廖 德 權(quán)

(廣東醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院 湛江 524000)

PCT屬于抗炎物質(zhì)，一般情況下其半衰期為25～30h，收集標(biāo)本1d后放置于常溫狀態(tài)下其指標(biāo)水平會(huì)下降大約12%，在體外具備一定的穩(wěn)定性，蛋白酶對降鈣素原有特異性降解效果，機(jī)體受到細(xì)菌感染后促使該指標(biāo)分泌[1～3]。諸如新生兒肺炎、急性胰腺炎等感染性疾病中，細(xì)菌內(nèi)存在的毒素刺激機(jī)體降鈣素原分泌速度，在短時(shí)間內(nèi)急速提升，根據(jù)該變化來作為對病情早期診斷以及臨床使用藥物選擇有指導(dǎo)價(jià)值，在預(yù)后評估是如PCT指標(biāo)長時(shí)間保持在高水平狀態(tài)，則提示控制效果較差[4]。量子點(diǎn)(Quantumdots，QDs)屬于新型半導(dǎo)體納米材料，近年來，量子點(diǎn)因其具有受激發(fā)光照射發(fā)出熒光的特性而備受人們關(guān)注，目前正被大量用于分子標(biāo)記技術(shù)和醫(yī)學(xué)影像成像技術(shù)，同時(shí)也被視為新的理想的免疫標(biāo)志物[5～6 ]。為探究基于量子點(diǎn)標(biāo)記的降鈣素原快速、高靈敏熒光免疫層析檢測方法的建立及應(yīng)用方法，本次研究收集我院2019年8月臨床檢測降鈣素原標(biāo)本20例，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 資料

收集廣東醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院2019年8月臨床檢測降鈣素原標(biāo)本20例 ，使用《WS/T 420-2012》行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，用量子點(diǎn)免疫熒光層析法和羅氏 Roche電化學(xué)發(fā)光法進(jìn)行降鈣素原檢測，分析其診斷符合率、Kappa 一致性、ROC曲線和定量線性回歸分析[7]。

1.2 方法

1.2.1精密度驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)

實(shí)驗(yàn)?zāi)康模候?yàn)證檢測系統(tǒng)的重復(fù)性不精密度(Sr)、室內(nèi)不精密度(S1)。實(shí)驗(yàn)方法：使用《WS/T 420-2012》行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，選擇室內(nèi)質(zhì)控品(高值、低值)各1份，每個(gè)水平重復(fù)測定3次，連續(xù)5天。離群值檢驗(yàn)：單次測量值超過總均值±4SD；數(shù)據(jù)剔除量：小于總測量數(shù)據(jù)量的5%；評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)：重復(fù)性不精密度≤1/4TEa；室內(nèi)不精密度≤1/3TEa或小于驗(yàn)證值?；虬凑罩腥A人民共和國衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)WS/T 403-2012≤臨床生物化學(xué)檢驗(yàn)常規(guī)項(xiàng)目分析質(zhì)量指標(biāo)》對精密度的要求進(jìn)行。

1.2.2驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)室內(nèi)檢測系統(tǒng)的檢驗(yàn)結(jié)果一致性

實(shí)驗(yàn)方法：使用《WS/T 420-2012》行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，選取參加室間質(zhì)評的系統(tǒng)作為比對方法，用實(shí)驗(yàn)方法、比對方法分別檢測最少20份血清標(biāo)本，標(biāo)本濃度在線性范圍內(nèi)均勻分布，每個(gè)標(biāo)本測定1次，1天4h內(nèi)完成。評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)：偏倚圖中不同濃度處偏倚分布均勻；若不均勻則分段處理Bias按照中國衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心室間質(zhì)評要求小于1/2TEa，或按照中華人民共和國衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)WS/T 403-2012《臨床生物化學(xué)檢驗(yàn)常規(guī)項(xiàng)目分析質(zhì)量指標(biāo)》對正確度的要求進(jìn)行[8～9]。實(shí)驗(yàn)方法：深圳金準(zhǔn)量子點(diǎn)免疫熒光層析法；比對方法：羅氏 Roche 電化學(xué)發(fā)光法；實(shí)驗(yàn)儀器：深圳金準(zhǔn)；比對儀器：cobas e601。

