逯世林，劉建立，劉偉，韓曉莉，關坤萍

(山西醫(yī)科大學第二醫(yī)院，山西 太原 030001)

為了保證檢測系統(tǒng)的完整性、準確性，確保檢測結果準確可靠，本研究參照美國臨床與實驗室標準化委員會(CLSI)制定的相關指南文件、中華人民共和國衛(wèi)生行業(yè)標準(WS/T 406-2012)、全國臨床檢驗操作規(guī)程等，根據(jù)ISO15189：2012《醫(yī)學實驗室—質量和能力的要求》對ACL-TOP700CTS全自動凝血分析儀檢測凝血酶原時間(PT)、活化部分凝血活酶時間(APTT)、纖維蛋白原(FIB)的精密度、正確度、線性范圍、可比性、攜帶污染率(CR)及參考區(qū)間等主要性能指標進行了驗證與評價，報告如下。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

沃芬公司生產(chǎn)的ACL-TOP700CTS，ACL-TOP700(對照儀器)全自動凝血分析儀，原裝配套試劑及質控品。

1.2 儀器和項目校準

驗證前，儀器生產(chǎn)廠家對ACL-TOP700CTS和ACL-TOP700全自動凝血分析儀及PT，APTT，F(xiàn)IB進行了校準。

1.3 標本選取與處理

選取我院住院患者40 例和健康體檢者20 例，采集空腹靜脈血2.7 mL，置于枸櫞酸鈉抗凝管(1∶9)中，顛倒混勻，在采集后1 h內(nèi)離心并分離血漿，備用。

1.4 驗證方法

按照美國臨床與實驗室標準化委員會(CLSI)制定的相關指南文件及衛(wèi)生行業(yè)標準，對PT，APTT，F(xiàn)IB檢測的性能指標進行驗證。

1.4.2 日間精密度驗證

參照CLSI EP15-A2文件，使用正常和異常兩個濃度水平的質控品。室內(nèi)質控項目在檢測當天至少進行一次室內(nèi)質控，若有失控數(shù)據(jù)須剔除，且必須查找原因，糾正失控結果。將本月在控數(shù)據(jù)導出計算變異系數(shù)。本研究使用ACL-TOP700CTS全自動凝血分析儀上的實驗室室內(nèi)質控數(shù)據(jù)代替。

1.4.3 線性范圍驗證

參照CLSI EP6-A[2]文件，選取一份FIB測定結果接近檢測范圍上限的高值血漿樣本(H)，再選取一份FIB測定結果接近檢測范圍下限的低值血漿樣本(L)，將H和L樣本按4L，3L+1H，2L+2H，1L+3H，4H關系各自配制混合，形成5份評價樣本。將每份評價樣本在ACL-TOP700CTS全自動凝血分析儀上重復測定3次，分別計算均值，將均值作為每一份評價樣本的實測值；4L和4H兩份標本的理論值等同于各自的實測值，3L+1H，2L+2H，1L+3H三份評價樣本的理論值分別以4L和4H的理論值為基礎，按對應配制混合稀釋度計算得到各份評價樣本理論值。將實測值與理論值作線性回歸，計算方程y=ax+b，驗證線性范圍。要求a值在(1±0.05)范圍內(nèi)，相關系數(shù)r≥0.975。

1.4.4 正確度驗證

參照CLSI EP15-A2文件，選取10份檢測結果在參考區(qū)間范圍內(nèi)的臨床樣本，將每份樣本在ACL-TOP700CTS全自動凝血分析儀各重復測定兩次，計算20次測定結果的總均值，在ACL-TOP700(對照儀器)全自動凝血分析儀上各測定1次，計算總均值。以對照儀器的測定總均值為標準，計算偏倚，按照臨床血液學檢驗常規(guī)項目分析的質量要求，F(xiàn)IB的偏倚應≤10%、PT的偏倚應≤7.5%、APTT的偏倚應≤7.5%。

