孟慶輝，梁倩蓉，姚高華，黃元飛，陳小明，吳洪喜

（浙江省水產(chǎn)技術(shù)推廣總站，浙江 杭州 310023）

美洲鰣（Alosa sapidissima），又稱美國(guó)鰣魚(yú)，隸屬于鯡形總目（Clupeomorpha），鯡形目（Clupeiformes），鯡科（Clupeidae），西鯡屬（Alosa），主要分布于北美洲大西洋沿岸的河流和海洋[1]。美國(guó)鰣魚(yú)與我國(guó)的長(zhǎng)江鰣魚(yú)同屬一個(gè)亞科，外形相似，且同屬?gòu)V溫溯河性洄游魚(yú)類，由于其肉質(zhì)細(xì)嫩鮮美、營(yíng)養(yǎng)價(jià)值高、養(yǎng)殖效益好，自2003 年引入中國(guó)后，養(yǎng)殖區(qū)域逐步拓展，深受養(yǎng)殖戶和消費(fèi)者的喜愛(ài)。

溫室水泥池循環(huán)水養(yǎng)殖美國(guó)鰣魚(yú)具有自動(dòng)化程度高、養(yǎng)殖產(chǎn)量高、風(fēng)險(xiǎn)環(huán)境更加可控、生長(zhǎng)快、環(huán)境友好等優(yōu)勢(shì)，特別適合鰣魚(yú)等名貴魚(yú)類的高密度生態(tài)養(yǎng)殖。但同時(shí)也存在投資大、管理技術(shù)要求高等缺陷。隨著養(yǎng)殖區(qū)域的不斷擴(kuò)大及養(yǎng)殖密度的不斷提高，美國(guó)鰣魚(yú)病害也逐漸增多。現(xiàn)結(jié)合連續(xù)3 年的美國(guó)鰣魚(yú)養(yǎng)殖研究與經(jīng)驗(yàn)，通過(guò)對(duì)一例室內(nèi)循環(huán)水養(yǎng)殖的美國(guó)鰣魚(yú)細(xì)菌病進(jìn)行病原菌鑒定和藥敏試驗(yàn)，并結(jié)合實(shí)踐防控經(jīng)驗(yàn)實(shí)施科學(xué)精準(zhǔn)用藥，以期為養(yǎng)殖戶規(guī)避養(yǎng)殖風(fēng)險(xiǎn)，提高成活率與養(yǎng)殖效益，促進(jìn)美國(guó)鰣魚(yú)產(chǎn)業(yè)發(fā)展提供依據(jù)。

1 研究方法

1.1 養(yǎng)殖環(huán)境

美國(guó)鰣魚(yú)采用水泥池溫室大棚循環(huán)水養(yǎng)殖，水溫常年控制為 18～27 ℃，養(yǎng)殖密度13 kg/m3，采用2.2 kW 羅茨鼓風(fēng)機(jī)加液氧補(bǔ)充增氧，采用3 臺(tái)5.5 kW空氣能溫控系統(tǒng)，養(yǎng)殖尾水經(jīng)微濾機(jī)過(guò)濾、沉淀曝氣、紫外線消毒、微生物凈化后循環(huán)使用。

1.2 試驗(yàn)材料

1.2.1 主要試劑與耗材 法國(guó)梅里埃VITEK 2 compact 全自動(dòng)細(xì)菌鑒定儀（含鑒定試劑卡），腦心浸液培養(yǎng)基（BHI）、瓊脂粉購(gòu)于北京陸橋技術(shù)有限責(zé)任公司，DNA 提取試劑盒、PCR 試劑、引物購(gòu)于上海生工生物技術(shù)有限公司，藥敏紙片購(gòu)于杭州天和微生物試劑有限公司。

