方曉華

(江門(mén)市中心醫(yī)院，廣東 江門(mén) 529000)

0 引言

胸腔積液是臨床多發(fā)呼吸系統(tǒng)疾病之一，大部分是因?yàn)樾啬らg皮瘤、非小細(xì)胞肺癌等發(fā)展而形成的。臨床上，主要應(yīng)用胸腔積液脫落的細(xì)胞實(shí)施檢查，該方法能夠?qū)⑿厍环e液中是否存在腫瘤進(jìn)行判斷，其在疾病診治中具有重要作用。以往關(guān)于胸腔積液的判斷以胸腔積液細(xì)胞涂片法為主，但是因?yàn)殚g皮細(xì)胞缺乏顯著增生或者細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)并不明顯，進(jìn)而導(dǎo)致誤診的出現(xiàn)，漿膜腔原發(fā)性間皮性腫瘤與轉(zhuǎn)移性癌的鑒別診斷難度較大[1]。近年，在醫(yī)療技術(shù)水平日益提高的背景下，免疫組化染色技術(shù)使用范圍越來(lái)越廣，其能夠有效鑒別診斷間皮性腫瘤與轉(zhuǎn)移性癌?；诖?，本次研究針對(duì)細(xì)胞塊結(jié)合免疫組化技術(shù)在惡性胸腔積液病理診斷中的應(yīng)用效果進(jìn)行分析，具體如下。

1 資料與方法

1.1 資料

隨機(jī)抽選本院2019年1月至2021年2月接收的30例惡性胸腔積液患者，其中有18例男，12例女；最小年齡36歲，最大年齡67歲，均值(52.23±3.15)歲。原發(fā)腫瘤組織學(xué)分型：6例小細(xì)胞癌，9例鱗癌，15例腺癌。經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。納入標(biāo)準(zhǔn)：惡性胸腔積液診斷標(biāo)準(zhǔn)與《惡性胸腔積液診斷與治療專(zhuān)家共識(shí)》相符；自愿簽署研究同意書(shū)。排除標(biāo)準(zhǔn)：合并器官功能障礙；伴有全身感染；具有精神疾病史；哺乳期或者妊娠期婦女。

1.2 方法

1.2.1 細(xì)胞學(xué)涂片

標(biāo)本靜置大約6-12h，去除上清液，向試管中放置50mL進(jìn)行5min離心操作，離心速度為每min2000r，然后將上清液去除，均勻混合底部0.5mL左右的細(xì)胞液，在載玻片上均勻涂抹，然后采用95%的乙醇進(jìn)行10-30min固定，采用HE染色。

1.2.2 制作細(xì)胞塊

在50mL的離心管中放入胸腔積液，按照每min2500r的速度進(jìn)行大約10min的離心操作，多次離心后，將底部沉渣保留下來(lái)，將上清液去除，添加4%的中性多聚甲醛進(jìn)行固定，離心靜置1h后向包埋盒中放置沉淀物，實(shí)施常規(guī)脫水包埋，然后切片，厚度約0.4μm，最后實(shí)施HE染色。

1.2.3 免疫組化染色

利用免疫組化技術(shù)分析惡性胸腔積液細(xì)胞塊切片，應(yīng)用DAB顯色實(shí)際與抗體，試驗(yàn)期間，免疫組化染色方法嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)展開(kāi)。細(xì)胞蠟塊切片，厚度為4μm，常規(guī)烤片1h脫蠟直至出水，過(guò)氧化氫將內(nèi)源性過(guò)氧化物酶阻斷，微波抗原修復(fù)，添加一抗4℃孵育過(guò)夜，DAB顯色，然后應(yīng)用蘇木素再次染色，PBS代替一抗為陰性對(duì)抗。

1.3 觀察指標(biāo)

