湯興芳

摘? 要：目的? 評估酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）檢測血清中丙型肝炎病毒抗體（抗-HCV抗體）灰區(qū)結(jié)果。方法? 選擇2017年1月～2020年1月期間于重慶市長壽區(qū)中醫(yī)院采用ELISA檢測血清抗-HCV結(jié)果呈灰區(qū)的135例患者所呈標本為研究樣本，對處于灰區(qū)的樣本選用化學發(fā)光微粒子免疫分析法（CMIA法）檢測，并進行核酸檢測（NAT）確認。統(tǒng)計分析ELISA檢測結(jié)果呈灰區(qū)患者的CMIA及NAT復檢陽性率。結(jié)果? 抗-HCV單、雙試劑（即同種試劑雙孔復試）灰區(qū)的結(jié)果經(jīng)CMIA、NAT復檢后均能檢出陽性結(jié)果，且抗-HCV單試劑灰區(qū)復檢結(jié)果陽性標本檢出率（即灰區(qū)樣本復檢結(jié)果呈陽性的標本例數(shù)/灰區(qū)樣本總例數(shù)）高于雙試劑灰區(qū)，NAT法陽性檢出率更高，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。結(jié)論? ELISA法檢測抗-HCV有一定的局限性，對處于灰區(qū)標本進行復檢，有利于提高檢出率，便于早期診斷和治療。

關(guān)鍵詞：酶聯(lián)免疫吸附試驗;丙型肝炎病毒抗體;灰區(qū)

中圖分類號：R511? ? 文獻標識碼：A? ? 文章編號：1009-8011（2021）-13-0182-02

酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）是臨床常用的丙型病毒性肝炎檢測方法，但有研究指出，ELISA過程中存在多種影響因素，會影響檢驗結(jié)果的準確性，尤其是臨界值附近結(jié)果，有時甚至會有同一實驗室不同批次結(jié)果或是不同實驗室試驗結(jié)果不一致的現(xiàn)象[1-2]。對于部分丙肝“窗口期”感染患者，采用ELISA法檢測血清中丙型肝炎病毒抗體（抗-HCV）易出現(xiàn)漏檢、誤診等情況[3]。在這種情況下，使用ELISA獲取的結(jié)果存在明顯風險，有可能影響到疾病的診斷及治療方案的合理選擇，甚至延誤病情，造成不良后果。本次研究通過對檢測結(jié)果進行復檢，評估分析ELISA檢測血清中丙型肝炎病毒抗體（抗-HCV抗體）灰區(qū)結(jié)果。詳細報告如下。

1? 資料與方法

1.1? 一般資料

選取重慶市長壽區(qū)中醫(yī)院2017年1月～2020年1月期間采用ELISA檢測血清抗-HCV抗體結(jié)果呈灰區(qū)的135例患者標本作為研究對象。其中男性67例，女性68例;年齡34～62歲，平均年齡（49.20±8.20）歲;病程3～11年，平均病程（6.79±2.40）年。研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會審核批準，患者均簽署知情同意書。

1.2? 納排標準

納入標準：①臨床資料齊全;②無其他嚴重臟器功能損傷情況。

排除標準：①其他肝臟病變疾患者;②對研究知情不同意;③依從性低。

1.3? 方法

儀器設(shè)備：丙型肝炎病毒抗體診斷試劑盒（化學發(fā)光法）（生產(chǎn)企業(yè)：日本希森美康）、丙型肝炎病毒核酸定量檢測試劑盒（生產(chǎn)企業(yè)：湖南圣湘生物科技有限公司）、丙型肝炎抗體室間質(zhì)評血清（生產(chǎn)企業(yè)：重慶臨檢中心）、CFX96熒光定量PCR儀（生產(chǎn)企業(yè)：伯樂公司）、HISCL-5000全自動化學發(fā)光免疫分析儀（生產(chǎn)企業(yè)：日本希森美康）。

在準備好儀器與試劑后，分別獲取患者的血清，進行化學發(fā)光微粒子免疫分析法（CMIA法）檢測以及核酸檢測（NAT）。檢測過程嚴格遵循檢測試劑盒的說明書和臨床檢驗操作SOP文件進行相關(guān)操作。

1.4? 觀察指標

ELISA檢測結(jié)果呈灰區(qū)患者的CMIA及NAT復檢陽性率。結(jié)果判定：①抗-HCV ELISA法檢測：選擇初篩樣本0.8<血樣測定吸光度值/臨界值（S/CO）<1.0試驗室檢查結(jié)果顯示為灰區(qū)。S/CO為0.7～3.0的樣本采用同種試劑雙孔復試，結(jié)果均為灰區(qū)的樣本需進行復檢，與單孔檢測結(jié)果進行比較;②CMIA法檢查：S/CO<1.0者為陰性;S/CO>1.0者為陽性。③HCV-RNA熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)（FQ-PCR）檢測：陽性結(jié)果判斷標準為>25 IU/mL[4]。復檢陽性率=復檢陽性標本例數(shù)/灰區(qū)樣本例數(shù)×100%。

1.5? 統(tǒng)計學處理

采用SPSS 21.0對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析。計量資料采用（x±s）表示，行t檢驗;計數(shù)資料采用[n（%）]表示，行χ2檢驗。P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2? 結(jié)果