1.2.2 試驗(yàn)動(dòng)物 美國(guó)鰣魚(yú)采集于浙江省水產(chǎn)技術(shù)推廣總站蕭山基地。采集病魚(yú)8 尾，氧氣包包裝后運(yùn)送實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行分離培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)。病魚(yú)規(guī)格：800～1 100 g。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 細(xì)菌分離與鑒定 常規(guī)無(wú)菌操作，取肝臟、脾、腎臟以及其他相關(guān)病灶組織，在牛腦心浸出液固體平板上劃線接種，28 ℃培養(yǎng)過(guò)夜。挑取優(yōu)勢(shì)菌分離純化后，采用VITEK 2 Compact 全自動(dòng)細(xì)菌檢定儀進(jìn)行鑒定，并保存在含20%甘油-牛腦心浸出液中，置于-80 ℃冰箱。

1.3.2 藥敏試驗(yàn) 將純化后的菌落用無(wú)菌生理鹽水調(diào)菌濃度至 1×107～1×108CFU/mL，按藥敏板說(shuō)明稀釋后加入96 孔藥敏板，在28 ℃的環(huán)境下培養(yǎng)24～28 h[2]。根據(jù)培養(yǎng)后96 孔藥敏板的濁度讀板，確定恩諾沙星、硫酸新霉素、甲砜霉素、氟苯尼考、鹽酸多西環(huán)素、氟甲喹、磺胺間甲氧嘧啶鈉、磺胺甲噁唑/甲氧芐啶等8 種藥物對(duì)菌株的最低抑菌濃度（MIC 值）。

2 結(jié)果

2.1 外觀癥狀及剖檢變化

生病鰣魚(yú)的癥狀及病理變化見(jiàn)圖 1（a）（b）（c）。生病的鰣魚(yú)攝食減少，冬季發(fā)病時(shí)頭部發(fā)紅充血，鰭條充血，鰓蓋和鰭條處同時(shí)感染水霉，肝臟糜爛，腸道出血嚴(yán)重且易斷，腸道內(nèi)黏膜壞死，腸壁薄，腸胃無(wú)實(shí)物；夏季發(fā)病時(shí)頭部出血，眼眶充血嚴(yán)重，肝臟腫大，腸道出血，發(fā)病初期病灶呈打印狀，尾柄和背鰭處潰爛嚴(yán)重，鱗片下肌肉嚴(yán)重充血或壞死。

圖1 生病鰣魚(yú)癥狀及病理變化

2.2 細(xì)菌分離及菌落形態(tài)觀察

從病魚(yú)肝臟、脾臟、腸道、體表病灶等部位分離得到一種外觀特征比較一致的優(yōu)勢(shì)菌落，呈圓形、邊緣光滑，中央突起，顏色以肉色、灰白色為主。菌株革蘭氏染色為陰性，鏡檢形態(tài)為短桿菌，極端單鞭毛，沒(méi)有芽孢和莢膜。

2.3 生化鑒定

基于VITEK 2 的64 個(gè)生化反應(yīng)的分析提示，分離株呈L-阿拉伯醇、β-半乳糖苷酶、α-葡萄糖、蔗糖、D-甘露醇陰性，葡萄糖發(fā)酵、H2S、D-麥芽糖、D-葡萄糖、賴氨酸脫羧酶陽(yáng)性，鑒定結(jié)果為嗜水氣單胞菌（Aeromonas hydrophila），主要為溫和氣單胞菌、嗜水氣單胞菌、豚鼠氣單胞菌，其具體生理、生化特性見(jiàn)表1。

表1 分離菌株的生理性狀①

續(xù)表

2.4 藥敏試驗(yàn)

取分離株開(kāi)展藥敏試驗(yàn)，對(duì)恩諾沙星、硫酸新霉素、甲砜霉素、氟苯尼考、鹽酸多四環(huán)素、氟甲喹、磺胺間甲氧嘧啶鈉、磺胺甲噁唑/甲氧芐啶等進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，結(jié)果顯示分離菌主要為氣單胞菌屬（溫和氣單胞菌、嗜水氣單胞菌、豚鼠氣單胞菌）。藥敏試驗(yàn)表明，主要對(duì)恩諾沙星、鹽酸多四環(huán)素、甲砜霉素、氟苯尼考等4 種抗生素較為敏感，對(duì)硫酸新霉素、氟甲喹敏感性一般，對(duì)磺胺間甲氧嘧啶鈉、磺胺甲噁唑/甲氧芐啶不敏感，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 MIC 藥敏試驗(yàn)結(jié)果① 103 μg/L