分析細(xì)胞角蛋白7(CK7)、腎母細(xì)胞瘤基因1(WT-1)、癌胚抗原(CEA)、甲狀腺轉(zhuǎn)錄因子1(TTF-1)、淋巴細(xì)胞抗原(CD56)、細(xì)胞角蛋白5/6(CK5/6)和嗜鉻素A(CgA)陽(yáng)性檢出狀況[2]。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

小細(xì)胞癌中，P63、WT-1、TTF、CK5/6、CgA、CD56、CK7、CEA陽(yáng) 性 表 達(dá) 率 分 別 是0.00%、16.67%、83.33%、0.00%、100.00%、100.00%、16.67%、3.33%；鱗 癌 中，P63、WT-1、TTF、CK5/6、CgA、CD56、CK7、CEA陽(yáng) 性 表 達(dá) 率 分 別 是100.00%、22.22%、11.11%、100.00%、22.22%、0.00%、22.22%、33.33%；腺癌中，P63、WT-1、TTF、CK5/6、CgA、CD56、CK7、CEA陽(yáng)性表達(dá)率分別是20.00%、13.33%、100.00%、0.00%、13.33%、0.00%、86.67%，詳見(jiàn)表1。

表1 分析不同組織類(lèi)型肺癌惡性胸腔積液細(xì)胞塊中各項(xiàng)指標(biāo)的表達(dá)[n(%)]

3 討論

胸腔積液是許多肺癌患者并沒(méi)有發(fā)現(xiàn)原發(fā)病灶前的主要癥狀，如何確診胸腔積液的性質(zhì)在肺癌組織學(xué)分型中具有重要作用。據(jù)有關(guān)資料顯示[3]，關(guān)于非小細(xì)胞肺癌的治療方案的制定也是以病理分型為基礎(chǔ)而形成的。

本次研究主要應(yīng)用胸腔積液離心制作細(xì)胞塊方法，同常規(guī)涂片方法相比，其具有顯著優(yōu)勢(shì)。常規(guī)圖片是在靜置標(biāo)本后直接展開(kāi)細(xì)胞學(xué)涂片，對(duì)具有診斷意義的細(xì)胞進(jìn)行查找，但是該方法很可能混有炎性滲出物和紅細(xì)胞，而且標(biāo)本細(xì)胞密度偏低，導(dǎo)致細(xì)胞涂片厚度不同，導(dǎo)致多個(gè)細(xì)胞重疊，增加了惡性腫瘤漏檢率。連續(xù)且細(xì)胞塊，能夠?qū)⒔M織學(xué)結(jié)構(gòu)盡可能的保留下來(lái)，包括乳頭結(jié)構(gòu)、腺管和腺泡等，與此同時(shí)，細(xì)胞塊能夠?yàn)榛驒z測(cè)和免疫組化檢測(cè)奠定基礎(chǔ)[4]。本次研究中的胸腔積液細(xì)胞塊HE染色切片中可以發(fā)現(xiàn)乳頭狀結(jié)構(gòu)和腺管狀結(jié)構(gòu)，鱗癌上也能夠發(fā)現(xiàn)與組織學(xué)類(lèi)似的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)，小細(xì)胞癌中能夠發(fā)現(xiàn)被擠壓的腫瘤細(xì)胞。為進(jìn)一步明確具體類(lèi)型，為臨床治療方案的制定提供參考，需要結(jié)合免疫組化檢查方法，通過(guò)檢測(cè)P63、CEA、WT-1、CK7、DK5/6、CD56等抗體，從而對(duì)其診斷價(jià)值進(jìn)行探討。本次研究結(jié)果顯示，小細(xì)胞癌中，P63、WT-1、TTF、CK5/6、CgA、CD56、CK7、CEA陽(yáng)性表達(dá)率分別是0.00%、16.67%、83.33%、0.00%、100.00%、100.00%、16.67%、3.33%；鱗癌中，P63、WT-1、TTF、CK5/6、CgA、CD56、CK7、CEA陽(yáng)性表達(dá)率分別是100.00%、22.22%、11.11%、100.00%、22.22%、0.00%、22.22%、33.33%；腺 癌 中，P63、WT-1、TTF、CK5/6、CgA、CD56、CK7、CEA陽(yáng)性表達(dá)率分別是20.00%、13.33%、100.00%、0.00%、13.33%、0.00%、86.67%，腺癌中，CEA、TTF-1和CK7具有較高的陽(yáng)性率，TTF-1是一種核蛋白，其主要存在成人Ⅱ型肺泡上皮和肺組織中，大部分肺小細(xì)胞癌和肺腺癌經(jīng)過(guò)免疫組化檢查提示TTF-1表現(xiàn)為陽(yáng)性。此外，腺癌中，CEA和CK7同樣具有良好的表達(dá)，尤其是CK7，表達(dá)較高，小細(xì)胞癌和鱗癌中，該指標(biāo)表達(dá)相對(duì)偏低。鱗癌中，P63、CK5/6具有較高的陽(yáng)性率，P63是一種鱗癌標(biāo)記物，其具有較高的陽(yáng)性率和面趕驢，CK5/6主要存在于細(xì)胞膜與細(xì)胞漿中，小細(xì)胞癌及腺癌中未見(jiàn)CK5/6表達(dá)，由此可見(jiàn)，該指標(biāo)具有較高的特異性和敏感性。小細(xì)胞癌中，CgA及CD56具有較高的陽(yáng)性率。據(jù)有關(guān)資料顯示[5]，免疫組化標(biāo)記物包括CD56、CgA及Syn，本次研究結(jié)果與之相似，于胸腔積液細(xì)胞塊中實(shí)施免疫組化，小細(xì)胞癌中，CgA和CD56具有較高的陽(yáng)性率。