1.4.5 可比性驗證

課后教師可以通過兩種形式輔導答疑：第一，通過微課網(wǎng)絡平臺，教師要及時回答學生在平臺上提出的問題，可以逐一回答，也可以統(tǒng)一回答，目的是讓學生及時糾正自己的錯誤。第二，教師通過批改學生的作業(yè)發(fā)現(xiàn)問題，及時給學生反饋信息，同時根據(jù)學生的反饋信息及時調(diào)整修改完善課前預習資源庫，還可以將難題、重點題及易錯題等題的解題過程及思路制成微視頻，為學生課后進一步的學習創(chuàng)造條件，在微課中還可以對試題舉一反三，從不同角度進行解析，使學生觸類旁通，融會貫通，這樣可以滿足不同層次學生課后拓展學習的需要。

選取20份臨床患者標本(正常和異常濃度各占50%)，分別在ACL-TOP700CTS和ACL-TOP700全自動凝血分析儀上進行檢測。本研究以ACL-TOP700全自動凝血分析儀為對照儀器，以其測定結果為標準，計算相對偏差。每個項目至少有80%的相對偏差≤1/2允許總誤差(臨床血液學檢驗常規(guī)項目分析質量要求)。

1.4.6 攜帶污染率驗證

樣本濃度攜帶污染率(CR)驗證：根據(jù)凝血分析儀行業(yè)標準(YY/T0659-2017)，選取1份高濃度FIB樣本，連續(xù)測定3次，將測定值分別記錄為H1，H2和H3；再取低濃度FIB樣本，連續(xù)測定3次，將測定值分別記錄為L1，L2，L3(高濃度樣本的濃度必須大于低濃度樣本的2倍)。按公式CR1=∣(L1-L3)∣/(H3-L3)×100%計算攜帶污染率。項目攜帶污染率驗證：取1份正常血漿標本連續(xù)測定PT 3次(j1，j2，j3)后，立即連續(xù)測定FIB(A1，A2，A3)3次(血漿FIB濃度要求3～4 g/L)，再測定PT 1次(j4)。根據(jù)下面公式計算攜帶污染率，即CR2=[(j1+j2+j3)/3-j4]/(j1+j2+j3)/3×100%。如果(j1+j2+j3)/3-j4≤0，則CR為0。FIB的攜帶污染率應≤10%。

1.4.7 參考區(qū)間驗證

參照CLSI C28-A2[3]文件，選取我院20 例符合要求的健康體檢者的血漿標本進行小樣本驗證，同批分別測定PT，APTT和FIB，將20個測定值與需驗證的參考區(qū)間比較，若落在參考限外的測定值不超過2個，則驗證通過。

1.5 統(tǒng)計學方法

采用Excel 2007進行數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析。

2 結 果

2.1 批內(nèi)精密度驗證

ACL-TOP700CTS全自動凝血分析儀檢測PT，APTT，F(xiàn)IB的批內(nèi)精密度測定結果顯示，各指標的變異系數(shù)(CV)均符合標準(見表1)。

表1 PT和APTT及FIB批內(nèi)精密度驗證結果

2.2 日間精密度驗證

ACL-TOP700CTS全自動凝血分析儀檢測PT，APTT和FIB的日間精密度結果見表2。結果表明，各項目的變異系數(shù)均符合標準。

表2 PT和APTT及FIB日間精密度驗證結果

2.3 線性范圍驗證

5個水平的FIB實測均值與理論值之間線性關系良好，F(xiàn)IB線性范圍為0.73～5.74 g/L，a值為0.984 9，r為0.996 6，R2為0.993 3，表明該儀器的檢測結果FIB達到線性要求(見圖1)。

圖1 ACL-TOP700CTS全自動凝血分析儀FIB線性驗證

2.4 正確度驗證

以參加國家衛(wèi)生健康委員會臨檢中心室間質評的ACL-TOP700全自動凝血分析儀為對照儀器，分別計算PT，APTT，F(xiàn)IB的偏倚，偏倚均低于判斷標準，滿足臨床血液學檢驗常規(guī)項目分析的質量要求(見表3)。

表3 PT和APTT及FIB正確度驗證結果

2.5 可比性驗證

ACL-TOP700CTS全自動凝血分析儀與ACL-TOP700全自動凝血分析儀相比，選取并測定血漿樣本PT，APTT，F(xiàn)IB的結果偏差符合血液學檢驗常規(guī)項目分析的質量要求，符合率均為100%(≥80%)。

