馮曉丹，葉莉莉，高玲娟，顧平清(江蘇省南京市婦幼保健院檢驗科 210004)

?

·論 著·

人類免疫缺陷病毒抗體檢測“灰區(qū)”設置的探討*

馮曉丹，葉莉莉，高玲娟，顧平清
(江蘇省南京市婦幼保健院檢驗科 210004)

目的 通過酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)檢測人類免疫缺陷病毒(HIV)抗體，旨在設置科學、合理的HIV抗體檢測的“灰區(qū)”范圍，減少HIV抗體陽性的漏檢率。方法 采用ELISA對吸光度值/臨界值(S/CO)介于大于0.8～<1.2的30例臨界值患者血清進行HIV抗體檢測，以此S/CO值，設置“灰區(qū)”范圍；對于S/CO介于灰區(qū)的標本進行免疫印跡確證。結果 設置灰區(qū)參考范圍為0.796～1.204；共有46例處于“灰區(qū)”的血清標本，經(jīng)免疫印跡確證為陽性3例，不確定1例。結論ELISA檢測HIV抗體應設置合理的“灰區(qū)”范圍，對灰區(qū)的標本進行確證，對減少HIV抗體陽性漏檢具有重要的臨床意義。

HIV抗體； 灰區(qū)； 酶聯(lián)免疫吸附試驗

獲得性免疫缺陷綜合征(AIDS)是由人類免疫缺陷病毒(HIV)引發(fā)的一種免疫缺陷性疾病[1]。到2010年，我國HIV感染者已達1 000萬，嚴重威脅著人類健康[2]。為了有效控制艾滋病的傳播，WHO和我國衛(wèi)生部將酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)首推為HIV抗體篩查方法[3-4]。在ELISA檢測HIV抗體過程中，對Cut-off值的設定尤為重要，而接近Cut-off值的結果往往難以判斷，研究者將其定義為“灰區(qū)”[5]。本研究旨在根據(jù)本實驗室實際情況，科學、合理地設置HIV抗體檢測的“灰區(qū)”范圍，最大限度地檢出可疑標本，防止HIV抗體弱陽性標本的漏檢。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2008年1月至2014年12月南京市婦幼保健院門診患者28 760份血液標本，無溶血、脂血、黃疸等，收集后-20 ℃保存。

1.2 儀器與試劑 HAMILTON全自動酶免分析儀(瑞士Hamilton Bonaduz AG)。HIV(1+2型)ELISA試劑盒由北京萬泰藥業(yè)股份有限公司提供(國藥準字S20000024)，批號分別為I201102038034、I201101028021、I201105088083；HIV(1+2型)ELISA試劑盒由英科新創(chuàng)(廈門)科技公司提供(國藥準字S20000039)，批號分別為2011086615、2011126622、2011116618、2011076613。

1.3 方法 ELISA嚴格按照試劑盒說明書流程以及初篩試驗流程進行操作。根據(jù)說明書判定北京萬泰HIV診斷試劑的Cut-off值為0.124，英科新創(chuàng)HIV診斷試劑的Cut-off值為0.105。將原始吸光度值/臨界值(S/CO)，根據(jù)回歸方程計算S/CO的平均值為1時(臨界值血清)的CV值?；覅^(qū)的上限和下限計算公式分別為：灰區(qū)上限(S/CO值)=1+2CV，灰區(qū)下限(S/CO值)=1-2CV[6]。

2 結 果

2.1 HIV抗體試驗“灰區(qū)”的參考范圍 將處于0.8

表1 HIV體抗體臨界值血清所測吸光度、S/CO值

2.2 灰區(qū)標本確證結果 28 760份血清標本經(jīng)免疫印跡確證為陽性的共計8例(表2僅示例陽性結果3例，其余5例陽性結果未處于灰區(qū))，經(jīng)ELISA試劑初篩S/CO值在0.796～1.204的血清共計46例(表2僅示例23例結果)，將其確定為灰區(qū)標本。經(jīng)免疫印跡確證為陽性的3例，占比例為6.52%(3/46)；不確定1例，占比例為2.17%(1/46)。減少HIV抗體漏檢率為25%(2/8)，假陽性比例為86.9%(20/23)，見表2。