細(xì)胞塊結(jié)合免疫組化技術(shù)能夠彌補(bǔ)傳統(tǒng)細(xì)胞涂片檢查的不足，更好地保存細(xì)胞標(biāo)本，促進(jìn)診斷準(zhǔn)確率的提高[6]。該檢測(cè)方法利用許多特異性抗體對(duì)細(xì)胞有關(guān)抗原進(jìn)行檢測(cè)，同時(shí)結(jié)合酶著色反應(yīng)將細(xì)胞分布狀況、定位和活性等清楚的反映出來(lái)，從而對(duì)疾病的良性和惡性進(jìn)行判斷，同時(shí)判斷腫瘤類(lèi)型[7]。因?yàn)檫B續(xù)切片，對(duì)于多項(xiàng)檢查的實(shí)施十分有利，該方法有助于診斷準(zhǔn)確率提高，除此之外，該檢查方法具有操作便捷、簡(jiǎn)單等特點(diǎn)，能夠?qū)﹃?yáng)性物質(zhì)準(zhǔn)確定位。免疫組化技術(shù)利用專(zhuān)業(yè)儀器進(jìn)行染色，能夠盡量減少人為因素造成的影響，確保診斷結(jié)果準(zhǔn)確性，與此同時(shí)，只需要一名人員進(jìn)行操作，減少了醫(yī)療自愿的浪費(fèi)，該檢查方法檢查設(shè)備操作簡(jiǎn)單，并不會(huì)導(dǎo)致受檢者痛苦程度，對(duì)于配合度的改善十分有利[8]。而且以上兩種檢查方法結(jié)合對(duì)于疾病的鑒別診斷十分有利，其為臨床診治提供了重要數(shù)據(jù)參考。

總而言之，細(xì)胞塊結(jié)合免疫組化技術(shù)在惡性胸腔積液診斷中具有較高的應(yīng)用價(jià)值，其有助于診斷率提高，鱗癌及腺癌鑒別診斷過(guò)程中，建議應(yīng)用CK5/6、TTF-1和P63；針對(duì)小細(xì)胞癌的診斷，建議應(yīng)用CgA與CD56。