邱嘉菡 袁 爍 張家旗 鄺梓君

1.廣州中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院婦科，廣東廣州 510405；2.廣州中醫(yī)藥大學(xué)第一臨床醫(yī)學(xué)院，廣東廣州 510405

異位妊娠是育齡期婦女的噩夢(mèng)，近年來，隨著盆腔炎性疾病、人工流產(chǎn)、輔助生育技術(shù)等高危因素的增加，其發(fā)病率逐年增長(zhǎng)。在異位妊娠中，輸卵管妊娠占比最多，約占95%，典型的臨床表現(xiàn)為停經(jīng)、下腹疼痛及陰道流血。

隨著醫(yī)學(xué)的進(jìn)步和婦女健康意識(shí)的加強(qiáng)，使輸卵管妊娠在早期得到診斷已成為可能。目前西醫(yī)對(duì)輸卵管妊娠的治療有手術(shù)、藥物和期待治療3 種方式。其中甲氨蝶呤是藥物治療最常用藥物。甲氨蝶呤是一種抗葉酸類腫瘤藥，臨床上常見的不良反應(yīng)有骨髓抑制、胃腸道反應(yīng)、黏膜損傷，以及肝臟毒性、腎臟毒性、心臟毒性、感染等[1]，其中有報(bào)道指出肝功能損傷發(fā)生了高達(dá)51.6%[2]，面對(duì)西醫(yī)藥物治療嚴(yán)重的毒副作用，筆者所工作的廣州中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院，經(jīng)過十余年的臨床研究，形成了“輸卵管妊娠的中西醫(yī)結(jié)合診療方案”，有報(bào)道指出中藥治療異位妊娠的成功率達(dá)97.6%[3]，為中醫(yī)藥治療輸卵管妊娠開辟了新天地。

中醫(yī)理論認(rèn)為輸卵管妊娠的“本”是少腹血瘀證[4]。早在20 世紀(jì)60 年代山西醫(yī)學(xué)院率先開啟了中西醫(yī)結(jié)合非手術(shù)治療宮外孕，研制了宮外孕Ⅰ號(hào)方，宮外孕Ⅱ號(hào)方。其中宮外孕Ⅰ號(hào)方由桃仁、丹參、赤芍3 味藥物組成，其中以丹參為君藥，白芍、桃仁為臣藥，共奏化瘀消癥、活血?dú)⑴咧Γ痉剿幬峨m然極其精簡(jiǎn)，但臨床效果明確[5]。臨床藥理研究證實(shí)，宮外孕Ⅰ號(hào)方能促進(jìn)腹腔凝血塊的吸收，對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的凝血時(shí)間[6]及淋巴回流均有一定影響。上述資料的來源均為20 世紀(jì)70 至80 年代的文獻(xiàn)，研究焦點(diǎn)也多集中在血液流變學(xué)上。經(jīng)過數(shù)十年的時(shí)間，現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的進(jìn)步不止體現(xiàn)在臨床，同時(shí)也體現(xiàn)在細(xì)胞、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)等科研相關(guān)的生物技術(shù)水平上。筆者所在的醫(yī)院在臨床上將宮外孕Ⅰ號(hào)方化裁的湯劑，應(yīng)用于治療早期異位妊娠有著“效廉驗(yàn)便”的優(yōu)勢(shì)[7]，同時(shí)能避免西藥的某些副作用和手術(shù)的痛苦；而且對(duì)患者生育能力的保護(hù)又是治療方案的另一優(yōu)勢(shì)。臨床上也有不少對(duì)該化裁湯劑進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室研究[8-11]，但對(duì)其基礎(chǔ)湯劑——宮外孕Ⅰ號(hào)方的研究在近年來卻鮮少報(bào)道，本研究利用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法探討宮外孕Ⅰ號(hào)方通過何種成分，利用機(jī)體的哪些靶點(diǎn)，最終達(dá)到治療異位妊娠的目的。

1 資料與方法

1.1 中藥活性成分的篩選和靶點(diǎn)

