宋超，段羚，趙艷霞，寶山，巴乙拉

（1 包頭市食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)中心，內(nèi)蒙古 包頭；2 內(nèi)蒙古國(guó)際蒙醫(yī)醫(yī)院，內(nèi)蒙古，呼和浩特）

0 引言

伊和·古日古木-13 丸為內(nèi)蒙古國(guó)際蒙醫(yī)醫(yī)院提供[1]，由西紅花、丁香、大托葉云實(shí)、麥冬、木香、訶子、川楝子、梔子、紫檀香、麝香、熊膽粉等13 味藥材組成。主要用于清肝熱、解毒、殺黏。主治肝腫大、肝衰、配制毒、肝硬化、肝中毒、腎損傷、尿閉、熱性亞瑪癥[2]。本研究對(duì)本制劑的梔子中梔子苷進(jìn)行了高效液相色譜法（high performance liquid chromatography，HPLC）含量測(cè)定方法研究[3]。對(duì)方法進(jìn)行試驗(yàn)研究后顯示，該測(cè)定方法具有很好的重現(xiàn)性，同時(shí)具有較強(qiáng)的專屬性，且組方中的其他成分對(duì)于梔子苷的測(cè)定不會(huì)產(chǎn)生任何的干擾。本研究對(duì)具體的試驗(yàn)情況進(jìn)行了詳細(xì)的研究。

1 儀器與試藥

1.1 主要儀器

日本島津LC-2010AHT 高效液相色譜儀，LC-10ADVP 輸液泵，SPD-10AVP 型檢測(cè)器；色譜柱為Alltima C18柱(250mm×4.6 mm，5μm) 色譜柱。Precisa 92SM-202A 型電子分析天平。

1.2 試劑與試藥

試劑：梔子苷對(duì)照品（批號(hào)：110749-201919），純度97.1%，提供方為中國(guó)食品藥品檢定研究院；供試品三批（批號(hào)：20 200226；20 200305；20200308），由內(nèi)蒙古國(guó)際蒙醫(yī)醫(yī)院提供，自制樣品一批，由包頭市食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)中心自制；甲醇、乙腈為色譜純；水為超純水；其他試劑均為分析純[4]。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn)

以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-水（15 ∶85)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為238nm。理論板數(shù)按梔子苷峰計(jì)算應(yīng)不低于 3000[5]。

2.2 溶液制備

2.2.1 對(duì)照品溶液的制備

取適量的梔子苷對(duì)照品進(jìn)行精密的稱定，在其中加入一定量的甲醇，制取成每1ml 含有30μg 的溶液，所得溶液即為對(duì)照品溶液。

2.2.2 供試品溶液的制備

取本品適量，研細(xì)，取約1g，精密稱定后將其放置于有塞蓋的錐形瓶中，并加入50ml 甲醇后稱取重量進(jìn)行超聲處理，時(shí)間為40min，將其冷卻處理后再次稱取重量，將失去的重量以甲醇補(bǔ)足，將所得溶液搖勻后進(jìn)行濾過(guò)處理，稱取出10ml 濾液并將其放置于25ml 的量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得[6]。

2.3 測(cè)定法

在精密吸取的條件下分別取出分別10μl 的對(duì)照品溶液及10μl 的供試品溶液，將液相色譜儀注入后進(jìn)行測(cè)定，即可獲得。

2.4 提取方法的選擇及提取時(shí)間的考察

參考《中國(guó)藥典》2015 年版一部[7]“梔子”項(xiàng)下，以甲醇作為提取溶劑進(jìn)行超聲處理，試驗(yàn)中考察了超聲20min、30min、40min、60min 等不同提取時(shí)間對(duì)提取效率的影響。通過(guò)分析得出，超聲處理40min 時(shí)得到含量最高的供試品中的梔子苷，因此將超聲提取時(shí)間定為40min。

