包冉，張冬梅 ，魏穎軒，那松巴乙拉，寶山

（1 包頭市食品藥品檢驗檢測中心，內(nèi)蒙古 包頭；2 內(nèi)蒙古自治區(qū)國際蒙醫(yī)醫(yī)院，內(nèi)蒙古 呼和浩特）

0 引言

綽森哈倫-8 散由寒制紅石膏、木香、紫草、梔子、齒葉草、天竺黃、甘草、人工牛黃八味藥材組成[1,2]。臨床功效清訌熱，用于血熱頭痛，口渴目赤，中暑。梔子功能為瀉火除煩、清熱利濕。梔子是方中主要藥味之一，梔子苷是梔子的主要指標性成分之一，參照《中國藥典》2015 年版一部“梔子”項下含量測定方法，采用高效液相色譜法對本品中的梔子進行了含量測定方法研究[3-5]。

1 儀器與試藥

儀器U3000 型高效液相色譜儀；隔膜真空泵(鞏義市英峪儀器廠)；KQ-250DB 型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；Heal Force NW15UV 型超純水系統(tǒng)；ADVENTURERTM 型電子天平（萬分之 一）；Ohaus Discovery 型電子天平（十萬分之一）；FW400A 型多功能粉碎機（材茂科技有限公司）。

梔子苷對照品（批號：110749-201919），由中國食品藥品檢定研究院提供；供試品三批（批號：20190911、20190912、20190913），由內(nèi)蒙古國際蒙醫(yī)醫(yī)院提供，自制樣品一批（20190911）；甲醇、乙腈為色譜純；水為超純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性

采用Alltima C18柱(250mm×4.6mm，5μm)，以乙腈-水溶液(15 ∶85) 為流動相進行流動相條件摸索，流速1.0ml/min，柱溫33℃，進樣量10μl。梔子苷峰的理論塔板數(shù)均大于1500，與相鄰雜質(zhì)峰的分離度均大于1.5。

2.2 溶液配制

2.2.1 對照品溶液的配制

取梔子苷對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1ml含73μg 的溶液，即得。

2.2.2 供試品溶液的制備

取本品粉末約0.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25ml，稱定重量，超聲處理40min（功率250kW，頻率40kHz），放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，即得[6,7]。

2.3 標準曲線的繪制

取梔子苷對照品約7.3mg，精密稱定，置100ml 量瓶中，加純甲醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻(梔子苷實際濃度為：0.0734mg/ml)，然后吸取上述溶液1μl、3μl、5μl、7μl、10μl、12μl、15μl、20μl 分別進樣，按上述色譜條件測定，以峰面積對梔子苷的進樣量進行回歸分析，結(jié)果梔子苷在進樣體積在1μl-20μl 范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。回歸方程為，Y=1.35223X+0.07817，R2=0.99996。

2.4 重復(fù)性試驗

取同一批號供試品（批號：20190911）6 份，各約0.5g，精密稱定，按供試品溶液制備方法處理并測定梔子苷含量，6 份供試品梔子苷平均含量為4.2821mg/g，RSD 為1.4%，表明方法重復(fù)性良好。

2.5 穩(wěn)定性考察

取同一份供試品（批號：20190911）溶液，分別于0h、2h、4h、5h、6h、7h、8h 進樣測定，記錄峰面積，不同時間測定的峰面積RSD 為1.52%，試驗結(jié)果表明供試品溶液中梔子苷含量在8h 內(nèi)基本穩(wěn)定不變。

2.6 精密度實驗

取同一份供試品（批號：20190911）0.5008g，按供試品溶液的制備方法操作，連續(xù)進樣6 次，測定梔子苷峰面積積分值，測定供試品含量，RSD 為0.90%。

2.7 回收率實驗

取供試品（批號：20190911）9 份，均約0.25g，精密稱定，其中1、2、3 號各精密加入用甲醇配制的梔子苷對照品溶液(梔子苷濃度：0.1083mg/ml)5ml，4、5、6 號各精密加入上述對照品溶液10ml，7、8、9 號各精密加入上述對照品溶液15ml，分別按上述供試液制備方法和色譜條件測定每份含量，計算回收率，結(jié)果見表1。

表1 梔子苷加樣回收試驗結(jié)果

2.8 專屬性實驗

陰性對照試驗：按上述對照品和供試品溶液的制備方法制備供試品溶液和對照品溶液。另取按處方比例并以相同工藝制備的缺梔子的陰性對照，按供試品溶液制備法制得陰性對照溶液[8]。在上述色譜條件下，分別精密吸取對照品溶液、陰性對照溶液、供試品溶液各10μl，分別注入液相色譜儀，測得結(jié)果為：陰性對照色譜中在與梔子苷對照品以及供試品色譜相對應(yīng)的保留時間處無色譜峰出現(xiàn)，表明其他組分對梔子苷的測定無干擾。結(jié)果見圖1、2、3。

圖1 對照品色譜圖

圖2 供試品色譜圖

圖3 陰性對照色譜圖

3 樣品含量測定

取本品按供試品溶液的制備方法處理并測定，三批樣品及自制樣品的測定結(jié)果見表2。

表2 樣品中梔子苷的含量測定結(jié)果

4 討論

參照《中國藥典》2015 年版一部“梔子”項下的流動相比例進行流動相條件摸索，經(jīng)實驗驗證，分離效果好，色譜峰對稱，故將流動相定為以乙腈-水溶液(15 ∶85)。