將宮外孕Ⅰ號(hào)方各中藥的中文名稱“丹參”“桃仁”“赤芍”作為關(guān)鍵詞輸入中藥系統(tǒng)藥理學(xué)數(shù)據(jù)庫(kù)和分析平臺(tái)[12]（traditional Chinese medicine systems pharmacology database and analysis platform，TCMSP），在中國(guó)知網(wǎng)、維普、萬方網(wǎng)站搜索近5 年（2015 年1 月至2020 年1 月）發(fā)表的文獻(xiàn)報(bào)道查找未在TCMSP 中檢索到的中藥成分進(jìn)行整理補(bǔ)充。獲取所有中藥成分以后，錄入TCMSP 以匹配信息，將“口服生物利用度（oral bioavailability，OB）≥30%、類藥性（drug-likeness，DL）≥0.18[13]”作為篩選條件。將上述活性成分輸入U(xiǎn)niprot 網(wǎng)站進(jìn)行規(guī)范并轉(zhuǎn)換成藥物有效成分的作用靶點(diǎn)，匯總?cè)コ貜?fù)值，得出有效基因靶點(diǎn)。

1.2 構(gòu)建宮外孕Ⅰ號(hào)方的“活性成分-靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)

宮外孕Ⅰ號(hào)方“活性成分-靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)主要通過軟件Cytoscape 3.8.0 來構(gòu)建與分析，其中藥物成分或靶點(diǎn)用“節(jié)點(diǎn)”（node）表示，成分及靶點(diǎn)之間關(guān)系用“邊”（edge）表示。

1.3 異位妊娠相關(guān)靶點(diǎn)檢索

將“異位妊娠”輸入中國(guó)知網(wǎng)翻譯，得出“ectopic pregnancy”的譯名，以“ectopic pregnancy”作為關(guān)鍵詞，在Genecards[14]、Disgenet[15]兩個(gè)疾病基因數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行檢索與篩選，將得到的靶點(diǎn)匯總并去除重復(fù)值，在中國(guó)知網(wǎng)、維普、萬方網(wǎng)站搜索近5 年（2015 年1 月至2020 年1 月）發(fā)表的文獻(xiàn)報(bào)道查找未預(yù)測(cè)到的已知治療靶點(diǎn)，并將所得靶點(diǎn)錄入U(xiǎn)niprot數(shù)據(jù)庫(kù)對(duì)其名稱進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化命名。

1.4 宮外孕Ⅰ號(hào)方治療異位妊娠的靶點(diǎn)獲取及構(gòu)建靶蛋白蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用（proteinprotein interaction，PPI）網(wǎng)絡(luò)

1.4.1 宮外孕Ⅰ號(hào)方治療異位妊娠的靶點(diǎn)獲取 將“1.1”中取得的藥物有效成分的作用靶點(diǎn)及“1.3”中取得的疾病治療靶點(diǎn)匯總?cè)〗患?，?jīng)過篩選查重，最終得到宮外孕Ⅰ號(hào)方治療異位妊娠的靶點(diǎn)。

1.4.2 建構(gòu)宮外孕I 號(hào)方治療異位妊娠靶蛋白PPI網(wǎng)絡(luò) 將最終篩選出來的宮外孕Ⅰ號(hào)方治療異位妊娠的靶點(diǎn)導(dǎo)入Cytoscape 3.8.0 軟件中的bisogenet 插件獲取靶蛋白的相互作用關(guān)系。使用BisoGenet 數(shù)據(jù)庫(kù)對(duì)篩選出的基因靶點(diǎn)構(gòu)建相互作用關(guān)系網(wǎng)絡(luò)，可得到宮外孕Ⅰ號(hào)方治療異位妊娠的PPI 網(wǎng)絡(luò)圖，將所得圖導(dǎo)入Cytoscape 3.8.0 軟件，繪制出PPI 網(wǎng)絡(luò)圖。

