唐 平，王登蓮，梁 燕，羅曉斌

(1.四川省自貢市第一人民醫(yī)院兒科，四川 自貢 643000 2.四川省遂寧市中心醫(yī)院呼吸科，四川 遂寧 629000)

哮喘常發(fā)生于小兒，經(jīng)流行病學(xué)調(diào)查，約有284萬兒童患有哮喘，若得不到及時(shí)診療，可引發(fā)肺性腦病、肺心病，增加小兒病死率[1]。隨著深入探索哮喘發(fā)作機(jī)制，發(fā)現(xiàn)該病發(fā)生、發(fā)展主要是因呼吸道黏膜受到刺激，引發(fā)炎癥反應(yīng)，從而加劇自身免疫、呼吸道黏膜、肺功能損傷，使得哮喘病情進(jìn)展，故在判定疾病時(shí)，需注重肺功能檢測(cè)，以便了解疾病發(fā)展進(jìn)程[2]。同時(shí)有學(xué)者發(fā)現(xiàn)[3]，細(xì)胞因子波動(dòng)在呼吸道疾病發(fā)生、發(fā)展中也具有一定要意義。嗜酸性粒細(xì)胞趨化因子(Eotaxin)作為趨化因子，可促進(jìn)呼吸道炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，激活嗜酸性粒細(xì)胞，誘發(fā)呼吸道高反應(yīng)[4]；嗜酸性粒細(xì)胞(Eosinophilic granuloeyte；Eos)是反映氣道炎癥重要因子，可釋放炎性因子，介導(dǎo)炎癥細(xì)胞聚集，引發(fā)氣道炎癥[5]。此外，有學(xué)者發(fā)現(xiàn)部分哮喘者吸入致敏原后，可因IgE介導(dǎo)，產(chǎn)生變態(tài)反應(yīng)，因此需注重過敏原特異性IgE(specific IgE；sIgE)檢測(cè)，從而盡早確定致病原，為疾病診斷提供重要依據(jù)，目前關(guān)于哮喘與sIgE、Eos、Eotaxin細(xì)胞因子關(guān)系已得到論證，但目前臨床上關(guān)于哮喘患兒血清Eotaxin水平與肺功能、Eos、sIgE之間相關(guān)性研究較少。而本文進(jìn)一步揭示了血清Eotaxin水平與肺功能各項(xiàng)指標(biāo)以及Eos、sIgE相關(guān)性，從而提高對(duì)疾病認(rèn)知，做到早診斷、早治療。具體如下文。

1 資料與方法

1.1臨床資料:回顧性分析的67例哮喘患兒(觀察組)、65例健康體檢者(對(duì)照組)基本資料，符合《赫爾辛基宣言》的倫理審查。觀察組男38例，女29例，年齡2～14歲，平均(8.56±3.18)歲。對(duì)照組男39例，女26例，年齡2～14歲，平均(8.48±3.22)歲。兩組小兒比較體重、年齡、性別無統(tǒng)計(jì)差異性(P>0.05)。此次試驗(yàn)在2018年2月至2020年9月期間開展。哮喘診斷標(biāo)準(zhǔn)：符合2020年《支氣管哮喘防治指南》中關(guān)于哮喘臨床診斷標(biāo)準(zhǔn)[6]，出現(xiàn)咳嗽、胸悶、氣急、反復(fù)喘息等癥狀，發(fā)作時(shí)，以呼氣相為主的哮鳴音，雙肺可聞及彌漫性或散在性哮鳴音，經(jīng)運(yùn)動(dòng)激發(fā)試驗(yàn)陽性。納入標(biāo)準(zhǔn)：①臨床資料齊全；②年齡≤15歲；③停用長(zhǎng)效過敏藥7d以上。排除標(biāo)準(zhǔn)：①咳嗽變異性、心源性哮喘者；②先天性心臟病、氣道畸形、支氣管異物者；③近三個(gè)月內(nèi)使用過類固醇類藥物、細(xì)胞膜穩(wěn)定劑、白三烯調(diào)節(jié)劑治療者。

