摘要：葉綠素a的含量是判定湖泊營養(yǎng)程度的重要指標(biāo)，通過對比熒光法和分光光度法對葉綠素a的測定值，表明兩種方法對水質(zhì)較好的湖泊水體中葉綠素a含量的測定結(jié)果無顯著差異。

關(guān)鍵詞：葉綠素a;熒光法;分光光度法;測定

葉綠素是植物光合作用中的重要光合色素，其中葉綠素a存在于浮游植物中，大約占有機干重的1%～2%，是表征浮游植物生物量和水體富營養(yǎng)化程度的重要指標(biāo)[1]。但葉綠素在自然界中不能穩(wěn)定存在，遇光、氧化劑、酸堿等都易分解。通過測定水中浮游植物葉綠素a的含量，可以掌握水體的初級生產(chǎn)力狀況以及富營養(yǎng)化水平，在環(huán)境監(jiān)測中，葉綠素a含量是評價水體富營養(yǎng)化的指標(biāo)之一[2]。

目前，測定葉綠素a的方法主要為熒光法[3][4]、分光光度法[5]以及高效液相色譜法[6]。熒光光度法可以現(xiàn)場測定葉綠素a，然而葉綠素降解產(chǎn)物易對光譜產(chǎn)生干擾從而造成誤差;分光光度法測定過程簡單可靠，目前是測定浮游植物葉綠素a的標(biāo)準(zhǔn)方法[4]，不過分光光度法人工提取葉綠素和測定過程較為繁瑣，人員誤差較大，抽濾研磨費時費力，分析人員與丙酮的接觸時間長，對分析人員的身體健康有害;高效液相色譜法操作復(fù)雜，儀器設(shè)備成本高，因此不適合快速檢測樣品。

本文對比熒光法和分光光度法測定地表水中葉綠素a的結(jié)果進行比較，為今后相關(guān)工作提供借鑒和參考。

1實驗部分

1.1主要儀器與試劑

天津奧特賽恩斯儀器有限公司AP-9901s型真空泵，玻璃砂芯過濾器（配500ml三角燒瓶）、玻璃研缽、冷藏干燥設(shè)備、醋酸纖維過濾膜、北京普析通用儀器有限責(zé)任公司T9型多波長紫外可見分光光度計、上海盧湘儀離心機儀器有限公司TDZ4-WS低速自動平衡離心機、10毫升離心管、10毫升容量瓶、燒杯、試管架。

Turner Designs設(shè)計生產(chǎn)的Trilogy實驗室型熒光儀，配有葉綠素?zé)晒饽K和10x10毫米異丁烯酸酯塑料管若干。

90%丙酮溶液、1%MgCO3懸濁液。

1.2樣品采集和處理

于淮南市不同湖泊表層采樣，采集水樣裝入容積為500ml的棕色塑料瓶中，每瓶水樣加入0.5ml1%MgCO3懸濁液并搖勻以防酸化所引起色素波長偏移，采樣完成后使用黑色塑料袋包裹遮光。按照規(guī)范分別由分光光度法和熒光法對每個樣品測量三次，取其均值。

1.3實驗方法

1.3.1分光光度法

將一定量樣品用濾膜過濾截留藻類，研磨破碎藻類細胞，用丙酮溶液提取葉綠素，離心分離后分別于750nm、664nm、647nm和630nm波長處測定提取液吸光度，根據(jù)公式計算水中葉綠素a的濃度。

ρ=[11.85×（A664-A750）-1.54×（A647-A750）-0.08×（A630-A750）]×V1/V

式中，ρ是葉綠素a含量，mg/m3;V是水樣體積（L），A是吸光值，V1是提取液定容后的體積（ml）。

1.3.2熒光法

檢查Trilogy實驗室型熒光儀連接，連好后開機，選擇葉綠素?zé)晒饽K，調(diào)取標(biāo)準(zhǔn)曲線后取待測樣品于管中，放入模塊測量，待示數(shù)穩(wěn)定后讀取數(shù)值。

2結(jié)果和討論

下表l顯示了分辨采用分光光度法和熒光法對淮南市6個不同湖泊水體中葉綠素a的含量進行測定，剔除由于誤差產(chǎn)生的異常測定值，計算各湖泊的三個平行樣測定結(jié)果的平均值。