3 討論

美國(guó)鰣魚(yú)屬于溯河洄游性魚(yú)類，終生處于集群快速游動(dòng)狀態(tài)[3]。美國(guó)鰣魚(yú)是具有強(qiáng)烈集群攝食行為的物種，在飼料投喂時(shí)會(huì)相互沖撞，導(dǎo)致鱗片脫落[4]，且美國(guó)鰣魚(yú)是“惜鱗魚(yú)”，鱗片脫落會(huì)引起表皮潰爛，極易誘發(fā)氣單胞菌感染等疾病。

氣單胞菌廣泛分布于自然界，在水源、土壤和人類糞便中均能分離出來(lái)，是引起魚(yú)類運(yùn)動(dòng)性氣單胞菌敗血癥的主要病原體[5]。水體中魚(yú)類感染氣單胞菌會(huì)引起出血、內(nèi)臟腫脹、腹水等癥狀，嚴(yán)重時(shí)可引起魚(yú)類大量死亡，是淡水養(yǎng)殖業(yè)的主要病原菌之一[6]。

通過(guò)對(duì)本基地工廠化養(yǎng)殖美國(guó)鰣魚(yú)病魚(yú)的鑒定分析，發(fā)現(xiàn)導(dǎo)致鰣魚(yú)病害發(fā)生的主要原因是嗜水氣單胞菌，包括溫和氣單胞菌、嗜水氣單胞菌、豚鼠氣單胞菌等。嗜水氣單胞菌病害是美國(guó)鰣魚(yú)病害發(fā)生頻率非常高的疾病種類之一。宮子慧等[7]、王淑嫻等[8]、閻華等[6]、楊移斌等[9]都分離鑒定出鰣魚(yú)體內(nèi)不同氣單胞菌，而關(guān)于其他養(yǎng)殖疾病的報(bào)道比較少見(jiàn)。氣單胞菌對(duì)美國(guó)鰣魚(yú)養(yǎng)殖的危害較大，發(fā)病頻率也比較高。

藥敏試驗(yàn)對(duì)水產(chǎn)養(yǎng)殖過(guò)程中細(xì)菌性疾病的防治和抗生素的規(guī)范科學(xué)使用至關(guān)重要。本研究檢測(cè)了8 種常見(jiàn)漁用抗生素對(duì)鰣魚(yú)分離菌株的最低抑菌濃度，分析了病原菌對(duì)不同抗生素的敏感性。結(jié)果表明，菌株高度敏感的藥物有恩諾沙星、鹽酸多四環(huán)素、甲砜霉素、氟苯尼考等4 種，這四種藥物可作為此例鰣魚(yú)細(xì)菌病的用藥首選，同時(shí)根據(jù)MIC 值可計(jì)算推導(dǎo)安全有效的抗生素使用量。本研究可為工廠化養(yǎng)殖美國(guó)鰣魚(yú)過(guò)程中嗜水氣單胞菌疾病防治提供參考。

4 防控建議

4.1 養(yǎng)殖環(huán)境控制

4.1.1 氧氣 由于美國(guó)鰣魚(yú)終生都處于集群快速遷移、躲避敵害追逐的狀態(tài)，正常情況下也呈現(xiàn)出日夜不停游動(dòng)的狀態(tài)，缺氧就成了美國(guó)鰣魚(yú)的第一“殺手”[4]。工廠化養(yǎng)殖過(guò)程中，除正常配備羅茨鼓風(fēng)機(jī)增氧設(shè)施外，還需要額外配備液氧，以防止缺氧。