1.5 分子對(duì)接評(píng)估結(jié)合潛力

選擇蛋白和化合物網(wǎng)絡(luò)度值各前3 名的蛋白和活性成分進(jìn)行分子對(duì)接。從RSCB PDB 數(shù)據(jù)庫(kù)中選取相應(yīng)靶蛋白并下載其3D 結(jié)構(gòu)，在TCMSP 中獲取活性成分的分子結(jié)構(gòu)。利用Autodock Tolls 軟件對(duì)蛋白進(jìn)行去水、加全氫及設(shè)置受體，對(duì)核心活性成分則進(jìn)行加全氫、自動(dòng)分布電荷、設(shè)置為配體，進(jìn)行分子對(duì)接。分子對(duì)接過程中，受體與配體的親和力越好，其結(jié)合能越低，一般認(rèn)為，結(jié)合能≤-1.2 kcal/mol，則對(duì)接結(jié)果良好，最后用Pymol 軟件對(duì)其進(jìn)行可視化處理。

1.6 關(guān)鍵靶點(diǎn)富集分析

將最終得到的核心靶點(diǎn)導(dǎo)入DAVID[16]數(shù)據(jù)庫(kù)，進(jìn)行兩種富集分析：①GO 分類富集分析，包括：生物過程（biological process，BP）、分子功能（molecular function，MF）和細(xì)胞組分（cell component，CC）。由于富集靶標(biāo)越多，與治療異位妊娠相關(guān)性越高，所呈現(xiàn)的P 值便會(huì)越小，本課題組在分析富集結(jié)果時(shí)，選取P ＜0.01的富集數(shù)據(jù)，由小到大進(jìn)行排序，將符合上述標(biāo)準(zhǔn)GO富集分析使用微生信網(wǎng)站（http：//www.bioinformatics.com.cn/）繪制GO 富集的BP、CC、MF 三合一柱狀圖。②KEGG 通路富集分析。得到通路富集結(jié)果后，選取COUNT 數(shù)目排名前20 位的KEGG 通路，使用微生信網(wǎng)站（http：//www.bioinformatics.com.cn/）繪制氣泡圖，并將上述通路數(shù)據(jù)的基因名及通路名稱使用Cytoscape 3.8.0 軟件繪制通路關(guān)系圖。

2 結(jié)果

2.1 宮外孕Ⅰ號(hào)方活性成分篩選

以檢索TCMSP 并根據(jù)OB 和DL 值初步篩選得到宮外孕Ⅰ號(hào)方活性成分共243 個(gè)，丹參137 個(gè)，桃仁52 個(gè)，赤芍54 個(gè)，其中桃仁和赤芍共有成分1 個(gè)，丹參和赤芍共有成分1 個(gè)，丹參和桃仁共有成分1 個(gè)，其中Degree（DC）值排名前3 的成分是β-谷甾醇、芹菜素、二氫異丹參酮Ⅰ。在中國(guó)知網(wǎng)、維普、萬方網(wǎng)站搜索近5 年相關(guān)文獻(xiàn)未查找到未納入的有效成分。將上述活性成分輸入U(xiǎn)niprot 網(wǎng)站得出丹參有2161 個(gè)有效靶點(diǎn)，桃仁有470 個(gè)有效靶點(diǎn)，赤芍有297 個(gè)有效靶點(diǎn)，去除重復(fù)值，得出有效基因靶點(diǎn)共159 個(gè)。方中OB 值排名前5 位的有效成分見表1。