1.2.3所有樣本均無反復(fù)凍融

每一例標(biāo)本均用量子點(diǎn)免疫熒光層析法和電化學(xué)發(fā)光法進(jìn)行降鈣素原檢測，并將所有樣本的量子點(diǎn)免疫熒光層析法降鈣素原檢測結(jié)果作為試驗(yàn)組，相應(yīng)的將電化學(xué)發(fā)光法檢測所有標(biāo)本的降鈣素原濃度結(jié)果作為對照組[10～11]。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

應(yīng)用Excel對本次研究的數(shù)據(jù)進(jìn)行收集，P<0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 精密度驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)結(jié)果

水平1實(shí)驗(yàn)不精密度大于允許不精密度，檢測系統(tǒng)精密度不可接受，水平2實(shí)驗(yàn)不精密度小于允許不精密度，檢測系統(tǒng)精密度可以接受，水平1、水平2實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)見表1～4。

表1 精密度驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果(水平1)

批間方差=0.001

室內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)差=0.040

總均值=0.316

表2 實(shí)驗(yàn)室允許不精密度、實(shí)驗(yàn)不精密度結(jié)果對照表(水平1)

表3 精密度驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果(水平2)

表4 實(shí)驗(yàn)室允許不精密度、實(shí)驗(yàn)不精密度結(jié)果對照表(水平2)

2.2 驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)室內(nèi)檢測系統(tǒng)的檢驗(yàn)結(jié)果一致性

實(shí)驗(yàn)室內(nèi)檢測系統(tǒng)的檢驗(yàn)結(jié)果一致性結(jié)果表明，檢測系統(tǒng)可比性驗(yàn)證通過,回歸方程為:y=1.0472x+0.2444，R2=0.999。

表5 驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)室內(nèi)檢測系統(tǒng)的檢驗(yàn)結(jié)果一致性

兩方法間絕對偏倚=-0.11

兩方法間相對偏倚=-4.03%

絕對偏倚標(biāo)準(zhǔn)差=0.394

相對偏倚標(biāo)準(zhǔn)差=13.99%

圖1 偏移圖(絕對偏倚)

圖2 偏移圖(相對偏倚)

圖3 線性回歸圖

2.3 不同 cut-off 值下量子點(diǎn)免疫熒光層析法診斷效能評價(jià)

以羅氏公司電化學(xué)發(fā)光法作為標(biāo)準(zhǔn)，對分析量子點(diǎn)免疫熒光層析法的診斷效能進(jìn)行比較，當(dāng)PCT濃度為0.5ng/ml時(shí)，2種方法間診斷符合率達(dá)97.87%；當(dāng)PCT濃度為2.0ng/ml時(shí)，2種方法間診斷符合率達(dá)98.44%。

3 討論

PCT水平增高通常發(fā)生在感染后2h，其表達(dá)水平高低能反映全身炎癥反應(yīng)及感染的活躍程度[12 ]。PCT是血清降鈣素(CT)前肽物質(zhì)，由116個(gè)氨基酸組成糖蛋白質(zhì)，正常生理下，由甲狀腺C細(xì)胞分泌產(chǎn)生。健康人群血清PCT水平很低，低于0.05ng/ml，在創(chuàng)傷、炎性反應(yīng)刺激尤其是細(xì)菌感染或膿毒癥狀態(tài)下，機(jī)體各組織、多種細(xì)胞類型均可產(chǎn)生PCT并釋放進(jìn)入血液循環(huán)系統(tǒng)。驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)室內(nèi)檢測系統(tǒng)的檢驗(yàn)結(jié)果一致性結(jié)果表明，檢測系統(tǒng)可比性驗(yàn)證通過,回歸方程為:y=1.0626x+0.0044，R2=0.9913。當(dāng)PCT濃度為0.5ng/ml時(shí)，兩種方法間診斷符合率達(dá)97.87%；當(dāng)PCT濃度為2.0ng/ml時(shí)，量子點(diǎn)免疫熒光層析法與電化學(xué)發(fā)光法兩種方法間診斷符合率達(dá)98.44%。Cut-off值為0.5ng/ml和2.0ng/ml時(shí)，兩者ROC曲線下面積分別為0.964和0.985，均表明兩種檢測方法無顯著差異(P>0.05)。綜上所述，在檢測系統(tǒng)上的精密度驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)基本符合實(shí)驗(yàn)室要求，檢測系統(tǒng)檢驗(yàn)結(jié)果可比性符合要求。量子點(diǎn)免疫熒光層析法和電化學(xué)發(fā)光法之間具有診斷一致性和相關(guān)性。