CMIA復檢陽性20例，抗-HCV單試劑灰區(qū)CMIA復檢陽性率高于雙試劑灰區(qū)，差異存在統(tǒng)計學意義（χ2=5.484，P<0.05）。NAT復檢陽性26例，抗-HCV單試劑灰區(qū)HCV-RNA檢測陽性率高于雙試劑灰區(qū)，差異存在統(tǒng)計學意義（χ2=5.059，P<0.05）。與CMIA法復檢結(jié)果相比，NAT復檢陽性檢出率更高，差異存在統(tǒng)計學意義（χ2=4.129，P<0.05）。見表1。

3? 討論

丙型病毒性肝炎因感染丙型肝炎病毒（HCV）導致，以慢性肝臟損害為主，屬于乙類傳染病。丙型病毒性肝炎主要傳播途徑是血液傳播，輸血或血液透析過程中血液制品的污染是醫(yī)院感染的主要原因。人群普遍易感，且被感染后產(chǎn)生的抗-HCV并非保護性抗體，痊愈后仍可再患。HCV是一種于1989年經(jīng)分子克隆技術(shù)發(fā)現(xiàn)的具有較強傳染性的病毒，主要通過性行為、血液、母嬰途徑傳播。所致的丙型肝炎呈全球性分布，目前，全球范圍內(nèi)有1.8億以上HCV攜帶者。該疾病進展緩慢，對人體肝臟的破壞極為隱匿，很多丙肝病毒感染患者的肝功能檢查結(jié)果往往顯示正常，容易造成誤診與漏診，但是人體一旦感染丙肝病毒，容易轉(zhuǎn)化成慢性肝炎并發(fā)展為肝硬化甚至肝細胞癌，不僅威脅患者的身體健康，還會威脅患者的生命安全。目前，體外免疫檢測技術(shù)很多，且隨著抗體制備和標記技術(shù)的提升，靈敏度和特異性都有了很大的提高，但ELISA作為一種傳統(tǒng)經(jīng)典的檢測技術(shù)，是我國醫(yī)學實驗室用于檢測感染性疾病抗體的常用方法，具有檢測快速便捷、成本較低、獲取結(jié)果速度快等優(yōu)點。目前，一些血站、急救中心對于血液制品的管理與樣本檢測多采用ELISA法。ELISA法檢測的基本原理為抗原、抗體的特異性反應(yīng)，該方法快速、敏感、簡便、易標準化、便捷，具有靈敏度和特異性高的優(yōu)勢。應(yīng)用實踐中，一些實驗室應(yīng)用工作臨界值即設(shè)立“灰區(qū)”，將推薦的判定值下調(diào)，以達到防止弱陽性標本漏檢的目的[5]。

本次研究選取近三年來重慶市長壽區(qū)中醫(yī)院經(jīng)ELISA檢測的血清抗-HCV抗體結(jié)果呈灰區(qū)的135例患者血清標本作為研究對象，并進行化學發(fā)光法聯(lián)合HCV抗原復檢，并進行核酸檢測（NAT）確認，對檢測后的結(jié)果進行比較。結(jié)果顯示，抗-HCV單、雙試劑灰區(qū)結(jié)果經(jīng)CMIA、NAT復檢后均能檢出陽性結(jié)果，抗-HCV單試劑灰區(qū)復檢結(jié)果陽性標本檢出率（即灰區(qū)樣本復檢結(jié)果呈陽性的標本例數(shù)/灰區(qū)樣本總例數(shù)）高于雙試劑灰區(qū)，并且NAT陽性檢出率更高 （P<0.05）。可以認為，ELISA法對抗-HCV檢測的結(jié)果存在一定范圍內(nèi)的偏差，需要方法上的改進和更新。但有研究提示[6]，由于HCV-RNA在HCV感染的急性期、慢性轉(zhuǎn)換期或感染恢復期時難以被檢出，單純依靠NAT復檢ELISA抗-HCV灰區(qū)仍然存在出現(xiàn)錯誤結(jié)果的風險。筆者認為，適當調(diào)整灰區(qū)設(shè)置，或采用FQ-PCR擴增、抗原檢測等方法能夠進一步矯正試驗結(jié)果。

綜上所述，采用ELISA法對抗-HCV進行檢測有一定的局限性，對處于灰區(qū)的標本進行復檢，能夠有效提高檢出率。一方面能夠針對丙肝患者給予相應(yīng)的早期診斷對于及時制定治療方案有積極意義，另一方面能夠減輕患者心理負擔，同時避免醫(yī)療糾紛的發(fā)生。

參考文獻

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[2]宋慶召.血液透析患者丙型肝炎病毒非輸血感染的危險因素及其預防[J].醫(yī)學新知雜志，2019，29（3）：284-287.

[3]王瑞，葛紅衛(wèi)，黃力勤，等.使用相同抗-HCVELISA試劑的6家血站實驗室灰區(qū)設(shè)定分析[J].中國輸血雜志，2018，31（2）：105-109.

[4]周軍杰.核酸檢測對酶聯(lián)免疫吸附試驗法檢測乙型肝炎表面抗原、丙型肝炎病毒抗體結(jié)果呈灰區(qū)及弱反應(yīng)性標本復檢的必要性探討[J].中國醫(yī)學工程，2017，25（7）：73-75.

[5]伊學軍，翟建新.酶聯(lián)免疫吸附試驗與化學發(fā)光微粒子檢查丙肝結(jié)果對比分析[J].中國社區(qū)醫(yī)師，2016，32（19）：111，114.

[6]嚴謹，徐磊，曾文娟.2種方法檢測血清中抗-HCV灰區(qū)結(jié)果分析[J].臨床血液學雜志（輸血與檢驗），2017，30（3）：464-467.