表1 宮外孕Ⅰ號(hào)方部分活性成分

2.2 宮外孕Ⅰ號(hào)方活性成分-有效靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建

宮外孕Ⅰ號(hào)方活性成分-有效靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)具體關(guān)系見圖1。圖中內(nèi)部綠色節(jié)點(diǎn)呈矩形排列者代表有效基因靶點(diǎn)；外圈呈圓形排列者代表藥物有效成分：內(nèi)層紫色六邊形代表桃仁有效成分，中層綠色六邊形代表赤芍有效成分，外層兩圈紅色六邊形代表丹參有效成分；圖片最下方淡黃色六邊形代表共有有效成分：A1 代表桃仁和赤芍共有有效成分，A2 代表丹參和桃仁共有有效成分，A3 代表丹參和赤芍共有有效成分；圖片最上方橙色圓形代表藥物名稱：赤芍、丹參、桃仁。整個(gè)網(wǎng)絡(luò)圖共包含338 個(gè)節(jié)點(diǎn)，3087 條邊。宮外孕Ⅰ號(hào)方中多個(gè)有效成分對(duì)應(yīng)同一靶點(diǎn)，多個(gè)靶點(diǎn)對(duì)應(yīng)同一有效成分。

圖1 宮外孕Ⅰ號(hào)方有效靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)圖（見內(nèi)文第7 頁(yè)）

2.3 異位妊娠相關(guān)靶點(diǎn)檢索

在Genecards 數(shù)據(jù)庫(kù)中查找出5396 個(gè)靶點(diǎn)，由于靶點(diǎn)數(shù)量較多，因此通過SCORE 的中位數(shù)進(jìn)行篩選，第一次中位數(shù)為1.19，第二次中位數(shù)為2.96。經(jīng)過兩次取SCORE 中位數(shù)后共篩選出1360 個(gè)靶點(diǎn)；在Disgenet 數(shù)據(jù)庫(kù)中查找到49 個(gè)靶點(diǎn)；在中國(guó)知網(wǎng)、維普、萬方網(wǎng)站搜索近5 年相關(guān)文獻(xiàn)未查找到未納入的有效治療靶點(diǎn)。最終將所取得的上述所有靶點(diǎn)匯總?cè)コ貜?fù)值，并將所得靶點(diǎn)錄入U(xiǎn)niprot 數(shù)據(jù)庫(kù)對(duì)其名稱進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化命名，最終得到疾病靶點(diǎn)共1362 個(gè)。

2.4 宮外孕Ⅰ號(hào)方治療異位妊娠的靶點(diǎn)與PPI 網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建

2.4.1 宮外孕I 號(hào)方治療異位妊娠的靶點(diǎn) 得到宮外孕Ⅰ號(hào)方治療異位妊娠的靶點(diǎn)：ADRB2、AR、CHEK1、ESR1、ESR2、MAPK14、NOS2、PGR、PTGS1、PTGS2、SCN5A、F2、PPARG、F10、NOS3、CDK2、ACHE、BCL2、JUN、NR3C1、PON1、HTR2A、NR3C2、ADRB1、MAOA、PLAU、CAT、GSTM1、GSTP1、MMP2、VEGFA、IL-6、TNF、CYCS、MPO、TP53、CDK1、ADH1B、BCHE、SRC、CDK4、EGFR、HMOX1、IFNG、IL-2、INSR、MAPK1、MMP1、RB1、XDH、F7、CDK6、INS、NQO1、CTSB、IL-1B、MAPK8、MMP3、SELE、DRD2、CYP1A2、CYP3A4、EDNRA、ITGB3、VCAM1，共65 個(gè)交集靶點(diǎn)。見圖2。

圖2 宮外孕Ⅰ號(hào)方活性成分靶點(diǎn)與異位妊娠靶點(diǎn)的匹配維恩圖

2.4.2 宮外孕Ⅰ號(hào)方治療異位妊娠的PPI 網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建該P(yáng)PI 網(wǎng)絡(luò)圖（圖3）共包含3 個(gè)小圖，左側(cè)圖為通過原始交集靶點(diǎn)作出的網(wǎng)絡(luò)圖，包括4613 個(gè)節(jié)點(diǎn)，167258 條邊，經(jīng)過計(jì)算得出DC、Betweenness Centrality、Closeness Centrality 的中位數(shù)分別為48、6.74E-05、0.44，以此為條件截取出中間圖；中間圖包括931 個(gè)節(jié)點(diǎn)，41 403 條邊，經(jīng)過計(jì)算得出DC、Betweenness Centrality、Closeness Centrality 的中位數(shù)分別為162、0.000565、0.47，以此為條件截取出右側(cè)圖；中間圖包括220 個(gè)節(jié)點(diǎn)，5932 條邊，圖中節(jié)點(diǎn)越大，代表DC 值越大，則代表與治療相關(guān)性越密切。DC 值排名在前5 位的靶蛋白：NTRK1、TP53、EGFR、APP、ESR1。