從表1可以看出，在淮南市不同湖泊水體的6個葉綠素a測定值中，葉綠素a的分光光度法分析結(jié)果普遍高于熒光分析結(jié)果（（1#～5#點位），實際樣品分析時，測得6#點位的濁度高于其他位點，此時葉綠素a的測定結(jié)果為分光光度法分析結(jié)果低于熒光分析結(jié)果。根據(jù)趙洋甬等[7]在研究濁度對熒光法測定葉綠素a的影響時得出的結(jié)論，濁度可以增加水體中葉綠素a含量測定值，其增加量與濁度呈現(xiàn)正相關(guān)。其原因是水體中含有大量懸浮物或顆粒物，會對激發(fā)光和產(chǎn)生的熒光發(fā)生強烈的反射和散射作用，從而增加了測定的本底值，造成測定結(jié)果相對偏高。

去除6#點位測定值，采用T檢驗對分光光度法和熒光法測定1#～5#點位葉綠素a含量的數(shù)值進行分析比較，結(jié)果表明兩種方法測得的數(shù)值無顯著差異（P>0.05）。分析分光光度法測定湖泊水體中葉綠素a含量結(jié)果高于熒光法測定的結(jié)果，主要原因是分光光度法操作步驟中可以充分破碎藻類細胞壁，對葉綠素a的提取效率高[8];同時本次測定1#～5#點位的湖泊水體葉綠素a含量較低，水體相對潔凈，抽濾待測定水樣時不易堵塞濾膜，可以抽取較多體積的水樣（根據(jù)湖泊水體營養(yǎng)狀態(tài)，水樣過濾體積范圍在100～1000ml），從而對葉綠素a的測定結(jié)果產(chǎn)生了一定影響。

3結(jié)論

本文比較了分光光度法法和熒光法測定地表水中葉綠素a的結(jié)果，結(jié)果表明，分光光度法與熒光法測定水質(zhì)較好的地表水中葉綠素a的結(jié)果沒有顯著差異。當(dāng)水質(zhì)較差，水體濁度較高時，熒光法測定葉綠素a含量與濁度存在相關(guān)性，測定誤差增大。

采用熒光法可現(xiàn)場對地表水中葉綠素a含量進行測定，與實驗室分光光度法相比，分析過程相對簡單便捷、短時間即可獲取測定結(jié)果。隨著經(jīng)濟的快速發(fā)展，對于湖泊水體的環(huán)境保護力度在不斷加強，葉綠素a作為評價湖庫富營養(yǎng)化水平的重要指標(biāo)，其檢測方法也日益受到相關(guān)部門和科研機構(gòu)的高度重視，熒光法以其在葉綠素a測定中便捷性和實時性，結(jié)合湖庫營養(yǎng)狀態(tài)評價的其他指標(biāo)，可以快速判斷湖庫營養(yǎng)狀態(tài)，為水環(huán)境管理和科研工作提供即時的數(shù)據(jù)支撐。

參考文獻

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[2]童桂鳳，陳志芳，范瑩.分光光度法測定葉綠素a的比較[J].環(huán)境監(jiān)測管理與技術(shù)，2012，21（1）：53-55.

[3]張麗，郭翠蓮，張述偉，等.熒光法測定葉綠素a的影響因素及其數(shù)據(jù)校正[J].山東科學(xué)，2017，30（3）：8-11，16.

[4]呂鵬翼.熒光法測定水體中葉綠素的影響因素研究[D].石家莊：河北科技大學(xué)，2014

[5]環(huán)境保護部HJ 897-2017水質(zhì)葉綠素a的測定分光光度法[S].北京：中國環(huán)境科學(xué)出版社.2017

[6]戴榮繼，佟斌，黃春，等.HPLC測定飲用水中藻類葉綠素含量[J].北京理工大學(xué)學(xué)報，2006，26（1）：87-89

[7]趙洋甬，沈碧君，胡建林，等.濁度對熒光法測定葉綠素a的影響[C].中國環(huán)境科學(xué)學(xué)會學(xué)術(shù)年會論文集.北京：[s.n]，2013

[8]黃昌妙，葉樹才，王潮，等.浮游植物葉綠素a測定方法的比較分析[J].福建分析測試，2013，22（4）：23-27

作者簡介

王粟（1983-），男，漢族籍貫：安徽臨泉，職稱：工程師，學(xué)歷：安徽大學(xué)生態(tài)學(xué)，碩士研究生單位：淮南市環(huán)境保護監(jiān)測站，研究方向：環(huán)境監(jiān)測。