗(yàn)記錄、原始譜圖等進(jìn)行全流程的原因查找，分析實(shí)驗(yàn)過程中存在的問題，并填寫不符合工作記錄、糾正措施實(shí)施計(jì)劃及跟蹤報(bào)告和整改報(bào)告，為下一次能力驗(yàn)證提供參考。

2.2 樣品處理?xiàng)l件優(yōu)化

2.2.1 檢測(cè)項(xiàng)目盲篩

（1）農(nóng)藥篩選。這次FAPAS測(cè)試樣品涉及到290種農(nóng)藥及其代謝物。本實(shí)驗(yàn)室現(xiàn)有標(biāo)準(zhǔn)品296種，但是并未完全覆蓋這次FAPAS樣品所涉及的290種農(nóng)藥及其代謝物，鑒于此，筆者只用自身現(xiàn)有的標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行篩選。

（2）樣品前處理方法。

稱取3.00 g樣品（精確至0.01 g）于50 mL具塞離心管，加入20 mL乙腈，2.0 g NaCl，振蕩20 min，5 000 r／min轉(zhuǎn)速離心 3 min，上清液轉(zhuǎn)入雞心瓶中，樣品再次用20 mL乙腈按上述步驟提取，合并兩次上清液，將上清液于40 ℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮至近干，用乙腈定容至10 mL容量瓶中。

取2 mL提取液到接收管中，于40 ℃氮?dú)鉂饪s至近干，用1 mL乙腈-水（3∶7）復(fù)溶，渦旋30 s，超聲20 s，過0.2 μm尼龍膜裝瓶，待LC-MS／MS測(cè)定篩選。

取4 mL提取液到接收管中，于40 ℃氮?dú)鉂饪s至近干，用1 mL丙酮-正己烷（1∶1）復(fù)溶，渦旋30 s，超聲 20 s，以 12 000 r／min 轉(zhuǎn)速離心 3 min，裝瓶，待GC-MS／MS測(cè)定篩選。

（3）目標(biāo)農(nóng)藥確定。在1.2.3和1.2.4儀器工作條件下進(jìn)行測(cè)定，最終確定此次的目標(biāo)農(nóng)藥有7種，分別是霜霉威、克百威、特丁硫磷亞砜、嘧菌酯、溴氰菊酯、二苯胺、胺菊酯。

2.2.2 提取溶劑的優(yōu)化

農(nóng)殘檢測(cè)常用的提取溶劑有酸化乙腈［11-15］、乙腈［16-25］、乙酸乙酯［26］、正己烷［27-28］、丙酮［26］及其它不同比例混合提取液［29-31］。正己烷在提取非極性農(nóng)藥、基質(zhì)簡單樣品時(shí)提取效率較高，本實(shí)驗(yàn)為茄子中多種農(nóng)藥殘留篩查，故而排除正己烷。以空白茄子為基質(zhì)，按0.1 mg／kg添加篩查出的7種混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，比較酸化乙腈（含0.5%乙酸，體積分?jǐn)?shù)）、乙腈、丙酮-正己烷（1∶1）、乙酸乙酯、丙酮5種提取溶劑對(duì)回收率的影響。

分別稱取15份各5.0 g茄子于50 mL具塞離心管，分別加入20 mL 5種不同的提取溶劑（酸化乙腈（含0.5%乙酸，體積分?jǐn)?shù)）、乙腈、丙酮-正己烷（1∶1）、乙酸乙酯、丙酮，每種提取溶劑作3個(gè)平行樣，一共15份），分別加入2.0 g NaCl，振蕩20 min，以5 000 r／min離心3 min，上清液轉(zhuǎn)入雞心瓶中，樣品再次用20 mL乙腈按上述步驟提取，合并兩次上清液，將上清液于40 ℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮至近干，分別用對(duì)應(yīng)的5種提取溶劑定容至50 mL容量瓶。然后按1.2.2（3）進(jìn)行操作。

其中以丙酮作為提取溶劑，合并兩次上清液后不能旋蒸至干，筆者認(rèn)為足量的丙酮能使茄子中蛋白、脂質(zhì)類成分溶解出來，而這些成分又不易揮發(fā)，干擾后期檢測(cè)，故而舍棄丙酮作為提取溶劑。其余4種提取溶劑的回收率見圖1。

圖1 不同提取溶劑下目標(biāo)農(nóng)藥的回收率

由圖1可知，當(dāng)用正己烷-丙酮、乙酸乙酯作為提取溶劑時(shí)，霜霉威的回收率只有5.4%和9.8%；當(dāng)用乙酸乙酯提取時(shí)，溴氰菊酯的回收率為145%，回收率偏高；以乙腈和酸化乙腈作為提取溶劑時(shí)，回收率都能滿足方法驗(yàn)證學(xué)要求。綜合考慮，選擇酸化乙腈作為提取溶劑。

2.2.3 基質(zhì)效應(yīng)

