韓卓婷，黃 妹，林小菊，李木珍

廣東醫(yī)科大學附屬第二醫(yī)院，廣東 湛江 524000

侵襲性真菌感染是指人體受到侵襲性真菌入侵，在器官、組織或血液中生長繁殖，并引起炎癥反應的疾病和組織損傷，因早期缺乏診斷手段，臨床診斷難度較大，病死率高達55%～80%［1-3］。病理學檢查是診斷侵襲性真菌感染的金標準，雖診斷準確度較高，但因其為有創(chuàng)性檢查，風險較大，易增加患者痛苦，患者及其家屬難以接受，臨床應用存在一定的限制。半乳甘露聚糖抗原檢測（GM試驗）與1，3-β-D葡聚糖檢測（G試驗）是快速診斷侵襲性真菌感染的實驗室指標，具有無創(chuàng)、特異、敏感度等優(yōu)勢［4］，研究如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2017年2月—2019年7月廣東醫(yī)科大學附屬第二醫(yī)院接診的84例疑似侵襲性真菌感染患者為研究對象，女28例，男56例；年齡20～86歲，平均年齡（56.78±2.34）歲。研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會審核批準。入組患者均簽署知情同意書且臨床資料完整。

1.2 試劑與儀器

GM試驗：重慶恩鳴醫(yī)療設備公司的Senrise酶標儀，試劑盒購買自美國BioRad公司。G試驗：Tol智能恒溫儀GKT-10MSet動態(tài)真菌檢測試劑盒和質控品、MB-80微生物動態(tài)快速檢測系統(tǒng)，均購買自北京金山川科技發(fā)展公司。

1.3 方法

（1）G試驗。使用一次性無熱源、無菌真空采集管采集受檢者3 ml靜脈血，行10 min的3 000 r/min離心操作，取上清液。取0.1 ml上清液，放入含有0.9 ml樣品處理液中，混勻后，孵育10 min，溫度為70℃。用無熱源的吸頭取0.1 ml血清樣品，加入無熱平底試管（9 mm×65 mm）中，再加入反應主劑溶液0.1 ml，混勻，插入MB-80微生物快速動態(tài)檢測系統(tǒng)中反應，自動檢出1，3-β-D葡聚糖含量。嚴格按照試劑說明書進行操作。檢測結果為＞100 pg/ml，則評定為陽性。（2）GM試驗。在待測對照血清和300μL離心血清分別加入1.5 ml聚丙烯管中，并分別在試管中加入樣本處理液100μL，充分混勻，在120℃溫度下加熱6 min，隨后放入離心機中處理10 min，獲取上清液。在GM抗體包被的微孔板中加入待測樣本，孵育90 min后洗滌，術后加入四甲基聯(lián)苯胺底物顯色，加50μL終止液終止反應，在450 mm波長下用酶標儀測定樣本與對照孔的OD值，換算血清學指數(shù)。樣本OD值與臨界值血清OD值比值為血清學指數(shù)。血清學指數(shù)I＞0.5，則評定為陽性。

1.4 觀察指標

以病理學檢查為金標準，分析GM試驗、G試驗以及并聯(lián)（兩項實驗任一一項為陽性）檢測、串聯(lián)（兩項試驗均為陽性）檢測侵襲性真菌感染效能：特異度、敏感度、準確度。以n表示總例數(shù)，a表示真陽性，b表示假陽性，c表示假陰性，d表示真陰性。準確度=（a+d）/n，敏感度=a/（a+c），特異度=d/（b+d）。

1.5 統(tǒng)計學方法

應用SPSS 21.0軟件分析數(shù)據(jù)，計量資料以均數(shù)±標準差（±s）表示，組間比較采用t檢驗；計數(shù)資料以例數(shù)和百分比（%）表示，組間比較采用χ2檢驗，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 病理學檢查

84例患者經(jīng)病理學檢查顯示侵襲性真菌感染37例（44.05%），非侵襲性真菌感染47例（55.95%）。

2.2 侵襲性真菌感染、非侵襲性真菌感染患者G試驗、GM試驗結果

侵襲性真菌感染組G試驗、GM試驗的檢測值高于非侵襲性真菌感染組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），見表1。

