唐 平，王登蓮，梁 燕，羅曉斌

(1.四川省自貢市第一人民醫(yī)院兒科，四川 自貢 643000 2.四川省遂寧市中心醫(yī)院呼吸科，四川 遂寧 629000)

哮喘常發(fā)生于小兒，經(jīng)流行病學調(diào)查，約有284萬兒童患有哮喘，若得不到及時診療，可引發(fā)肺性腦病、肺心病，增加小兒病死率[1]。隨著深入探索哮喘發(fā)作機制，發(fā)現(xiàn)該病發(fā)生、發(fā)展主要是因呼吸道黏膜受到刺激，引發(fā)炎癥反應，從而加劇自身免疫、呼吸道黏膜、肺功能損傷，使得哮喘病情進展，故在判定疾病時，需注重肺功能檢測，以便了解疾病發(fā)展進程[2]。同時有學者發(fā)現(xiàn)[3]，細胞因子波動在呼吸道疾病發(fā)生、發(fā)展中也具有一定要意義。嗜酸性粒細胞趨化因子(Eotaxin)作為趨化因子，可促進呼吸道炎癥細胞浸潤，激活嗜酸性粒細胞，誘發(fā)呼吸道高反應[4]；嗜酸性粒細胞(Eosinophilic granuloeyte；Eos)是反映氣道炎癥重要因子，可釋放炎性因子，介導炎癥細胞聚集，引發(fā)氣道炎癥[5]。此外，有學者發(fā)現(xiàn)部分哮喘者吸入致敏原后，可因IgE介導，產(chǎn)生變態(tài)反應，因此需注重過敏原特異性IgE(specific IgE；sIgE)檢測，從而盡早確定致病原，為疾病診斷提供重要依據(jù)，目前關于哮喘與sIgE、Eos、Eotaxin細胞因子關系已得到論證，但目前臨床上關于哮喘患兒血清Eotaxin水平與肺功能、Eos、sIgE之間相關性研究較少。而本文進一步揭示了血清Eotaxin水平與肺功能各項指標以及Eos、sIgE相關性，從而提高對疾病認知，做到早診斷、早治療。具體如下文。

1 資料與方法

1.1臨床資料:回顧性分析的67例哮喘患兒(觀察組)、65例健康體檢者(對照組)基本資料，符合《赫爾辛基宣言》的倫理審查。觀察組男38例，女29例，年齡2～14歲，平均(8.56±3.18)歲。對照組男39例，女26例，年齡2～14歲，平均(8.48±3.22)歲。兩組小兒比較體重、年齡、性別無統(tǒng)計差異性(P>0.05)。此次試驗在2018年2月至2020年9月期間開展。哮喘診斷標準：符合2020年《支氣管哮喘防治指南》中關于哮喘臨床診斷標準[6]，出現(xiàn)咳嗽、胸悶、氣急、反復喘息等癥狀，發(fā)作時，以呼氣相為主的哮鳴音，雙肺可聞及彌漫性或散在性哮鳴音，經(jīng)運動激發(fā)試驗陽性。納入標準：①臨床資料齊全；②年齡≤15歲；③停用長效過敏藥7d以上。排除標準：①咳嗽變異性、心源性哮喘者；②先天性心臟病、氣道畸形、支氣管異物者；③近三個月內(nèi)使用過類固醇類藥物、細胞膜穩(wěn)定劑、白三烯調(diào)節(jié)劑治療者。

1.2方法:Eotaxin檢測：抽取受檢者3mL外周靜脈血，血清分離，離心20min，轉(zhuǎn)速2000r/min，放于冰箱(-80℃)內(nèi)待檢。使用ELISA法檢測Eotaxin，試劑盒由上海原葉生物科技公司提供，具體方式按照說明書進行。陽性判定標準：>5ng/L。Eos檢測：抽取受檢者3mL肘靜脈血，室溫下1000～1350g離心力，完成兩次普通玻璃試管離心，每次10min，放于-20℃環(huán)境下備用，使用全血細胞分析儀(Sysmex XE-2100型號)檢測Eos。sIgE檢測：使用免疫印跡法檢測過敏原，使用德國MEDISEISS醫(yī)療器械公司提供的Y-NICAP100系統(tǒng)。抽取3mL肘靜脈血，離心10min，速率維持1500rpm，離心半徑10cm，嚴格按照說明書進行sIgE檢測。陽性判定標準：≥35IU/mL。肺功能檢測：使用德國Jaeger公司提供的FA2004B型號肺功能儀檢測肺通氣功能，對所有受檢者進行三次通氣功能檢測，取平均值，檢測指標包括第1秒用力呼氣容積(Forced expiratory volume in one second；FEV1)、用力肺活量(Forced vital capacity；FVC)、呼氣峰流速值(Peak expiratory flow；PEF)。

2 結 果

2.1比較兩組各項指標:觀察組Eotaxin、Eos、sIgE高于對照組(P<0.05)，PEF、FEV1、FVC低于對照組(P<0.05)。見表1。

表1 對比兩組各項指標

2.2Eotaxin與各項指標的相關性:經(jīng)Pearson法分析，Eotaxin與Eos、sIgE呈正相關性(r=0.907、0.969；P<0.001)；與PEF、FEVI、FVC呈負相關性(r=-0.809、-0.935、-0.908；P<0.001)。