基體通常會(huì)對(duì)目標(biāo)物的分析產(chǎn)生較為明顯的干擾，并影響分析結(jié)果的準(zhǔn)確性，這些干擾或影響被稱為基質(zhì)效應(yīng)［32］?；|(zhì)效應(yīng)的強(qiáng)弱與被研究基體種類有關(guān)，不同農(nóng)藥在不同基質(zhì)中，產(chǎn)生的基質(zhì)效應(yīng)不同；基質(zhì)效應(yīng)還與被分析物本身的結(jié)構(gòu)、濃度等理化性質(zhì)相關(guān)；外部環(huán)境如分析過程中使用的緩沖溶液、試劑、前處理方法等也會(huì)對(duì)基質(zhì)效應(yīng)產(chǎn)生影響［33］。因此有必要對(duì)基質(zhì)效應(yīng)進(jìn)行評(píng)價(jià)。分別繪制溶劑標(biāo)準(zhǔn)曲線和基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)曲線，用以評(píng)價(jià)方法的基質(zhì)效應(yīng)，基質(zhì)效應(yīng)系數(shù)η=（基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率-溶劑標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率）／溶劑標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率。當(dāng)|η|＜10%時(shí)，表明無明顯的基質(zhì)效應(yīng)；反之，則具有明顯的基質(zhì)增強(qiáng)或減弱效應(yīng)［34］。分別按1.2.3和1.2.4儀器條件測(cè)定1.2.1配制的系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，得到的擬合線性方程見表3。

表3 線性方程與基質(zhì)效應(yīng)

由表3可知，胺菊酯、溴氰菊酯、克百威的基質(zhì)效應(yīng)系數(shù)分別為55.9%、59.9%、-34.5%，有明顯的基質(zhì)效應(yīng)，因此采用基質(zhì)匹配線性方程對(duì)胺菊酯、溴氰菊酯、克百威進(jìn)行定量分析。

2.2.4 凈化方式

基于QuEChERS原則［35］的經(jīng)典樣品處理方法，已被廣泛應(yīng)用于農(nóng)藥多殘留、獸藥多殘留、生物毒素、非法添加及其它有毒有害污染物檢測(cè)。結(jié)合待研究基質(zhì)簡單的特點(diǎn)，本研究對(duì)基于QuEChERS原則的樣品處理方法進(jìn)行考察，常用的凈化填料有硅膠鍵和碳十八（C18）、N-丙基乙二胺（PSA）、石墨化碳黑（GCB）、NaCl鹽析、無水MgSO4除水。其中C18去除脂肪和脂類等非極性干擾物；PSA主要用來凈化各種有機(jī)酸、金屬離子、色素以及一些糖類、酚類和脂肪酸；GCB去除色素、甾醇類非極性干擾物。GCB本身獨(dú)特的平面結(jié)構(gòu)可與色素發(fā)生不可逆吸附，與此同時(shí)GCB會(huì)對(duì)某些平面結(jié)構(gòu)的農(nóng)藥像嘧菌環(huán)胺、多菌靈、吡嗪酮、噻菌靈、百菌清和蠅毒磷造成25%左右的損失。由于茄子樣品色素含量較少，故排除GCB。

樣品按1.2.2（2）提取，取12 mL提取液至15 mL Cleanert MAS-Q凈化管中，振蕩5 min使凈化完全，以5 000 r／min離心 5 min，之后按1.2.2（3）進(jìn)行處理，然后按1.2.3、1.2.4測(cè)定，結(jié)果見表4。

Cleanert MAS-Q凈化管只含有300 mg PSA、300 mg C18和 900 mg MgSO4。MgSO4只除水分，對(duì)目標(biāo)化合物的影響不大，故再考察PSA和C18對(duì)7種目標(biāo)化合物的影響。分別用PSA和C18進(jìn)行凈化后測(cè)定，結(jié)果見表4。

表4 不同凈化方式和凈化填料對(duì)回收率的影響（n=3）

由表4可知，經(jīng)過QuEChERS填料凈化之后，霜霉威回收率為37.3%，二苯胺回收率為78.1%；在沒有基質(zhì)干擾的情況下，經(jīng)過PSA凈化的目標(biāo)化合物回收率為67.6%～94.9%；經(jīng)過C18凈化的回收率為31.9%～99.7%，其中霜霉威、溴氰菊酯、胺菊酯的回收分別為31.9%、41.1%和43.7%，無法滿足方法驗(yàn)證學(xué)要求。

樣品經(jīng)過凈化，影響了目標(biāo)化合物的回收，綜合以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果和茄子基質(zhì)較為簡單的特點(diǎn)，故本實(shí)驗(yàn)采用直接提取、不凈化的方式。

2.3 樣品測(cè)定結(jié)果

按1.2.2、1.2.3和1.2.4節(jié)進(jìn)行樣品前處理和儀器測(cè)定，一共測(cè)定3次，每次3個(gè)平行，得到的數(shù)據(jù)見表5。