1.2方法:Eotaxin檢測(cè)：抽取受檢者3mL外周靜脈血，血清分離，離心20min，轉(zhuǎn)速2000r/min，放于冰箱(-80℃)內(nèi)待檢。使用ELISA法檢測(cè)Eotaxin，試劑盒由上海原葉生物科技公司提供，具體方式按照說明書進(jìn)行。陽性判定標(biāo)準(zhǔn)：>5ng/L。Eos檢測(cè)：抽取受檢者3mL肘靜脈血，室溫下1000～1350g離心力，完成兩次普通玻璃試管離心，每次10min，放于-20℃環(huán)境下備用，使用全血細(xì)胞分析儀(Sysmex XE-2100型號(hào))檢測(cè)Eos。sIgE檢測(cè)：使用免疫印跡法檢測(cè)過敏原，使用德國(guó)MEDISEISS醫(yī)療器械公司提供的Y-NICAP100系統(tǒng)。抽取3mL肘靜脈血，離心10min，速率維持1500rpm，離心半徑10cm，嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行sIgE檢測(cè)。陽性判定標(biāo)準(zhǔn)：≥35IU/mL。肺功能檢測(cè)：使用德國(guó)Jaeger公司提供的FA2004B型號(hào)肺功能儀檢測(cè)肺通氣功能，對(duì)所有受檢者進(jìn)行三次通氣功能檢測(cè)，取平均值，檢測(cè)指標(biāo)包括第1秒用力呼氣容積(Forced expiratory volume in one second；FEV1)、用力肺活量(Forced vital capacity；FVC)、呼氣峰流速值(Peak expiratory flow；PEF)。

2 結(jié) 果

2.1比較兩組各項(xiàng)指標(biāo):觀察組Eotaxin、Eos、sIgE高于對(duì)照組(P<0.05)，PEF、FEV1、FVC低于對(duì)照組(P<0.05)。見表1。

表1 對(duì)比兩組各項(xiàng)指標(biāo)

2.2Eotaxin與各項(xiàng)指標(biāo)的相關(guān)性:經(jīng)Pearson法分析，Eotaxin與Eos、sIgE呈正相關(guān)性(r=0.907、0.969；P<0.001)；與PEF、FEVI、FVC呈負(fù)相關(guān)性(r=-0.809、-0.935、-0.908；P<0.001)。

2.3多元逐步回歸分析:以哮喘患兒Eotaxin為因變量，以Eos、sIgE、PEF、FEVI、FVC為自變量進(jìn)行多元逐步回歸分析，結(jié)果表明，Eos、sIgE、FEVI進(jìn)入分析模型(P<0.05)，R2=0.974(F=961.505，P<0.05)，其中回歸方程Y=17.791+4.169×Eos+0.779×sIgE+(-5.711)×FEVI。見表2。

表2 多元逐步回歸分析模型

3 討 論

哮喘是由多種細(xì)胞參與的慢性炎癥性疾病，具有反復(fù)發(fā)作特點(diǎn)，發(fā)病機(jī)制尚未明確，但有部分學(xué)者認(rèn)為小兒是在遺傳作用和生理結(jié)構(gòu)影響下，出現(xiàn)喘息[7]。而近年來，趨化因子家族、細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)失衡在哮喘發(fā)病機(jī)制中引起人們重視。Eotaxin在肺組織中，主要來源于肺成纖維細(xì)胞、肺泡巨噬細(xì)胞、支氣管上皮細(xì)胞，最早是從致敏豚鼠支氣管肺泡灌洗液中分離獲得，可趨化嗜酸性粒細(xì)胞。韓君萍[8]學(xué)者通過大鼠實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，氣道炎癥高反應(yīng)時(shí)，肺內(nèi)Eotaxin基因可明顯升高，由此說明，Eotaxin在氣道炎癥中對(duì)炎癥細(xì)胞活化、聚集起到一定意義。在本次研究結(jié)果中，哮喘患兒Eotaxin水平表達(dá)高于對(duì)照組，進(jìn)而佐證Eotaxin對(duì)趨化嗜酸粒細(xì)胞具有一定作用性，對(duì)此可從阻斷或抑制Eotaxin對(duì)嗜酸性粒細(xì)胞趨化作用作為防治哮喘患兒的新突破口[9]。