2.5 專屬性

陰性對(duì)照試驗(yàn)：分別取供試品溶液和對(duì)照品溶液，另外取出相同工藝制備條件下的陰性對(duì)照（缺梔子），以供試品溶液的制備方法制取陰性對(duì)照溶液。在相同的色譜條件下分別吸取10μl 的對(duì)照品溶液、10μl 的陰性對(duì)照溶液和10μl 的供試品溶液，將其分別注入液相色譜儀，測(cè)得的結(jié)果顯示在相應(yīng)的保留時(shí)間下陰性對(duì)照色譜中沒(méi)有出現(xiàn)色譜峰，這就提示組方中的其他成分不會(huì)干擾到梔子苷的測(cè)定。

2.6 線性關(guān)系考察

取測(cè)定項(xiàng)下的對(duì)照品溶液，搖勻(梔子苷實(shí)際濃度為29.92μg/ml)，然后吸 取上述溶液1μl、3μl、5μl、7μl、10μl、12μl、15μl、20μl 分別進(jìn)樣，按上述色譜條件測(cè)定，以峰面積對(duì)梔子苷的進(jìn)樣量進(jìn)行回歸分析，結(jié)果梔子苷在進(jìn)樣體積在1-20μl 范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。回歸方程為Y=0.5045X+0.0699，R2=0.9996。

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取同一份供試品（批號(hào)：20200226）溶液，分別于0h、3h、6h、9h、12h、24h 進(jìn)樣測(cè)定，從數(shù)據(jù)可見，梔子苷在24h內(nèi)的峰面積積分值基本穩(wěn)定不變RSD 為0.18%（n=6）。

2.8 精密度試驗(yàn)

取同一份供試品（批號(hào)：20200226），連續(xù)進(jìn)樣6 次，將梔子苷峰面積積分值進(jìn)行測(cè)定。RSD 為0.43%(n=6)，表明精密度良好。

2.9 重復(fù)性試驗(yàn)

按測(cè)定項(xiàng)下的方法，對(duì)同一批樣品（批號(hào)20200226)進(jìn)行供試品溶液的制備，共制備6 份，將峰面積分值進(jìn)行測(cè)定后計(jì)算出含量。平均含量為3.56mg/g，RSD 為0.34%。表明該方法重復(fù)性良好。

2.10 加樣回收率試驗(yàn)

取已知梔子苷含量的樣品（批號(hào) 20200226 含量3.43mg/g）9 份，對(duì)其進(jìn)行精密的稱取后放置在具有塞蓋的錐形瓶中，并在其中的3 份中加入梔子苷對(duì)照品甲醇溶液，濃度為1.0052mg/ml，量為1ml，另外的3 份中加入對(duì)照品溶液2ml，按照測(cè)定方法進(jìn)行制備，對(duì)每份的含量進(jìn)行有效的測(cè)定，將回收率進(jìn)行計(jì)算后得出，平均回收率為98.81%，RSD 為0.81%。

2.11 耐用性試驗(yàn)

換不同廠家、不同型號(hào)的色譜柱，取重復(fù)性試驗(yàn)中的1、2 兩份供試品及對(duì)照品溶液，按測(cè)定項(xiàng)下方法操作并測(cè)定含量，結(jié)果見表1。

表1 不同色譜柱的耐用性試驗(yàn)

2.12 樣品測(cè)定

三批樣品中梔子苷的含量測(cè)定結(jié)果見表2。

表2 樣品中梔子苷的含量測(cè)定結(jié)果

2.13 梔子藥材的含量考察

取梔子藥材粉末約0.1g，精密稱定，按《中國(guó)藥典》2015 年一部“梔子”項(xiàng)下的方法處理并測(cè)定，梔子藥材中梔子苷的含量測(cè)定結(jié)果見表3。

表3 梔子藥材中梔子苷的含量測(cè)定結(jié)果

3 樣品含量限度的確定

3.1 樣品含量限度的確定

從表中數(shù)據(jù)可見，對(duì)梔子原料中的梔子苷含量進(jìn)行測(cè)定得出含量為41.60mg/g，進(jìn)行折算后得出供試品中梔子苷含量為3.78mg/g。

3.2 梔子苷的轉(zhuǎn)移率為91.53%。

《中國(guó)藥典》2015 年版一部第173 頁(yè)對(duì)梔子苷的含量設(shè)置了限度，因此供試品制定的含量限度為1.34mg/g。

暫定本品每1g 含梔子以梔子苷（C17H24O10)計(jì)，不得少于1.3mg[8]。