由表5可知：（1）腈嘧菌酯（嘧菌酯）、克百威、霜霉威和特丁硫磷亞砜3次測(cè)定結(jié)果較為接近，且每次測(cè)定結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差小于5.2%，結(jié)果穩(wěn)定可靠。通過3次測(cè)定結(jié)果與3次測(cè)定結(jié)果的平均值對(duì)比發(fā)現(xiàn)，第3次的測(cè)定結(jié)果更加接近3次測(cè)定結(jié)果的平均值，故選擇第3次作為上報(bào)數(shù)值。

表5 能力驗(yàn)證樣品測(cè)定結(jié)果

（2）胺菊酯、二苯胺和溴氰菊酯3次測(cè)定結(jié)果相差較大，且相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差在6.9%～29.5%之間。結(jié)合GC-MS／MS一批序列中同一樣品測(cè)定結(jié)果越來越低的異?，F(xiàn)象，決定不予上報(bào)。另外，讓人費(fèi)解的現(xiàn)象是兩臺(tái)GC-MS／MS多次運(yùn)行同一樣品，得到的結(jié)果都呈下降的趨勢(shì)。由此帶來兩個(gè)問題：（1）平行測(cè)定數(shù)據(jù)相差大，筆者分取15份5 mL空白樣品，分別加入50 μL 1.0 μg／mL混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，在40 ℃下氮?dú)獯抵两?，分別由1 mL正己烷（3份）、丙酮（3份）、乙腈（3份）、正己烷-丙酮（1∶1）（3份）、乙酸乙酯（3份）復(fù)溶，用GC-MS／MS測(cè)定并計(jì)算回收率。由結(jié)果可知，不同復(fù)溶溶劑對(duì)平行測(cè)定數(shù)值的影響不大，其中乙腈復(fù)溶的回收率及平行性略好于其它復(fù)溶溶劑，乙腈歸為極性溶劑，對(duì)本次所用的非極性色譜柱不友好。（2）儀器測(cè)定數(shù)值下降，儀器粗略可分為進(jìn)樣系統(tǒng)、分離系統(tǒng)、質(zhì)譜部分。儀器自動(dòng)調(diào)諧，調(diào)諧參數(shù)顯示儀器正常；更換全新色譜柱，下降現(xiàn)象依然存在；清洗進(jìn)樣口，更換襯管，平行測(cè)定數(shù)據(jù)趨于穩(wěn)定。后期進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)、分析，認(rèn)為不管是每次的平行之間，還是這3次測(cè)定結(jié)果之間，測(cè)定結(jié)果相差較大的原因是“襯管”沒有達(dá)到質(zhì)量要求。

2.4 數(shù)值對(duì)比

根據(jù)FAPAS公布的此次能力驗(yàn)證的結(jié)果顯示，樣品19032茄子中多種農(nóng)藥殘留篩查中，腈嘧菌酯(嘧菌酯)、克百威、霜霉威和特丁硫磷亞砜的通過率分別為98%、95%、85%和83%，筆者上報(bào)數(shù)值與FAPAS賦值基本接近，見表6，Z值在0.3～0.6之間，本次比對(duì)結(jié)果為“滿意”。

表6 FAPAS賦值、上報(bào)值及能力驗(yàn)證結(jié)果（Z值）

3 結(jié)論

此次FAPAS能力驗(yàn)證的難點(diǎn)在于農(nóng)藥涵蓋的范圍廣、數(shù)量多，一般實(shí)驗(yàn)室難以具備如此數(shù)量的標(biāo)準(zhǔn)品儲(chǔ)備。好在FAPAS不強(qiáng)制性要求參試機(jī)構(gòu)把所有的農(nóng)藥項(xiàng)目都一一檢測(cè)出來，并準(zhǔn)確賦值。參試實(shí)驗(yàn)室只需檢測(cè)自身能力范圍內(nèi)、FAPAS供試樣品所含農(nóng)藥，且上報(bào)數(shù)值位于整體上報(bào)數(shù)值的合理范圍內(nèi)，即可以通過此次能力驗(yàn)證。

茄子中的農(nóng)藥經(jīng)過0.5%乙酸乙腈提取，分取提取液后濃縮，換相，上機(jī)檢測(cè)，結(jié)果的Z值在0.3～0.6之間，評(píng)價(jià)結(jié)果為“滿意”。

通過參加FAPAS茄子中多種農(nóng)藥殘留篩查能力驗(yàn)證所做的準(zhǔn)備工作、基本分析流程和關(guān)鍵操作方法技巧，分析檢測(cè)過程中遇到的問題及解決問題的思路，為其它實(shí)驗(yàn)室參加諸如FAPAS農(nóng)藥殘留能力驗(yàn)證工作提供經(jīng)驗(yàn)參考。