4.1.2 溫度 鰣魚(yú)對(duì)于溫度要求高，水溫過(guò)高或過(guò)低都會(huì)造成鰣魚(yú)停止攝食、水霉病高發(fā)等。工廠化養(yǎng)殖需配備空氣能溫控系統(tǒng)，既能促進(jìn)鰣魚(yú)適溫快速生長(zhǎng)，減少養(yǎng)殖時(shí)間過(guò)長(zhǎng)帶來(lái)的風(fēng)險(xiǎn)，又能減少疾病的發(fā)生。

4.1.3 飼養(yǎng) 投喂方法不當(dāng)容易造成鰣魚(yú)體表受傷，對(duì)于攝食期間鰣魚(yú)快速游動(dòng)沖撞引發(fā)的鱗片脫落與表皮潰爛等問(wèn)題，飼料拋灑面積要足夠大，減少魚(yú)體沖突。

4.1.4 水質(zhì) 保持優(yōu)良水質(zhì)是美國(guó)鰣魚(yú)養(yǎng)殖成功的關(guān)鍵。工廠化養(yǎng)殖過(guò)程中，雖增加了微濾機(jī)過(guò)濾、沉淀曝氣、紫外線消毒、微生物凈化等步驟，仍然需要根據(jù)水質(zhì)情況每1～2 d 吸污一次，保持水質(zhì)清新。

4.2 預(yù)防

堅(jiān)持“早預(yù)防、重治更重防”。鰣魚(yú)苗種入池前，先用漂白粉對(duì)工廠化水泥池進(jìn)行徹底消毒；魚(yú)苗入池時(shí)，使用2%的食鹽水對(duì)魚(yú)體浸洗5～10 min。在對(duì)一定規(guī)格鰣魚(yú)進(jìn)行分池飼養(yǎng)、拉網(wǎng)訓(xùn)練的過(guò)程中，也需要進(jìn)行食鹽水浸洗消毒。

日常養(yǎng)殖管理過(guò)程中，要做到早晚巡池，及時(shí)了解鰣魚(yú)游動(dòng)狀態(tài)和體表?yè)p傷情況。定時(shí)監(jiān)測(cè)溶解氧、氨氮、亞硝酸鹽、溫度等指標(biāo)，當(dāng)溶解氧低于5 mg/L 時(shí)，及時(shí)啟動(dòng)液氧增氧設(shè)施；溫度超過(guò)30 ℃，及時(shí)啟動(dòng)空氣能控溫系統(tǒng)降溫并增氧；根據(jù)水色和氨氮指標(biāo)等，及時(shí)清污，保持水質(zhì)清新。遇到溶解氧降低到4 mg/L 以下、氨氮含量升高到3 mg/L以上等情況，除開(kāi)啟液氧增氧設(shè)施外，還需及時(shí)換水，通過(guò)一邊放、一邊加，盡早發(fā)現(xiàn)、大量換水等方式，及時(shí)采取措施保持水質(zhì)良好。

如遇到鰣魚(yú)腮部受損、行為急躁等情況，須立即鏡檢，若鏡檢發(fā)現(xiàn)有寄生蟲(chóng)，可通過(guò)換水、定期使用阿維菌素等殺蟲(chóng)藥治防，同時(shí)減少投喂量，在用藥后采用聚維酮碘殺菌消毒等方式降低感染率。

成魚(yú)養(yǎng)殖過(guò)程中，每半個(gè)月使用二氧化氯或復(fù)合碘制劑等進(jìn)行全池潑灑。高溫季節(jié)可使用三黃粉等拌飼，定期潑灑維生素C，提高機(jī)體抵抗力。

4.3 治療措施

針對(duì)嗜水氣單胞菌引起的感染，可使用恩諾沙星或氟苯尼考進(jìn)行治療，每100 kg 飼料拌飼5 g內(nèi)服，一般7 d 一個(gè)療程，配合使用碘制劑和維生素C 進(jìn)行全池潑灑。及時(shí)使用10 mg/L 漂白粉對(duì)養(yǎng)殖工具進(jìn)行消毒，并暴曬殺菌。