表2 “灰區(qū)”標本經(jīng)確證的陽性結果

3 討 論

臨床實驗室針對HIV抗體測定時，ELISA均需要設置一段“灰區(qū)”范圍[7]，然而目前，國內(nèi)定性試劑生產(chǎn)廠家并未對其“灰區(qū)”范圍進行科學、合理地設定，而且各實驗室對于“灰區(qū)”設定的觀點眾說不一。在實際的HIV抗體檢測時，設置合適的“灰區(qū)”范圍能最大限度地減少陽性漏檢的問題，“灰區(qū)”范圍的確定使得測定結果假陽性與假陰性發(fā)生率降低[8]。在本研究中，作者探討了“灰區(qū)”范圍的合適范圍，將處于0.8

根據(jù)本試驗室設置的“灰區(qū)”范圍，進一步將S/CO值處于“灰區(qū)”的血清共計46例進行免疫印跡確證，結果顯示陽性3例，占比例為6.52%(3/46)，不確定1例，占比例為2.17%(1/46)。原因分析：(1)國內(nèi)HIV抗體篩查試劑盒，多采用ELISA雙抗體(抗原)夾心法，但ELISA診斷試劑的局限性使得不能及時捕捉HIV抗體檢測的窗口期[9]，針對這些標本的檢測，其結果可能為陰性或處在灰區(qū)，但具有傳染性，如表2中的標本2。(2)部分患者標本，經(jīng)多次檢測，HIV抗體的S/CO值始終處在“灰區(qū)”范圍，此為真抗體弱陽性，其原因可能為基因片段的突變導致試劑盒檢測吸光度值降低[10]，如表2中的標本1、3、4。且本研究揭示，針對灰區(qū)的標本進行進一步確證，HIV抗體漏檢率為25%(2/8)，假陽性比例為86.9%(20/23)?；诖?，合理、科學地設置灰區(qū)范圍，能使ELISA最大限度地檢出陽性標本，防止弱陽性標本的漏檢，可有效保證檢測結果的準確性。

[1]Patel SM,Johnson S,Belkllap SM,et al.Serious adverse cutaneous and hepatic toxicities associated with nevirapine use by non-HIV-infected individuals[J].J Acquir Immune Defic Syndr,2004，35(2):120-125.

[2]Chinese Medical Association,Chinese Center for Disease Control and Prevention.Guidelines for diagnosis and treatment of HIV/AIDS in China(2005)[J].Chin Med J(Engl)，2006，119(19):1589-1608.

[3]楊春暉,張容,鄭鵬,等.影響抗HIV弱陽性質(zhì)控血清穩(wěn)定性的幾種因素探討[J].中國輸血雜志,2008，21(6):441-443.

[4]李金明.臨床酶免疫測定技術[M].北京:人民軍醫(yī)出版社,2005:95.

[5]周艷萍,倪詩強,黃勇進.酶聯(lián)免疫吸附試驗“灰區(qū)”結果探討[J].檢驗醫(yī)學與臨床,2008,5(14):876-877.

[6]伍偉健,郭如華.ELISA試驗灰區(qū)設置方法的探討[J].中國生物制品學雜志，1998,21(10):911-912.

[7]Parkin JM,Murphy M,Anderson J,et al.Tolerability and side-effects of post-exposure prophylaxis for HIV infection[J].Lancet,2000,355(9205):722-723.

[8]龐棟.血站實驗室質(zhì)控物的制備和應用[J].醫(yī)學文選,2001,12(3):351-352.

[9]Parienti JJ,Massari V,Descamps D,et al.Predictors of virologic failure and resistance in HIV-infected patients treated with nevirapine-or efavirenz-based antiretroviral therapy[J].Clin Infect Dis,2004,38(9):1311-1316.

[10]Tourret J,Deray G,Isnard-Bagnis C.Tenofovir effect on the kidneys of HIV:infected patients:a double-edged sword?[J].J Am Soc Nephrol,2013，24(10):1519-1527.

Study on gray area setting in HIV antibody detection*

FENGXiao-dan,YELi-li,GAOLing-juan,GUPing-qing
(DepartmentofClinicalLaboratory,NanjingMaternityandChildHealthCareHospital,Nanjing,Jiangsu210004,China)

Objective To set the scientific and rational gray area range of HIV antibody detection by ELISA for reducing the missed detection rate of HIV antibody detection.Methods Thirty serum specimens with the critical value range of 0.8

HIV antibody； gray area； enzyme-linked immunosorbent assay

江蘇省南京市科技發(fā)展計劃資助項目(201308041)。

馮曉丹，女，主管檢驗醫(yī)師，碩士，主要從事醫(yī)學檢驗相關工作。

10.3969/j.issn.1672-9455.2015.22.015

A

1672-9455(2015)22-3332-02

2015-06-11

2015-09-11)