圖3 宮外孕Ⅰ號(hào)方治療異位妊娠核心靶點(diǎn)的蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用網(wǎng)絡(luò)圖

2.5 分子對(duì)接分析結(jié)果

對(duì)PPI 網(wǎng)絡(luò)中DC 值排名前3 的蛋白和活性成分進(jìn)行分子對(duì)接，結(jié)果見表1[對(duì)接結(jié)果只保留每對(duì)分子對(duì)接的最低結(jié)合能（kcal/mol）]。分子對(duì)接結(jié)果顯示宮外孕Ⅰ號(hào)方核心成分與異位妊娠靶點(diǎn)具有較好結(jié)合活性。選擇最低結(jié)合能的分子對(duì)接繪制對(duì)接模式圖。見圖4。

圖4 分子對(duì)接結(jié)果圖

2.6 宮外孕Ⅰ號(hào)方治療異位妊娠通路富集分析

將PPI 網(wǎng)絡(luò)中的220 個(gè)核心靶點(diǎn)基因?qū)隓AVID 數(shù)據(jù)庫(kù)，進(jìn)行GO 富集分析及KEGG 通路富集分析。

表2 宮外孕Ⅰ號(hào)方異位妊娠靶點(diǎn)與核心成分分子對(duì)接的最低結(jié)合能（kcal/mol）

2.6.1 宮外孕Ⅰ號(hào)方治療異位妊娠的GO 富集分析GO 富集分析結(jié)果顯示，220 個(gè)相關(guān)靶點(diǎn)基因其中有207 個(gè)核心靶點(diǎn)基因參與富集，共得到518 個(gè)富集結(jié)果，其中包括MF 為174 項(xiàng)，主要涉及蛋白結(jié)合、泛素蛋白連接酶結(jié)合、酶結(jié)合等；CC 為126 項(xiàng)，主要涉及細(xì)胞核液、細(xì)胞核、細(xì)胞胞質(zhì)溶膠等；BP 為218 項(xiàng)，主要涉及病毒過程、上調(diào)RNA 聚合酶Ⅱ啟動(dòng)子的轉(zhuǎn)錄、抑制細(xì)胞凋亡等。選擇P 值最小排名前20 位的富集結(jié)果見圖5。

圖5 宮外孕Ⅰ號(hào)方治療異位妊娠的GO 富集分析

2.6.2 宮外孕Ⅰ號(hào)方治療異位妊娠的KEGG 通路富集分析 KEGG 分析結(jié)果：220 個(gè)相關(guān)靶點(diǎn)基因，其中有181 個(gè)核心靶點(diǎn)基因參與111 條信號(hào)通路過程。篩選得到COUNT 數(shù)目排名前20 位的通路見圖6。

圖6 宮外孕Ⅰ號(hào)方治療異位妊娠的KEGG通路富集分析（見內(nèi)文第8頁(yè)）

將基因數(shù)目排名前20 位相關(guān)基因及通路導(dǎo)入Cytoscape 3.8.0 繪制的相關(guān)基因及通路關(guān)系圖，見圖7。進(jìn)行KEGG 富集通路分析后發(fā)現(xiàn)，腫瘤通路、病毒致癌作用信號(hào)通路、乙肝信號(hào)通路、PI3K-AKT 信號(hào)通路、腫瘤中微小RNA 作用信號(hào)通路、細(xì)胞周期信號(hào)通路等信號(hào)通路與宮外孕Ⅰ號(hào)方治療異位妊娠的靶點(diǎn)關(guān)系密切。相關(guān)基因數(shù)最高的兩條通路作圖見圖8～9。