2.3多元逐步回歸分析:以哮喘患兒Eotaxin為因變量，以Eos、sIgE、PEF、FEVI、FVC為自變量進行多元逐步回歸分析，結果表明，Eos、sIgE、FEVI進入分析模型(P<0.05)，R2=0.974(F=961.505，P<0.05)，其中回歸方程Y=17.791+4.169×Eos+0.779×sIgE+(-5.711)×FEVI。見表2。

表2 多元逐步回歸分析模型

3 討 論

哮喘是由多種細胞參與的慢性炎癥性疾病，具有反復發(fā)作特點，發(fā)病機制尚未明確，但有部分學者認為小兒是在遺傳作用和生理結構影響下，出現(xiàn)喘息[7]。而近年來，趨化因子家族、細胞因子網(wǎng)絡失衡在哮喘發(fā)病機制中引起人們重視。Eotaxin在肺組織中，主要來源于肺成纖維細胞、肺泡巨噬細胞、支氣管上皮細胞，最早是從致敏豚鼠支氣管肺泡灌洗液中分離獲得，可趨化嗜酸性粒細胞。韓君萍[8]學者通過大鼠實驗發(fā)現(xiàn)，氣道炎癥高反應時，肺內(nèi)Eotaxin基因可明顯升高，由此說明，Eotaxin在氣道炎癥中對炎癥細胞活化、聚集起到一定意義。在本次研究結果中，哮喘患兒Eotaxin水平表達高于對照組，進而佐證Eotaxin對趨化嗜酸粒細胞具有一定作用性，對此可從阻斷或抑制Eotaxin對嗜酸性粒細胞趨化作用作為防治哮喘患兒的新突破口[9]。

Eos最早是外國學者在1879年從動物血液中發(fā)現(xiàn)，參與了對寄生蟲天然防御，在氣道炎癥中發(fā)揮著重要意義，不僅具有吞噬作用，也是目前引起變態(tài)反應、氣道高反應性、氣道炎癥的關鍵細胞[10]。在正常情況下，Eos在凋亡后可從組織中清除掉，因此在人體含量較低，但當機體出現(xiàn)免疫性炎癥反應時，機體Eos的黏附分子表達可明顯增強，強化了對血管內(nèi)皮粘附作用。本次結果中，哮喘者體內(nèi)Eos含量高于對照組，推測原因是Eos內(nèi)含有基礎蛋白質(zhì)大的次級顆粒，一旦被刺激，便可激活，同時釋放嗜酸性粒細胞衍生神經(jīng)毒素、嗜酸性粒細胞過氧化物酶、陽離子蛋白、堿性蛋白，此類蛋白對氣道上皮有毒性作用，進而誘發(fā)氣道炎癥，介導氣道上皮細胞[11]。經(jīng)相關性分析，Eotaxin水平與Eos呈正相關性，推測原因是Eotaxin化學作用是吸引Eos在肺內(nèi)募集，可使得嗜酸性粒細胞活化，黏附于血管內(nèi)皮上，進而產(chǎn)生顆粒蛋白，損傷組織，兩者相互作用著，可在嗜酸粒細胞活化、黏膜、趨化中發(fā)揮著重要作用。

sIgE最早是在1966年發(fā)現(xiàn)的，1967年學者開始對IgE檢測進行報道，且在近代變態(tài)反應學中取得突破性進展。隨著近年來，相關研究增多[12]，學著發(fā)現(xiàn)IgE是人體血清中含量較低的免疫球蛋白，是引起I型變態(tài)反應的主要抗體，且B淋巴細胞、T淋巴細胞、巨噬細胞均參與了該蛋白合成。本次結果顯示，觀察組sIgE高于對照組，說明sIgE在哮喘小兒中存在異常表達。可能是因sIgE在進入人體后，可產(chǎn)生過敏因子，促使致敏的肥大細胞或嗜酸粒細胞的多種化學物質(zhì)產(chǎn)生活性反應，并逸出細胞外，從而引起哮喘發(fā)作，對此需盡可能避免接觸變應原，對于尋找變應原困難者，需通過測定IgE，明確是否存在變態(tài)反應性，以便后期治療[13]。經(jīng)相關性分析，sIgE與Eotaxin呈正相關性，說明Eotaxin與sIgE具有共同作用，能夠預測哮喘患病率，而Eotaxin與sIgE兩者細胞因子中，除了肥大細胞外，仍存在共同來源，可能是活化的上皮細胞。

肺功能檢查需依借影像技術，是一種簡便、安全的檢查方式，PEF、FEV1、FVC是目前反映肺功能最常用的幾類參數(shù)[14]。與健康體檢小兒相比，哮喘患兒PEF、FEV1、FVC水平更低，說明哮喘小兒在發(fā)病期間，可累及肺功能。主要體現(xiàn)為小氣道痙攣，再加上小氣道通氣功能受損、改變，可導致氣道炎癥反應加重，從而引起肺功能損傷。經(jīng)相關性分析，PEF、FEV1、FVC與Eotaxin呈負相關性，說明肺功能與Eotaxin水平表達存在一定相關性，可通過檢測Eotaxin水平變化，評判哮喘患兒肺功能嚴重程度，是一項客觀性評價指標[15]。但本次經(jīng)多元逐步回歸分析，僅FEVI對Eotaxin水平表現(xiàn)出特異性，為此關于肺功能與Eotaxin之間的關系還有待進一步探索。

綜上所述，哮喘患兒可出現(xiàn)明顯肺功受損，血清Eotaxin、Eos、sIgE含量改變，同時血清Eotaxin水平含量與肺功能、Eos、sIgE含量存在一定相關性，共同測定，有助于盡早明確診斷。