2.6 攜帶污染率驗證

樣本濃度攜帶污染率驗證：先取1份高濃度FIB樣本，用ACL-TOP700CTS全自動凝血分析儀連續(xù)測定3次，H1，H2和H3測定值分別為4.18 g/L，4.18 g/L和4.12 g/L；再取低濃度FIB樣本，連續(xù)測定3次，L1，L2和L3測定值分別為1.52g/L，1.57 g/L和1.56 g/L，按公式CR1=∣(L1-L3)∣/(H3-L3)×100%，計算出攜帶污染率為1.56%。項目攜帶污染率驗證：首先取1份正常血漿標本，連續(xù)測定PT 3次，j1，j2和j3測定值分別為14.60 s，14.80 s和14.70 s，隨后立即連續(xù)測定FIB 3次，A1，A2，A3測定值分別為3.48 g/L，3.48 g/L和3.48 g/L，最后再測定PT 1次，j4測定值為14.40 s。根據(jù)公式CR2=[(j1+j2+j3)/3-j4]/(j1+j2+j3)/3×100%，計算攜帶污染率為2.04%。樣本濃度和項目攜帶污染率均符合判斷標準要求。

2.7 參考區(qū)間驗證

選取我院20 例健康體檢者的血漿標本，分別在ACL-TOP700CTS全自動凝血分析儀上測定PT，APTT和FIB，各項目測定值均落在對應參考區(qū)間內(nèi)，說明驗證結果符合要求。

3 討 論

實驗室須通過適當?shù)姆椒▽W驗證以確保各項參數(shù)符合臨床使用要求，這是國家衛(wèi)生健康委員會頒布的《三級綜合醫(yī)院評審標準實施細則(2018年版)》中的明確要求。精密度是醫(yī)學實驗室儀器性能評價的一個重要指標，是指在規(guī)定的條件下，獨立檢測結果間的一致程度[4]，是其他性能指標的基礎[5]。通過批內(nèi)精密度和日間精密度的測定來表明所測儀器的檢測系統(tǒng)整體性能是否達到要求。本研究PT，APTT，F(xiàn)IB三個參數(shù)試驗結果顯示，批內(nèi)精密度為0.70%～1.92%，日間精密度為1.50%～6.70%，遠小于CLSI EP15-A2判斷標準，表明ACL-TOP700CTS全自動凝血分析儀精密度良好。FIB的5個水平實測均值與理論值之間線性關系良好，線性范圍為0.73～5.74 g/L，覆蓋了廠家聲明的線性范圍(0.80～5.0 g/L)，a值為0.984 9，r為0.996 6，表明該儀器檢測參數(shù)FIB線性良好。ACL-TOP700CTS全自動凝血分析儀正確度評價是以ACL-TOP700全自動凝血分析儀為對照儀器，分別在ACL-TOP700CTS全自動凝血分析儀上測定并計算PT，APTT，F(xiàn)IB三項的偏倚，偏倚為-1.44%～2.93%，均滿足臨床血液學檢驗常規(guī)項目分析的質量要求。ACL-TOP700CTS全自動凝血分析儀的可比性驗證和參考區(qū)間驗證均符合判斷標準要求。攜帶污染率是一個具體量化的指標[6]，其值越小，說明儀器檢測樣本過程中的交叉污染越小。臨床檢驗工作中需要對多個樣本進行連續(xù)檢測，無法完全避免樣本間的交叉污染，為了有效監(jiān)測交叉污染造成的攜帶污染，對攜帶污染率的監(jiān)測尤為重要。ACL-TOP700CTS全自動凝血分析儀樣本濃度污染率和項目攜帶污染率驗證結果分別為1.56%和2.04%，說明該儀器PT，APTT和FIB攜帶污染率極低，在測定各項目高值血漿標本時，對低值血漿標本無明顯攜帶污染。

綜合上述各項驗證試驗，結果表明ACL-TOP700CTS全自動凝血分析儀檢測PT，APTT和FIB的精密度、正確度、線性及攜帶污染率、參考區(qū)間驗證、檢測系統(tǒng)間比對等性能指標均達到檢測目標，符合ISO 15189的質量要求，該機性能穩(wěn)定、良好，能滿足臨床需要。