圖7 宮外孕Ⅰ號(hào)方治療異位妊娠的“靶點(diǎn)-通路”網(wǎng)絡(luò)圖

圖8 腫瘤通路的相關(guān)基因

圖9 病毒致癌通路的相關(guān)基因

3 討論

山西醫(yī)學(xué)院研制宮外孕Ⅰ號(hào)方為目前中藥治療異位妊娠的最常用的方劑之一，由丹參、赤芍、桃仁3 味中藥組成，藥味簡(jiǎn)單，組方精妙，在臨床應(yīng)用多年療效顯著。

本研究基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)，探討宮外孕Ⅰ號(hào)方治療異位妊娠的作用機(jī)制，共收集活性成分243 個(gè)，其中丹參的活性成分最多；宮外孕Ⅰ號(hào)方治療異位妊娠的作用靶點(diǎn)共65 個(gè)，提示宮外孕Ⅰ號(hào)方可以利用不同有效成分通過多個(gè)靶點(diǎn)蛋白治療異位妊娠。PPI 網(wǎng)絡(luò)圖提示宮外孕Ⅰ號(hào)方治療異位妊娠的作用機(jī)制錯(cuò)綜復(fù)雜，核心靶點(diǎn)涉及的范圍可以分為細(xì)胞增殖及其周期、泛素化及惡性腫瘤相關(guān)指標(biāo)，GO 和KEGG 富集分析結(jié)果顯示，宮外孕Ⅰ號(hào)方治療異位妊娠涉及不同的生物過程及不同的信號(hào)通路，如腫瘤信號(hào)通路、PI3K-Akt 信號(hào)通路、細(xì)胞周期、MAPK 信號(hào)通路、FoxO 信號(hào)通路等。

異位妊娠指的是受精卵在子宮體腔以外的部位著床發(fā)育。在正常妊娠中，受精卵必須在一個(gè)極短的“窗口期”完成定位、黏附、穿透三部曲才能繼續(xù)發(fā)育。牢固的黏附是著床的先決條件，而在黏附之后，滋養(yǎng)層細(xì)胞便開始迅速增殖，同時(shí)發(fā)生遷移和侵蝕，分化形成合體滋養(yǎng)層和細(xì)胞滋養(yǎng)層，同時(shí)分泌人絨毛膜促性腺激素（HCG）[17]。受精卵在異位的著床點(diǎn)雖然不能最終發(fā)育成熟，但其早期的著床過程與正常妊娠相一致。臨床上疑診或確診異位妊娠的時(shí)候，受精卵已經(jīng)完成黏附，滋養(yǎng)細(xì)胞正處于快速增殖分裂，向周圍組織迅速遷移侵蝕，并同時(shí)分泌HCG。綜觀目前藥物治療異位妊娠，大多從抑制滋養(yǎng)細(xì)胞的增殖，最終調(diào)控其細(xì)胞周期；控制滋養(yǎng)細(xì)胞的遷移及侵蝕[18]等方面著手。