表1 侵襲性真菌感染、非侵襲性真菌感染患者G試驗、GM試驗結果對比（±s）

表1 侵襲性真菌感染、非侵襲性真菌感染患者G試驗、GM試驗結果對比（±s）

組別侵襲性真菌感染組（n=37）非侵襲性真菌感染組（n=47）tP G試驗結果（pg/ml）243.68±68.26 23.10±8.65 21.966 0.000 GM試驗結果0.55±0.21 0.25±0.10 8.638 0.000

2.3 G試驗、GM試驗診斷侵襲性真菌感染效能

G試驗、GM試驗并聯(lián)檢測的準確度和敏感度高于G試驗、GM試驗單一檢測和串聯(lián)檢測，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；G試驗、GM試驗并聯(lián)檢測特異度高于串聯(lián)檢測，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），而G試驗、GM試驗并聯(lián)檢測的特異度略高于G試驗、GM試驗單一檢測，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），見表2和表3。

表2 G試驗、GM試驗診斷侵襲性真菌感染結果 例

表3 G試驗、GM試驗診斷侵襲性真菌感染效能分析

3 討論

近年來，因細胞毒性藥物、廣譜抗菌藥物、糖皮質激素、免疫抑制劑的廣泛應用以及大劑量X線照射、器官移植、侵入性檢查和惡性腫瘤、尿毒癥等慢性消耗性疾病的增加，侵襲性真菌感染患病率呈明顯上升趨勢［5］。侵襲性真菌感染早期無典型性癥狀體征，病情復雜且隱匿，診斷難度較大，易延誤病情，預后較差。組織活檢、影像學和真菌培養(yǎng)是檢測侵襲性真菌感染的常用方式。組織活檢為侵入性檢查，而真菌培養(yǎng)耗時長，陽性率較低，具有滯后性，同時易受到環(huán)境污染，影響診斷準確性；影像學典型表現(xiàn)出現(xiàn)較晚，臨床應用受到一定限制［6］。

1，3-β-D葡聚糖為絲狀真菌和酵母菌，占真菌細胞壁成分超50%。除接合菌外，1，3-β-D葡聚糖存在于所有真菌細胞壁上，當真菌進入機體深部組織或血液后，經(jīng)吞噬細胞的消化、吞噬等處理后，1，3-β-D葡聚糖可由細胞壁釋放至血液及腦脊液、胸水、腹水等體液中，增加體內(nèi)1，3-β-D葡聚糖含量，其是檢測真菌感染的有效指標，可反映真菌感染情況［7］。半乳甘露聚糖是曲霉菌細胞壁的重要組成成分，當機體受到曲霉菌感染后，其能從菌絲頂端釋放入血，其抗原可在血液中持續(xù)存在1～8周。半乳甘露聚糖抗原釋放量與機體內(nèi)菌量成正相關，可反映機體感染程度。本研究結果顯示，侵襲性真菌感染組G試驗、GM試驗的檢測值高于非侵襲性真菌感染組，提示G試驗、GM試驗均是診斷侵襲性真菌的有效手段。G試驗、GM試驗并聯(lián)檢測的準確度和敏感度高于G試驗、GM試驗單一檢測和串聯(lián)檢測，檢測特異度高于串聯(lián)檢測，而G試驗、GM試驗并聯(lián)檢測的特異度略高于G試驗、GM試驗單一檢測，但無明顯差異，提示G試驗、GM試驗聯(lián)合檢測可提高診斷準確度，指導治療。G試驗、GM試驗檢測物質與原理存在差異，且代謝規(guī)律不同，聯(lián)合檢測可起到優(yōu)勢互補作用，提高診斷準確性。

綜上所述，G試驗、GM試驗均可有效鑒別侵襲性真菌感染，聯(lián)合檢測具有高敏感度和準確度，可指導治療，改善預后，值得臨床推廣。