Eos最早是外國(guó)學(xué)者在1879年從動(dòng)物血液中發(fā)現(xiàn)，參與了對(duì)寄生蟲天然防御，在氣道炎癥中發(fā)揮著重要意義，不僅具有吞噬作用，也是目前引起變態(tài)反應(yīng)、氣道高反應(yīng)性、氣道炎癥的關(guān)鍵細(xì)胞[10]。在正常情況下，Eos在凋亡后可從組織中清除掉，因此在人體含量較低，但當(dāng)機(jī)體出現(xiàn)免疫性炎癥反應(yīng)時(shí)，機(jī)體Eos的黏附分子表達(dá)可明顯增強(qiáng)，強(qiáng)化了對(duì)血管內(nèi)皮粘附作用。本次結(jié)果中，哮喘者體內(nèi)Eos含量高于對(duì)照組，推測(cè)原因是Eos內(nèi)含有基礎(chǔ)蛋白質(zhì)大的次級(jí)顆粒，一旦被刺激，便可激活，同時(shí)釋放嗜酸性粒細(xì)胞衍生神經(jīng)毒素、嗜酸性粒細(xì)胞過氧化物酶、陽離子蛋白、堿性蛋白，此類蛋白對(duì)氣道上皮有毒性作用，進(jìn)而誘發(fā)氣道炎癥，介導(dǎo)氣道上皮細(xì)胞[11]。經(jīng)相關(guān)性分析，Eotaxin水平與Eos呈正相關(guān)性，推測(cè)原因是Eotaxin化學(xué)作用是吸引Eos在肺內(nèi)募集，可使得嗜酸性粒細(xì)胞活化，黏附于血管內(nèi)皮上，進(jìn)而產(chǎn)生顆粒蛋白，損傷組織，兩者相互作用著，可在嗜酸粒細(xì)胞活化、黏膜、趨化中發(fā)揮著重要作用。

sIgE最早是在1966年發(fā)現(xiàn)的，1967年學(xué)者開始對(duì)IgE檢測(cè)進(jìn)行報(bào)道，且在近代變態(tài)反應(yīng)學(xué)中取得突破性進(jìn)展。隨著近年來，相關(guān)研究增多[12]，學(xué)著發(fā)現(xiàn)IgE是人體血清中含量較低的免疫球蛋白，是引起I型變態(tài)反應(yīng)的主要抗體，且B淋巴細(xì)胞、T淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞均參與了該蛋白合成。本次結(jié)果顯示，觀察組sIgE高于對(duì)照組，說明sIgE在哮喘小兒中存在異常表達(dá)。可能是因sIgE在進(jìn)入人體后，可產(chǎn)生過敏因子，促使致敏的肥大細(xì)胞或嗜酸粒細(xì)胞的多種化學(xué)物質(zhì)產(chǎn)生活性反應(yīng)，并逸出細(xì)胞外，從而引起哮喘發(fā)作，對(duì)此需盡可能避免接觸變應(yīng)原，對(duì)于尋找變應(yīng)原困難者，需通過測(cè)定IgE，明確是否存在變態(tài)反應(yīng)性，以便后期治療[13]。經(jīng)相關(guān)性分析，sIgE與Eotaxin呈正相關(guān)性，說明Eotaxin與sIgE具有共同作用，能夠預(yù)測(cè)哮喘患病率，而Eotaxin與sIgE兩者細(xì)胞因子中，除了肥大細(xì)胞外，仍存在共同來源，可能是活化的上皮細(xì)胞。

肺功能檢查需依借影像技術(shù)，是一種簡(jiǎn)便、安全的檢查方式，PEF、FEV1、FVC是目前反映肺功能最常用的幾類參數(shù)[14]。與健康體檢小兒相比，哮喘患兒PEF、FEV1、FVC水平更低，說明哮喘小兒在發(fā)病期間，可累及肺功能。主要體現(xiàn)為小氣道痙攣，再加上小氣道通氣功能受損、改變，可導(dǎo)致氣道炎癥反應(yīng)加重，從而引起肺功能損傷。經(jīng)相關(guān)性分析，PEF、FEV1、FVC與Eotaxin呈負(fù)相關(guān)性，說明肺功能與Eotaxin水平表達(dá)存在一定相關(guān)性，可通過檢測(cè)Eotaxin水平變化，評(píng)判哮喘患兒肺功能嚴(yán)重程度，是一項(xiàng)客觀性評(píng)價(jià)指標(biāo)[15]。但本次經(jīng)多元逐步回歸分析，僅FEVI對(duì)Eotaxin水平表現(xiàn)出特異性，為此關(guān)于肺功能與Eotaxin之間的關(guān)系還有待進(jìn)一步探索。

綜上所述，哮喘患兒可出現(xiàn)明顯肺功受損，血清Eotaxin、Eos、sIgE含量改變，同時(shí)血清Eotaxin水平含量與肺功能、Eos、sIgE含量存在一定相關(guān)性，共同測(cè)定，有助于盡早明確診斷。