根據(jù)上述機(jī)制，分析本次網(wǎng)絡(luò)藥理PPI 核心蛋白結(jié)果，發(fā)現(xiàn)宮外孕Ⅰ號(hào)方治療異位妊娠DC 值排名前30 的核心蛋白與調(diào)控細(xì)胞增殖凋亡及其周期、調(diào)節(jié)細(xì)胞遷移及侵蝕有密切關(guān)系。如①TP53 為細(xì)胞周期研究領(lǐng)域中的明星分子，目前有研究表明p53 的高表達(dá)可能導(dǎo)致滋養(yǎng)細(xì)胞增殖[19]；細(xì)胞實(shí)驗(yàn)研究表明miR-520 可能通過激活內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激誘導(dǎo)滋養(yǎng)細(xì)胞發(fā)生凋亡[20]。②體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)同樣證實(shí)miR-137 可以影響滋養(yǎng)細(xì)胞的增殖活性及其遷移能力[21]。分析P 值排名前20 位的KEGG 通路可以發(fā)現(xiàn)宮外孕Ⅰ號(hào)方治療異位妊娠的主要通路可以分為以下三大類：①調(diào)節(jié)滋養(yǎng)細(xì)胞的增殖、侵襲及凋亡：目前的實(shí)驗(yàn)室研究表明，通過調(diào)控PI3K-AKT 信號(hào)通路[22-23]、FoxO 信號(hào)通路[24-25]、MAPK 信號(hào)通路[26-30]，下調(diào)滋養(yǎng)細(xì)胞的增殖速度，抑制其遷移及侵襲、促進(jìn)細(xì)胞凋亡?；谏鲜鼋Y(jié)論，本課題組推測(cè)對(duì)于治療異位妊娠同樣可以通過抑制上述通路的功能，達(dá)到控制滋養(yǎng)細(xì)胞的有絲分裂，抑制滋養(yǎng)細(xì)胞增殖，縮短其細(xì)胞周期，最終導(dǎo)致滋養(yǎng)細(xì)胞凋亡，從而治療異位妊娠。②與腫瘤相關(guān)性：在本次網(wǎng)絡(luò)藥理研究中發(fā)現(xiàn)，KEGG 富集的結(jié)果有很多與惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展有關(guān)的信號(hào)通路。受精卵在著床可以分泌早孕因子，以防止免疫排斥。這種免疫行為與惡性腫瘤中的免疫逃逸[31-32]行為相類似。本課題組在回顧文獻(xiàn)中也發(fā)現(xiàn)目前有不少對(duì)滋養(yǎng)細(xì)胞的研究也以惡性腫瘤獲得性特征作為切入點(diǎn)[10,33-36]，因此本課題組推測(cè)日后研究宮外孕Ⅰ號(hào)方對(duì)異位妊娠的作用可以借鑒腫瘤相關(guān)通路來完成。

綜上所述，宮外孕Ⅰ號(hào)方治療異位妊娠的主要成分可能是β-谷甾醇、芹菜素、二氫異丹參酮Ⅰ等，宮外孕Ⅰ號(hào)方治療異位妊娠主要通過NTRK1 等蛋白通過腫瘤信號(hào)通路、PI3K-Akt 信號(hào)通路、細(xì)胞周期、MAPK 信號(hào)通路、FoxO 信號(hào)通路等影響蛋白結(jié)合、細(xì)胞核質(zhì)、病毒過程等生物行為。本次網(wǎng)絡(luò)藥理實(shí)驗(yàn)同時(shí)發(fā)現(xiàn)了部分核心靶點(diǎn)分子及富集所得通路尚未被深入研究，同時(shí)在文獻(xiàn)回顧中發(fā)現(xiàn)目前此類研究的對(duì)象集中在包括流產(chǎn)、子癇、妊娠期糖尿病等病理妊娠的滋養(yǎng)細(xì)胞或體外宮內(nèi)妊娠滋養(yǎng)細(xì)胞株，多以基因敲除、分子檢測(cè)等作為干預(yù)手段。本文通訊作者目前已經(jīng)成功對(duì)輸卵管妊娠的絨毛組織進(jìn)行體外培養(yǎng)[37-38]，并使用宮外孕Ⅰ號(hào)方的加味湯劑對(duì)其進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究，證實(shí)該湯劑能夠阻斷細(xì)胞的黏附運(yùn)動(dòng)，抑制細(xì)胞的侵襲，減輕滋養(yǎng)細(xì)胞對(duì)輸卵管著床部位的過度浸潤(rùn)，上調(diào)其凋亡率，最終達(dá)到治療異位妊娠的目的[9,18,39]。但目前對(duì)于復(fù)方成分中不同藥物的藥量及相互作用分析仍缺乏系統(tǒng)研究模型，此后，我們可以進(jìn)一步建立研究模型以實(shí)驗(yàn)的方式來明確之間的區(qū)別。